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    一种饲养层细胞、培养方法及应用
    2.
    发明授权
    一种饲养层细胞、培养方法及应用 有权 质押

    公开(公告)号：CN107236703B

    公开(公告)日：2021-06-01

    申请号：CN201710380719.6

    申请日：2017-05-25

    申请人： 佛山科学技术学院

    发明人： 赵姝灿 ,  陈志胜 ,  李东升 ,  张晓芳 ,  郑桂纯

    IPC分类号： C12N5/0775

    摘要： 本发明提供了一种饲养层细胞的培养方法，包括步骤：1)鸡骨髓间充质干细胞的获取；2)饲养层的制备。本发明打破了传统的以成纤维细胞作为饲养层的传统方法，避免了多次制备不同代次的成纤维细胞造成的不确定性与不稳定性；避免了异源细胞作为饲养层后产生的不利影响；所使用的细胞仍保持在早期胚胎期其扩增能力强和生存周期长；简化了实验操作步骤，节省了时间，降低实验成本。

    一种犬的临床用间充质干细胞冷藏保存液及其应用方法
    6.
    发明公开
    一种犬的临床用间充质干细胞冷藏保存液及其应用方法 审中-实审

    公开(公告)号：CN115590018A

    公开(公告)日：2023-01-13

    申请号：CN202211455920.3

    申请日：2022-11-21

    申请人： 佛山科学技术学院(CN)

    发明人： 王丙云 ,  何诗 ,  冼伟杭 ,  李东升 ,  陈胜锋 ,  陈志胜 ,  刘淑英 ,  周鑫 ,  吴尚聪

    IPC分类号： A01N1/02

    摘要： 本发明提供一种犬的临床用间充质干细胞冷藏保存液，包括以下原料：注射用水、犬白蛋白、葡萄糖、枸橼酸钠、枸橼酸、氯化钠、碳酸氢钠、葡聚糖40以及水溶性维生素E；按照重量比计算，注射用水、犬白蛋白、葡萄糖、枸橼酸钠、枸橼酸、氯化钠、碳酸氢钠、葡聚糖40、水溶性维生素E的投料比为100:10~20:0.9~1.2:0.25~0.6:0.015~0.04:0.6~0.7:0.035~0.04:1~2:0.00002~0.00008。本发明中所制备得到的犬间充质干细胞冷藏保存液，可直接用于临床，能在冷藏条件下的7天内维持犬间充质干细胞的活性和稳定性，无毒副作用，并且无需超低温保存，适用于广泛推广应用。

    一种鸡生殖新月来源PGCs的分离培养方法
    7.
    发明公开
    一种鸡生殖新月来源PGCs的分离培养方法 有权

    公开(公告)号：CN104911144A

    公开(公告)日：2015-09-16

    申请号：CN201510262185.8

    申请日：2015-05-21

    申请人： 佛山科学技术学院

    发明人： 王丙云 ,  陈志胜 ,  陈胜锋 ,  计慧琴 ,  李东升 ,  冼琼珍

    IPC分类号： C12N5/0735

    摘要： 本发明所述一种鸡生殖新月来源PGCs的分离培养方法，包括以下步骤：(1)分离方法是通过贴滤膜法从种蛋中取出无卵黄污染的干净鸡胚，然后从鸡胚中获取生殖新月组织；(2)用胰酶将生殖新月组织消化成单细胞，然后对单细胞中的PGCs进行纯化；(3)将纯化后PGCs置入含有BRL-3A细胞饲养层和PGCs完全培养液的培养体系中培养。本发明中的PGCs来源于鸡胚生殖新月区，5-8HH期鸡胚生殖新月区的PGCs含量较高，具有更好增殖活力和维持高水平的多能性，贴滤膜法分离鸡胚胚盘，操作简单，重复性好，从种蛋中分离出无卵黄污染的干净鸡胚，获得较为纯净的PGCs。分离培养的PGCs可大量增殖，用于后续实验操作。

    一种鸡生殖新月来源PGCs的分离培养方法
    8.
    发明授权
    一种鸡生殖新月来源PGCs的分离培养方法 有权

    公开(公告)号：CN104911144B

    公开(公告)日：2018-08-24

    申请号：CN201510262185.8

    申请日：2015-05-21

    申请人： 佛山科学技术学院

    发明人： 王丙云 ,  陈志胜 ,  陈胜锋 ,  计慧琴 ,  李东升 ,  冼琼珍

    IPC分类号： C12N5/0735

    摘要： 本发明所述一种鸡生殖新月来源PGCs的分离培养方法，包括以下步骤：(1)分离方法是通过贴滤膜法从种蛋中取出无卵黄污染的干净鸡胚，然后从鸡胚中获取生殖新月组织；(2)用胰酶将生殖新月组织消化成单细胞，然后对单细胞中的PGCs进行纯化；(3)将纯化后PGCs置入含有BRL‑3A细胞饲养层和PGCs完全培养液的培养体系中培养。本发明中的PGCs来源于鸡胚生殖新月区，5‑8HH期鸡胚生殖新月区的PGCs含量较高，具有更好增殖活力和维持高水平的多能性，贴滤膜法分离鸡胚胚盘，操作简单，重复性好，从种蛋中分离出无卵黄污染的干净鸡胚，获得较为纯净的PGCs。分离培养的PGCs可大量增殖，用于后续实验操作。

    一种分离与原代培养胎盘壁蜕膜间充质干细胞的方法
    9.
    发明公开
    一种分离与原代培养胎盘壁蜕膜间充质干细胞的方法 审中-实审

    公开(公告)号：CN108300689A

    公开(公告)日：2018-07-20

    申请号：CN201810051431.9

    申请日：2018-01-16

    申请人： 佛山科学技术学院

    发明人： 赵姝灿 ,  陈志胜 ,  李东升 ,  郑桂纯 ,  张晓芳

    IPC分类号： C12N5/0775

    摘要： 本发明公开了一种分离与原代培养胎盘壁蜕膜间充质干细胞的方法，其包括以下步骤：1)分离及前处理：将取到的胎盘样品浸泡消毒液30s，清洗数次至液体不再呈血红色，剥离羊膜，分离壁蜕膜组织，用PBS清洗后剪碎；2)消化：I型胶原酶消化2h，加入完全培养基终止消化，得到细胞混悬液；3)原代培养：将细胞悬浮液倒入200目滤网过滤，收集滤液1200rpm离心5min，弃上清，下层细胞经无血清培养基反复吹打混匀至散开后接种到明胶包被的培养皿中，以37℃、5％CO2浓度的环境条件下培养。本发明并且通过调整消化液的选用和原代培养中的工艺参数，从而获得比胎盘间充质干细胞活性更好，纯化程度更高的胎盘壁蜕膜间充质干细胞。

    一种犬MSC外泌体制剂及其制备方法
    10.
    发明公开
    一种犬MSC外泌体制剂及其制备方法 无效

    公开(公告)号：CN108143748A

    公开(公告)日：2018-06-12

    申请号：CN201711449491.8

    申请日：2017-12-27

    申请人： 佛山科学技术学院 ,  广东维赛生物科技有限公司

    发明人： 王丙云 ,  詹小舒 ,  罗东章 ,  李东升 ,  陈志胜 ,  陈胜锋 ,  罗兆益

    IPC分类号： A61K35/28 ,  A61P17/02 ,  A61P29/00 ,  C12N5/0775

    摘要： 本发明提供了一种犬MSC外泌体制剂及其制备方法。制备方法包括步骤：无外泌体胎牛血清的制备和犬MSC来源外泌体的分离。该制备方法制得的犬MSC外泌体制剂，其提取到的外泌体体积小，容易在体内循环，易于到达损伤组织；并且直接使用外泌体能保证其在体内剂量稳定，一定程度上保证了治疗效果且外泌体无任何毒副作用，为临床大规模使用奠定了基础。可用于以犬为实验模型，开发一种治疗皮肤损伤的犬MSC外泌体制剂，能以伤口周围注射或者直接敷于创面的方式对犬的皮肤伤口进行修复，抑制炎症发生，加速愈合并减少瘢痕形成。