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公开(公告)号：CN114107309B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202111391569.1
申请日：2021-11-19
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N15/115 , C12N15/75 , C12N15/67 , C12N1/21 , C12R1/125
摘要： 本发明公开了一种非天然茶碱RNA分子开关，属于基因工程技术领域。本发明通过设计随机序列获得一系列非天然茶碱核糖开关，以绿色荧光蛋白基因为目的基因，通过对本底荧光强度/OD600、诱导后荧光强度/OD600和诱导率三个指标综合评价筛选，得到了一种可调控外源蛋白表达的茶碱核糖开关2nt。当茶碱核糖开关2nt与启动子P43组合时，诱导水平高与不含有茶碱核糖开关的表达水平相近，诱导率达到6.5倍。当以天冬氨酶和β‑葡糖醛酸苷酶基因为目的基因时，加入4mM茶碱溶液，可以使两种酶均成功受诱导而表达。该过程中不需要其他蛋白因子的参与，并且能够有效快速地实现基因调控。
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公开(公告)号：CN116286814A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202211197866.7
申请日：2020-12-09
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌高效人工终止子及其应用，属于基因工程技术领域。本发明首先对不同的终止子的活性进行表征，接下来使用不同终止子测定平台对终止子的终止次效率进行测定，得到了一系列可提高目的蛋白产量的新型终止子，以绿色荧光蛋白基因作为终止子上游基因，以红色荧光蛋白基因作为终止子下游基因，表征终止子对上下游基因的调控水平。结果表明，这些新型终止子对于提高上游基因表达量和抑制下游基因表达量都有良好的效果。将一系列不同终止子应用于纳豆激酶和普鲁兰酶重组蛋白表达中，结果表明，这些终止子有助于提高蛋白的酶活和蛋白表达量的提升，这对在枯草芽孢杆菌中生产目的蛋白具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN111269926A
公开(公告)日：2020-06-12
申请号：CN201911414867.0
申请日：2019-12-31
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种钴离子诱导型蛋白表达系统及应用，属于生物工程技术领域。本发明通过将响应钴离子的阻遏蛋白RcnR及其操纵序列rcnO与来源于枯草芽孢杆菌的强启动子Pveg构建在一起，得到了钴离子诱导型高效基因表达系统。当利用该系统表达腈水合酶时，以500μM钴离子作为诱导剂，酶活最高达到106.2±4.6U/mL，接近使用IPTG诱导系统的水平(121.4±4.0U/mL)。在利用该钴离子诱导型系统表达腈水合酶过程中，钴离子同时作为腈水合酶的诱导剂和金属配体，不需要额外添加化学诱导剂，降低了生产成本，简化了生产工艺。
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公开(公告)号：CN112481265B
公开(公告)日：2022-11-01
申请号：CN202011451933.4
申请日：2020-12-09
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了枯草芽孢杆菌人工终止子及其应用，属于基因工程技术领域。本发明首先对不同的终止子的活性进行表征，接下来使用不同终止子测定平台对终止子的终止次效率进行测定，得到了一系列可提高目的蛋白产量的新型终止子，以绿色荧光蛋白基因作为终止子上游基因，以红色荧光蛋白基因作为终止子下游基因，表征终止子对上下游基因的调控水平。结果表明，这些新型终止子对于提高上游基因表达量和抑制下游基因表达量都有良好的效果。将一系列不同终止子应用于纳豆激酶和普鲁兰酶重组蛋白表达中，结果表明，这些终止子有助于提高蛋白的酶活和蛋白表达量的提升，这对在枯草芽孢杆菌中生产目的蛋白具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN111269926B
公开(公告)日：2021-09-28
申请号：CN201911414867.0
申请日：2019-12-31
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种钴离子诱导型蛋白表达系统及应用，属于生物工程技术领域。本发明通过将响应钴离子的阻遏蛋白RcnR及其操纵序列rcnO与来源于枯草芽孢杆菌的强启动子Pveg构建在一起，得到了钴离子诱导型高效基因表达系统。当利用该系统表达腈水合酶时，以500μM钴离子作为诱导剂，酶活最高达到106.2±4.6U/mL，接近使用IPTG诱导系统的水平(121.4±4.0U/mL)。在利用该钴离子诱导型系统表达腈水合酶过程中，钴离子同时作为腈水合酶的诱导剂和金属配体，不需要额外添加化学诱导剂，降低了生产成本，简化了生产工艺。
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公开(公告)号：CN114107309A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111391569.1
申请日：2021-11-19
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N15/115 , C12N15/75 , C12N15/67 , C12N1/21 , C12R1/125
摘要： 本发明公开了一种非天然茶碱RNA分子开关，属于基因工程技术领域。本发明通过设计随机序列获得一系列非天然茶碱核糖开关，以绿色荧光蛋白基因为目的基因，通过对本底荧光强度/OD600、诱导后荧光强度/OD600和诱导率三个指标综合评价筛选，得到了一种可调控外源蛋白表达的茶碱核糖开关2nt。当茶碱核糖开关2nt与启动子P43组合时，诱导水平高与不含有茶碱核糖开关的表达水平相近，诱导率达到6.5倍。当以天冬氨酶和β‑葡糖醛酸苷酶基因为目的基因时，加入4mM茶碱溶液，可以使两种酶均成功受诱导而表达。该过程中不需要其他蛋白因子的参与，并且能够有效快速地实现基因调控。
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公开(公告)号：CN112481265A
公开(公告)日：2021-03-12
申请号：CN202011451933.4
申请日：2020-12-09
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了枯草芽孢杆菌人工终止子及其应用，属于基因工程技术领域。本发明首先对不同的终止子的活性进行表征，接下来使用不同终止子测定平台对终止子的终止次效率进行测定，得到了一系列可提高目的蛋白产量的新型终止子，以绿色荧光蛋白基因作为终止子上游基因，以红色荧光蛋白基因作为终止子下游基因，表征终止子对上下游基因的调控水平。结果表明，这些新型终止子对于提高上游基因表达量和抑制下游基因表达量都有良好的效果。将一系列不同终止子应用于纳豆激酶和普鲁兰酶重组蛋白表达中，结果表明，这些终止子有助于提高蛋白的酶活和蛋白表达量的提升，这对在枯草芽孢杆菌中生产目的蛋白具有重要的应用价值。
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