基于CRSIPR技术构建14-3-3ε基因敲除细胞株的方法及其应用

    公开(公告)号:CN113186187B

    公开(公告)日:2023-03-17

    申请号:CN202110386494.1

    申请日:2021-04-12

    Abstract: 本发明公开了一种基于CRSIPR技术构建14‑3‑3ε基因敲除细胞株的方法及其应用,属于生物技术领域。本发明提供一种敲除14‑3‑3ε基因的sgRNA序列,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明利用CRISPR‑Cas9技术首次在鸡成纤维细胞系DF‑1细胞基因组上敲除14‑3‑3ε基因,使得14‑3‑3ε蛋白的表达完全丧失,获得14‑3‑3ε敲除的DF‑1细胞株,且敲除细胞株活性、生长速度等方面均与对照细胞无明显差异,是较为理想的DF‑1敲除的细胞模型;操作简便,周期短,成本低,改造后细胞株稳定,可用于研究14‑3‑3ε蛋白的生物学功能。

    一种鸡干扰素IFN-λ与IFN-α的融合蛋白

    公开(公告)号:CN106674354B

    公开(公告)日:2020-10-16

    申请号:CN201710078269.5

    申请日:2017-02-14

    Inventor: 任涛 丁诗月 谢鹏

    Abstract: 本发明属于一种生物工程技术领域干扰素融合制剂鸡λ、α干扰素基因融合表达及其生产方法和临床应用。该生物工程干扰素融合制剂通过提取CEF细胞总RNA,设计特异性引物,克隆鸡λ、α干扰素基因,通过互补疏水性柔性氨基酸接头将其融合,获得完整的鸡λ、α干扰素融合基因,将其克隆至19‑T载体使其大量克隆表达成功后,再使其连接pET‑32a载体大量表达;对产物鉴定,确定其在包涵体表达后,进行变性,纯化及复性;对其抗病毒活性检测以及临床应用效果评价。本发明成功构建了重组融合鸡λ、α干扰素原核表达质粒pET32a‑chIFN‑λ+α,实现了鸡λ、α干扰素在大肠杆菌原核表达系统上1:1融合表达。

    鸡传染性支气管炎病毒5b ELISA抗体检测试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN108680741A

    公开(公告)日:2018-10-19

    申请号:CN201810265000.2

    申请日:2018-03-28

    CPC classification number: G01N33/558 G01N33/56983

    Abstract: 本发明属于生物技术领域,涉及一种鸡传染性支气管炎病毒5b ELISA抗体检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括由重组表达的IBV非结构蛋白5b包被的ELISA反应板,此外还含有稀释的IgG酶标抗体溶液、封闭液、洗涤液、样品稀释液、阳性对照样品、阴性对照样品、显色液和终止液。本发明以非结构蛋白5b作为包被抗原,成本低。本试剂盒的使用具有方便快捷、敏感性高、特异性好等优点,为IBV抗体监测、流行病学调查以及将来对IBV的疾病净化提供了一种新的有效的检测手段。

    一种基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒及其检测方法

    公开(公告)号:CN105092559B

    公开(公告)日:2018-01-26

    申请号:CN201510511206.5

    申请日:2015-08-19

    Abstract: 本发明公开了一种基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒及其检测方法,属于光谱学和分子诊断领域。所述基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒包括拉曼探针溶液和硝酸纤维素膜;所述的拉曼探针溶液为纳米金、3,3'‑二硫双(6‑硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯复合物与新城疫抗体偶联溶液。检测方法为在硝酸纤维素膜上滴加新城疫病毒,经过封闭和洗涤步骤后与偶联有抗体的拉曼探针孵育,在硝酸纤维素膜上形成“固相抗原‑标记抗体”半夹心结构的免疫复合物,最后对免疫复合物进行拉曼光谱检测,即可以高特异性的识别待测物的增强的拉曼分子信号。本发明涉及的检测试剂盒及其检测方法特异性强,对新城疫病毒的检测限达103PFU/mL,灵敏度高。

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