一种快速制备丝状真菌PCR模板的试剂盒和方法

    公开(公告)号:CN116574783A

    公开(公告)日:2023-08-11

    申请号:CN202310642034.X

    申请日:2023-06-01

    IPC分类号: C12Q1/6806 C12Q1/6895

    摘要: 本申请公开了一种快速制备丝状真菌PCR模板的试剂盒和方法。本申请取菌龄1‑2d的丝状真菌菌落,挑取菌苔;向菌苔中加入裂解液,放入研磨杵研磨,在25‑37℃静置5‑30min,取上清液得到丝状真菌PCR模板。裂解液包括0.1‑1mol/LNaOH、0.1‑0.5mol/LTris‑HCl、0.01‑0.05mol/LEDTA、0.01‑0.1mol/LCaCl2、0.1%‑0.5%triton X‑100。本发明方法无需进行洗涤提纯等操作,流程简单,最快仅需5min即可获得PCR模板,大大缩短了提取基因组这一分子改造基本实验的时间,大幅提高了丝状真菌基因编辑的效率。

    一株异源表达木聚糖酶/纤维素酶CbXyn10c基因的里氏木霉菌株及应用

    公开(公告)号:CN113943662A

    公开(公告)日:2022-01-18

    申请号:CN202111195832.X

    申请日:2021-10-14

    摘要: 本发明公开了一株异源表达木聚糖酶/纤维素酶CbXyn10c基因的里氏木霉菌株与应用。它是基于细菌Caldicellulosiruptor bescii来源的双功能木聚糖酶/纤维素酶CbXyn10c基因经过密码子优化,通过整合到里氏木霉中天冬氨酸蛋白酶基因的位置,从而获得成功表达CbXyn10C的里氏木霉菌株3株。该菌株成功过表达经密码子优化的CbXyn10c基因,命名为:CbXyn10C‑7,‑10,‑12里氏木霉菌株。本发明的目的是确定CbXyn10c基因可以通过密码子优化及整合到里氏木霉关键基因位点成功异源表达,可应用于同时提高里氏木霉纤维素酶/木聚糖酶的活性。

    用于表达荧光蛋白的肉葡萄球菌质粒及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN111979260A

    公开(公告)日:2020-11-24

    申请号:CN202010854403.8

    申请日:2020-08-24

    摘要: 本发明属于生物监测技术领域,具体为一种在肉葡萄球菌用于稳定表达荧光蛋白的质粒及其构建方法和应用。本发明将启动子Peftu片段、信号肽Tat片段、信号肽Sec片段和红色荧光蛋白DsRed的突变体DsRed-Monomer片段,构建得到质粒pBT2-E-DsRed-M、pBT2-E-Tat-DsRed-M和pBT2-E-Sec-DsRed-M。通过将质粒转化到肉葡萄球菌中,使其能够表达单体红色荧光蛋白。该技术可以代替传统的染料标记,对肉葡萄球菌在发酵过程动态变化、葡萄球菌在细胞侵染以及动物侵染过程中的生物行为实现实时观察动态研究,并为肉葡萄球菌在合成生物学与系统生物学等领域的应用提供依据。

    一株高产L-苹果酸的黑曲霉基因工程菌株及构建方法和应用

    公开(公告)号:CN117264785A

    公开(公告)日:2023-12-22

    申请号:CN202311238797.4

    申请日:2023-09-22

    摘要: 本发明公开了一株高产L‑苹果酸的黑曲霉基因工程菌株及构建方法和应用。本发明以经紫外诱变所得的高产L‑苹果酸菌株为出发菌株,利用基因敲除技术破坏草酰乙酸水解酶基因oah,并过表达了黑曲霉来源的四碳二羧酸转运蛋白基因dct3,从而获得了高效生产L‑苹果酸的基因工程菌株。经过72小时摇瓶发酵,L‑苹果酸的含量可达到21.08g/L;与出发菌株相比,转化率由0.08mol/mol提高到0.123mol/mol,提高了54%。将本发明的基因工程菌株应用于L‑苹果酸的发酵生产,能够显著提高L‑苹果酸的产量,且发酵周期短,L‑苹果酸的纯度高,满足了食品领域严格的生产菌株要求,为L‑苹果酸生产提供了优异菌株。

    一种表面展示脂肪酶的肉葡萄球菌及构建方法和应用

    公开(公告)号:CN116396975A

    公开(公告)日:2023-07-07

    申请号:CN202310267537.3

    申请日:2023-03-20

    摘要: 本发明公开了一种表面展示脂肪酶的肉葡萄球菌及构建方法和应用。所述表面展示脂肪酶的肉葡萄球菌为含有重组质粒pBT2‑SPP‑LIP‑CBD‑XM的S.carnosus TM300菌株。利用纤维素进行细胞固定化后,细胞表面展示的脂肪酶最适温度可达45℃,比游离细胞的脂肪酶更能够耐受高温,并且在40℃保温3h后仍能保留80%左右的酶活,温度稳定性较好。另外,本申请构建得到的S.carnosus TM300/P‑SPP‑LIP‑CBD‑XM重组菌株能够用于生产生物柴油,生物柴油转化率能够达到77%。本申请为生物柴油的制备提供了新思路和有应用价值的实验材料,具有较好的应用前景。