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公开(公告)号：CN118165904A
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202410264579.6
申请日：2024-03-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种α‑1,3‑葡聚糖磷酸化酶及其在抗消化α‑葡聚糖制备中的应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明以质粒pET‑24a(+)为表达载体，以Escherichia coli BL21为表达宿主，实现了来源于Paenibacillus sp.HMSSN‑139的α‑1,3‑葡聚糖磷酸化酶α‑1,3‑葡聚糖磷酸化酶的表达。并将重组大肠杆菌表达的α‑1,3‑葡聚糖磷酸化酶用于生产含α‑1,3键抗消化α‑葡聚糖，产率可达58.31％～65.66％，可用于食品、医药等领域抗消化α‑葡聚糖的工业化生产。
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公开(公告)号：CN113981024B
公开(公告)日：2023-09-08
申请号：CN202111405249.7
申请日：2021-11-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种重组4,6‑α‑葡萄糖基转移酶GTFC及其在抗消化型低热量α‑葡聚糖生产中的应用，属于基因工程技术领域。本发明中将来源于Bacillus sporothermodurans 4,6‑α‑葡萄糖基转移酶GtfC基因转入枯草芽孢杆菌CCTCCM 2016536异源表达，利用重组枯草芽孢杆菌产4,6‑α‑葡萄糖基转移酶GTFC。在淀粉的制备过程中添加所述4,6‑α‑葡萄糖基转移酶GTFC，可将淀粉改造成一种新型α‑葡聚糖，这种α‑葡聚糖产物在体外消化模拟实验中表现出少量释放葡萄糖抗消化能力。利用本发明提供的重组枯草芽孢杆菌和应用方法，可以使4,6‑α‑葡萄糖基转移酶GTFC的酶活达到436.1U/mL，α‑葡聚糖产物的α‑1,6糖苷键比率达到79％，分子量大小为5383Da。因而本发明对于工业化生产制备低热量型抗消化α‑葡聚糖产品具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN112322602B
公开(公告)日：2022-05-10
申请号：CN202011209142.0
申请日：2020-11-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种共表达磷脂酶促进蛋白在枯草芽孢杆菌中胞外表达的方法，属于生物工程、酶工程、微生物工程技术领域。本发明将磷脂酶和目标蛋白在枯草芽孢杆菌中共表达，可实现胞内定位目标蛋白胞外表达，可以使海藻糖合酶的胞外分泌量达到5.8～6.2U/mL，并使分支酶的胞外分泌量达到456～580U/mL，提高生产效率、简化后提取工艺，为规模化生产目的蛋白提供了应用基础，具有较高的学术意义和应用价值。
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公开(公告)号：CN111560361B
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202010466158.3
申请日：2020-05-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高AA‑2G产量的环糊精葡萄糖基转移酶突变体，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过对来源于Bacillus circulans 251的环糊精葡萄糖基转移酶进行改造，得环糊精葡萄糖基转移酶突变体Y195F。以廉价的淀粉或淀粉衍生物为底物，利用突变体Y195F催化生产AA‑2G，AA‑2G产量可达29g/L，较野生型提高了52.6％。
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公开(公告)号：CN113981024A
公开(公告)日：2022-01-28
申请号：CN202111405249.7
申请日：2021-11-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种重组4,6‑α‑葡萄糖基转移酶GTFC及其在抗消化型低热量α‑葡聚糖生产中的应用，属于基因工程技术领域。本发明中将来源于Bacillus sporothermodurans 4,6‑α‑葡萄糖基转移酶GtfC基因转入枯草芽孢杆菌CCTCCM 2016536异源表达，利用重组枯草芽孢杆菌产4,6‑α‑葡萄糖基转移酶GTFC。在淀粉的制备过程中添加所述4,6‑α‑葡萄糖基转移酶GTFC，可将淀粉改造成一种新型α‑葡聚糖，这种α‑葡聚糖产物在体外消化模拟实验中表现出少量释放葡萄糖抗消化能力。利用本发明提供的重组枯草芽孢杆菌和应用方法，可以使4,6‑α‑葡萄糖基转移酶GTFC的酶活达到436.1U/mL，α‑葡聚糖产物的α‑1,6糖苷键比率达到79％，分子量大小为5383Da。因而本发明对于工业化生产制备低热量型抗消化α‑葡聚糖产品具有重要的意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113981022A
公开(公告)日：2022-01-28
申请号：CN202111405478.9
申请日：2021-11-24
Applicant: 江南大学
IPC: C12P19/08 , C12P19/18 , C12N1/21 , C12N15/75 , C12N9/10 , A23L2/52 , A23L29/30 , A23L33/21 , A61K8/60 , A61K8/66 , A61Q19/00 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了4,6‑α‑葡萄糖基转移酶及其在慢消化储能型分支α‑葡聚糖生产中的应用，属于基因工程技术领域。本发明利用来源于Geobacillus sp.12AMOR1的4,6‑α‑葡萄糖基转移酶GtfD、以淀粉或含有淀粉的物质为底物，制备得到富含α,1‑6糖苷键比例的α‑葡聚糖，所述α‑葡聚糖分子量较小，具备良好的可溶性，且其能够平稳缓慢、长效释放葡萄糖的储能能力，可以很好地满足现有工业生产中对储存葡萄糖能力的要求。
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公开(公告)号：CN112094835A
公开(公告)日：2020-12-18
申请号：CN202011015343.7
申请日：2020-09-24
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/42 , C12N15/56 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12P19/14 , C12P19/02 , C12P19/12 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12P19/44 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种β‑葡萄糖苷酶突变体的应用，属于酶工程技术领域。本发明通过定点突变构建获得转苷/水解比提高的β‑葡萄糖苷酶突变体G224A、G224N、G224V，在最优条件下，制备低聚半乳糖产率分别为46.7％、43.8％和38.4％，分别是野生型的1.84倍、1.73倍和1.51倍；制备己基糖苷的产率分别为51.8％、56.9％和38.8％，分别是野生型的2.79倍、3.07倍和2.09倍，具有较好的工业化应用潜力。
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公开(公告)号：CN106754466A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611025858.9
申请日：2016-11-22
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12R1/125 , C07K14/32 , C12N9/1074 , C12N9/2417 , C12N9/54 , C12Y204/01019 , C12Y302/01001 , C12Y304/21062 , C12Y304/24
Abstract: 本发明公开了一种用于高效外源蛋白表达和高密度培养的枯草芽孢杆菌，属于生物工程技术领域。本发明采用筛选分离的方法从土壤中获得一株蛋白表达量高的枯草芽孢杆菌，并敲除其六个基因srfC、spoIIAC、amyE、nprE、aprE和bamA，得到B.subtilis WS5，保藏号为CCTCC M 2016536。以枯草芽孢杆菌WS5为表达宿主，构建β‑CGTase基因工程菌。对β‑CGTase基因工程菌进行3L发酵罐培养，在发酵过程中产生的泡沫明显减少，镜鉴未检测到芽孢的产生，培养过程中胞外淀粉酶和蛋白酶几乎没有，发酵培养70h时β‑CGTase酶活达到270U/ml，DCW达到70g/L。
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公开(公告)号：CN114214304A
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN202111219626.8
申请日：2021-10-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了GOS转化率提升的β‑半乳糖苷酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明中所使用的野生型β‑半乳糖苷酶已经具备良好的GOS合成能力，在此基础上，对其进行改造，得到的突变体在制备GOS的总转化率上相较于野生型有着一定的提升，其中突变体Y406F、R441K和Y563F的转化率分别为63.80％、64.27％以及64.02％，此转化率已属于行业内领先水平。同时，在本发明中，野生型生产的GOS中具有1,6键型的异乳糖产率为23.33％，突变体Y406F和Y563F生产的GOS中具有1,6键型的异乳糖的产率较野生型有进一步的提升。长链GOS产率也较野生型有了显著提升，增加了GOS的益生作用。
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公开(公告)号：CN112980762A
公开(公告)日：2021-06-18
申请号：CN202110264847.0
申请日：2021-03-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种黑曲霉二糖磷酸化酶及其在黑曲霉二糖制备中的应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明提供了提供一种新型黑曲霉二糖磷酸化酶AmNP及其高效表达方法。由化学法合成编码来源于运动厌氧孢杆菌(Anaerosporobacter mobilis DSM 15930)的黑曲霉二糖磷酸化酶AmNP的核苷酸序列，以穿梭质粒pBSMμL3为表达载体，以Bacillus subtilisWSH11为表达宿主，实现了黑曲霉二糖磷酸化酶AmNP基因在枯草芽孢杆菌中的高效表达。黑曲霉二糖磷酸化酶AmNP与麦芽糖磷酸化酶LbMP协同反应可催化麦芽糖转化生成黑曲霉二糖，产率达到最高为67.75％，黑曲霉二糖的产量能达到338.75g/L，为目前已报道黑曲霉二糖酶法制备的最高产量。因此此酶适合食品、医药等工业应用的需要，能由于黑曲霉二糖的工业化生产。
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