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公开(公告)号：CN117660510A
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202311519617.X
申请日：2023-11-15
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种副鸡禽杆菌基因缺失与筛选系统的构建方法，具体包括如下步骤：步骤10：将质粒pSJ001导入副鸡禽杆菌，经与抗性基因相对应的抗生素筛选，得到第一次同源重组的菌株；步骤20：将质粒pSJ002导入第一次重组菌株，经蓝白斑筛选系统筛选得到第二次同源重组的菌株；该方法应用到菌株筛选后，通过正向筛选使用所对应的抗生素筛选出含有lacZ基因和抗性基因的目标菌株，反向筛选使用X‑Gal蓝白系统进行筛选。两种方法的结合后，可以直观、简便且高效地筛选出副鸡禽杆菌基因缺失突变株。同时本发明还公开了该采用重组表达载体系统敲除副鸡禽杆菌的基因的应用。
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公开(公告)号：CN117625666A
公开(公告)日：2024-03-01
申请号：CN202211020042.2
申请日：2022-08-24
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种多杀性巴氏杆菌无抗性标记基因整合菌株的构建方法及其应用。本发明将点突变基因pheSm与温度敏感复制子Ts‑ori、卡那霉素抗性基因kan及大肠杆菌ColE1复制子构建得到温度敏感质粒pHYF01；接着通过无痕重组将质粒pHYF01与靶基因hptC的上、下同源臂片段连接构建得到重组质粒pHYF02；然后将重组质粒pHYF02电击转化禽多杀性巴氏杆菌，经卡那霉素筛选获得hptC重组菌株；再利用卡那霉素抗性筛选获得单交换菌株，利用四氯苯丙氨酸抗性筛选得到双交换菌株，即所述多杀性巴氏杆菌无抗性标记基因整合菌株。该整合菌株毒力显著降低，可用于开发禽多杀性巴氏杆菌疫苗。
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公开(公告)号：CN115216478A
公开(公告)日：2022-10-21
申请号：CN202210618518.6
申请日：2022-06-01
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明公开一种禽多杀性巴氏杆菌内毒素减毒灭活疫苗菌株的构建方法及应用。本发明通过构建表达LpxE基因的重组质粒，进行电击转化到禽多杀性巴氏杆菌中，成功获得内毒素减毒菌株。本发明采用优化后的LpxE基因特异性的去除也野生型菌株上部分类脂A1位上的磷酸基团，成功改造巴氏杆菌；且内毒素致凝活性显著高于野生型菌株，表明脂多糖结构改造后内毒素毒性下降；同时，能使细胞因子IL‑6，TNF‑α和趋化因子CXCL2的含量显著下降，减少MH‑S细胞促炎因子的产生。采用内毒素减毒菌株制备的灭活疫苗与野生型菌株灭活疫苗相比，保护效率更高，安全性也更好，能更好地应用于禽多杀性巴氏杆菌病的防治中。
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公开(公告)号：CN118147030A
公开(公告)日：2024-06-07
申请号：CN202410321892.9
申请日：2024-03-20
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/117 , C12R1/19
摘要： 本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种提高禽用CpG产量的方法。本发明提供了一种大豆蛋白胨的应用量范围为16～30g/L，酵母粉的应用量范围为8～20g/L，甘油为8～25g/L的培养基。使用该培养基培养CpG合成工程菌，可以有效提高CpG的产量。此外，通过将溶氧量维持在30％，通过采取指数流法加补料策略进行高密度发酵，以及30℃到42℃的变温培养策略，进一步的提高了CpG的产量，最高能达到853mg/L的最高质粒产量，平均质粒产量达到538mg/L。对比摇瓶培养的质粒产量，本发明的发酵工艺将质粒产量提高了50～100倍。
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公开(公告)号：CN113462661B
公开(公告)日：2024-05-07
申请号：CN202110748243.3
申请日：2021-07-01
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明公开了从玉米中分离的SIZ1蛋白及其编码基因和它们在品种改良中的应用。本发明利用CRISPR/Cas9转基因技术敲除玉米中ZmSIZ1a和ZmSIZ1b基因筛选得到两个突变体材料，因基因ZmSIZ1a和ZmSIZ1b功能异常，导致植株体内蛋白发生SUMO化修饰的能力严重受损。与野生型植株相比，突变体植株在热胁迫条件下全局性SUMO化修饰能力严重受损；同时，突变体籽粒在实验室条件和田间条件下均表现出易感穗粒腐病的表型，表明ZmSIZ1a和ZmSIZ1b蛋白对玉米蛋白发生SUMO化修饰及玉米抗穗粒腐病起着至关重要的调控作用，能够应用于调控玉米蛋白SUMO化修饰以及培育抗穗粒腐病玉米新品种。
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公开(公告)号：CN117487832A
公开(公告)日：2024-02-02
申请号：CN202311404387.2
申请日：2023-10-26
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明属于生物医药技术领域，公开了一种禽用CpG生物合成质粒的构建与佐剂活性检测方法。具体公开了一种禽用CpG生物合成质粒，所述禽用CpG生物合成质粒包括CpG基序和Kan抗性基因。本发明构建和纯化得到一种含CpG基序的质粒，其单独使用或与其他佐剂联合使用可以有效增强抗原免疫原性。
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公开(公告)号：CN115927426A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202210877323.3
申请日：2022-07-25
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明涉及多杀性巴氏杆菌基因缺失突变株的筛选系统及其应用，属于生物技术领域，本发明首先构建含有多杀性巴氏杆菌glgB和opa基因敲除盒与lacZ基因的重组表达载体，将所述重组表达载体导进改造目的菌株C48‑1株，分别通过利用温度敏感系统与蓝白斑筛选，方便高效地筛选出突变株。该方法实现了多杀性巴氏杆菌基因的成功敲除，并能够大幅度地减少了筛选突变株的时间和精力，达到高效快速地筛选突变株。
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公开(公告)号：CN117625501A
公开(公告)日：2024-03-01
申请号：CN202211048959.3
申请日：2022-08-30
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/75 , C12N15/31 , C12N15/54 , C12N15/55 , A61K35/742 , A61P1/00 , C12R1/125
摘要： 本发明公开了一株高效生产微菌素Y的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株。本发明通过对mcyABCD基因序列和表达原件的改造，并将其同时插入至枯草芽孢杆菌基因组Amye和SigF两个基因中，得到高效生产MccY的枯草芽孢杆菌工程菌株。本发明同时插入Amye和SigF基因，能够使MccY的共表达量上升，相比单个基因或者质粒表达量显著提升；其表达产物对鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌具有良好的杀伤性。同时得到的工程菌株不会产生芽孢，减少芽孢污染，在高温下可以失活，更有利于灭活菌。本发明提供的工程菌株可以低成本，能更安全的生产MccY，能够通过活菌或灭活菌的方式直接添加，作为良好的治疗细菌性疾病产品。
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公开(公告)号：CN115216478B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202210618518.6
申请日：2022-06-01
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明公开一种禽多杀性巴氏杆菌内毒素减毒灭活疫苗菌株的构建方法及应用。本发明通过构建表达LpxE基因的重组质粒，进行电击转化到禽多杀性巴氏杆菌中，成功获得内毒素减毒菌株。本发明采用优化后的LpxE基因特异性的去除也野生型菌株上部分类脂A1位上的磷酸基团，成功改造巴氏杆菌；且内毒素致凝活性显著高于野生型菌株，表明脂多糖结构改造后内毒素毒性下降；同时，能使细胞因子IL‑6，TNF‑α和趋化因子CXCL2的含量显著下降，减少MH‑S细胞促炎因子的产生。采用内毒素减毒菌株制备的灭活疫苗与野生型菌株灭活疫苗相比，保护效率更高，安全性也更好，能更好地应用于禽多杀性巴氏杆菌病的防治中。
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公开(公告)号：CN115927426B
公开(公告)日：2023-09-19
申请号：CN202210877323.3
申请日：2022-07-25
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明涉及多杀性巴氏杆菌基因缺失突变株的筛选系统及其应用，属于生物技术领域，本发明首先构建含有多杀性巴氏杆菌glgB和opa基因敲除盒与lacZ基因的重组表达载体，将所述重组表达载体导进改造目的菌株C48‑1株，分别通过利用温度敏感系统与蓝白斑筛选，方便高效地筛选出突变株。该方法实现了多杀性巴氏杆菌基因的成功敲除，并能够大幅度地减少了筛选突变株的时间和精力，达到高效快速地筛选突变株。
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