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公开(公告)号：CN108463546A
公开(公告)日：2018-08-28
申请号：CN201580085273.3
申请日：2015-12-11
申请人： 瓦克化学股份公司
CPC分类号： C12N1/20 , C07K14/245 , C07K16/00 , C07K16/40 , C07K2317/55 , C12N9/1029 , C12N9/1074 , C12N9/1205 , C12N15/70 , C12N15/74 , C12P13/12 , C12P21/02
摘要： 本发明涉及微生物菌株和用于物抗生素发酵制备低分子量物质和蛋白质的方法。用于生产低分子量物质或蛋白质的微生物菌株在其基因组中含有基因中的突变，所述突变在所述菌株中引起营养缺陷。其进一步含有编码酶或重组蛋白和基因的功能性拷贝的生产质粒，所述酶用于生产低分子量物质，所述基因的染色体失活引起营养缺陷，其中所述营养缺陷是不可补足的营养缺陷。
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公开(公告)号：CN105219746A
公开(公告)日：2016-01-06
申请号：CN201510663078.6
申请日：2015-10-14
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/1074 , C12P19/04 , C12P19/18 , C12Y204/01019
摘要： 本发明公开了一种受β-环糊精抑制减弱的环糊精葡萄糖基转移酶突变体，属于基因工程和酶工程领域。本发明采用定点突变方法提供了降低来源于Bacillus circulans STB01的β-CGT酶β-环糊精抑制作用的突变方案，获得突变体L600Y、L600E和L600R。相比于野生CGT酶，β-环糊精对突变体的β-环化活力抑制明显减弱，更适合环糊精的工业化生产。
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公开(公告)号：CN105087513A
公开(公告)日：2015-11-25
申请号：CN201510438950.7
申请日：2015-07-23
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
CPC分类号： C12N9/1074 , C12Y204/01019
摘要： 本发明涉及一种由海洋微生物菌株Y112制备α-环糊精葡萄糖基转移酶的方法,包括海洋微生物菌株Y112粗酶液的制备、乙醇分级沉淀、凝胶层析和DEAE-Sepharose离子交换层析,制备α-环糊精葡萄糖基转移酶产品单一纯度高,纯度提高了12.4倍，回收率为57.5％。将在医药、食品、化工、化妆品、工业和农业以及分析化学等方面得到广泛的应用。
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公开(公告)号：CN104357371A
公开(公告)日：2015-02-18
申请号：CN201410639884.5
申请日：2014-11-13
申请人： 合肥工业大学
CPC分类号： C12N9/1074 , C12N15/70 , C12P19/04 , C12P19/18 , C12Y204/01019
摘要： 本发明公开了一种表达β环糊精糖基转移酶的基因工程菌及其构建方法和用途，其中表达β环糊精糖基转移酶的基因工程菌，是由克隆得到的β环糊精糖基转移酶基因插入到表达载体pET22b(+)中得到的重组表达质粒pET22-cgt，于宿主菌E.coli BL21(DE3)中转化得到的基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET22-cgt。本发明构建的高效表达β-CGTase基因工程菌，改变原有微生物的培养基；分离随着细菌的生产过程中出现的菌体，获得较纯的β-CGTase；直接用该酶制备β-CD，从根本上提升国内现有的β-CD生产工艺，得到品质优良的β-CD。
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公开(公告)号：CN104073476A
公开(公告)日：2014-10-01
申请号：CN201410271634.0
申请日：2012-12-10
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/1074 , C12N15/70 , C12Y204/01019
摘要： 本发明公开了一种麦芽糊精底物特异性提高的环糊精糖基转移酶及其制备方法，属于遗传工程和酶工程领域。本发明通过对P.macerans strain JFB05-01(CCTCC NO:M208063)的CGTase的195位的酪氨酸(Tyr)替换为丝氨酸(Ser),260位的酪氨酸(Tyr)替换为精氨酸(Arg),265位的谷氨酰胺(Gln)替换为赖氨酸(Lys)，使AA-2G产量分别提高了23％，44％和40％。对以上突变株组合突变，获得双突变体Y195S/Y260R,Y195S/Q265K和Y260R/Q265K以及三点突变体Y195S/Y260R/Q265K。它们利用麦芽糊精为糖基供体生产AA-2G产量分别提高了57％，49％，55％和59％。这些突变株比野生型CGTase更利于利用麦芽糊精为糖基供体生产AA-2G。
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公开(公告)号：CN103820413A
公开(公告)日：2014-05-28
申请号：CN201410076463.6
申请日：2014-03-04
申请人： 福建省农业科学院土壤肥料研究所
IPC分类号： C12N9/10
CPC分类号： C12N9/1074 , C12Y204/01019
摘要： 本发明公开了一种高纯度α-环糊精葡萄糖基转移酶的简单制备方法，本发明采用以下步骤实现：首先进行α-环糊精葡萄糖基转移酶粗酶液制备、再进行发酵上清液饱和硫酸铵沉淀、进行离子交换柱层析、进行Native-PAGE电泳分离、再进行目标蛋白的电泳回收，即可得到高纯度的α-环糊精葡萄糖基转移酶酶。与现有技术相比，本发明制备出的α-环糊精葡萄糖基转移酶的纯度高且制备步骤少，生产效率高，能够满足环糊精工业化生产的要求，减少了环糊精后期提纯的难度，使得环糊精的生产成本大大降低，极大地提高了CGTase的应用和环糊精的规模化生产，具有推广应用的价值。
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公开(公告)号：CN103589699A
公开(公告)日：2014-02-19
申请号：CN201310542063.5
申请日：2013-11-05
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/1074 , C12P19/60 , C12Y204/01019
摘要： 本发明公开了一种可溶性淀粉底物特异性提高的环糊精糖基转移酶，属于遗传工程和酶工程领域。本发明将来源于P.macerans strain JFB05-01(CCTCC NO:M208063)的环糊精葡萄糖基转移酶作为原始CGTase，通过在原始CGTase的N端分别融合2种自组双亲短肽，构建了两种融合酶——SAP1-CGTase和SAP2-CGTase。与原始CGTase相比，它们以可溶性淀粉为糖基供体时，合成AA-2G产量分别提高了约1.33倍和2.36倍。因此，这些融合酶比原始环糊精葡萄糖基转移酶更利于利用可溶性淀粉为糖基供体生产AA-2G。
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公开(公告)号：CN106591254A
公开(公告)日：2017-04-26
申请号：CN201710036771.X
申请日：2017-01-18
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/1074 , C12Y204/01019
摘要： 本发明公开了一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明对来源于Anaerobranca gottschalkii的环糊精葡萄糖基转移酶的受体位点附近进行改造提高环糊精葡萄糖基转移酶对对苯二酚的转化率，对CGTase的265位的酪氨酸，332位的天冬酰胺进行定点突变，获得的单突变体酶的α‑熊果苷的生产能力较野生型CGTase有所增加，产物中α‑熊果苷的产量比野生型分别提高了1.6、1.4、1.2倍，更利于α‑熊果苷的生产。
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公开(公告)号：CN105936912A
公开(公告)日：2016-09-14
申请号：CN201610490579.3
申请日：2016-06-28
申请人： 国家海洋局第三海洋研究所
CPC分类号： C12N9/1074 , C12N15/70 , C12N2800/101 , C12N2800/22 , C12Y204/01019
摘要： 环糊精葡萄糖基转移酶及其制备方法，涉及环糊精葡萄糖基转移酶。通过优化Thermococcus sp.4557环糊精葡萄糖基转移酶基因的密码子，人工合成环糊精葡萄糖基转移酶基因核苷酸序列，并将基因克隆至载体pUC57‑Amp。通过引物扩增后得到的糊精葡萄糖基转移酶基因cgt与pET‑28m质粒构建了重组原核表达载体，在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组蛋白的表达，纯化后的蛋白纯度高、活力好，为该蛋白的实际应用提供了基础。通过同源重组表达环糊精葡萄糖基转移酶，可以克服分离纯化过程复杂繁琐、产量低等不足，为该蛋白能广泛应用于生物、食品、医药、农业等领域奠定基础。
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公开(公告)号：CN104911158A
公开(公告)日：2015-09-16
申请号：CN201510388389.6
申请日：2015-07-03
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/10 , C12N9/1074 , C12P19/18 , C12Y204/01019
摘要： 本发明公开了具有高β-环化活力的环糊精葡萄糖基转移酶突变体，属于基因工程和酶工程领域。本发明采用定点突变方法将来源于Bacillus circulans STB01的β-CGT酶第89位的酪氨酸分别突变为甘氨酸、天冬氨酸和天冬酰胺，双突变体是在将CGT酶第577位天冬氨酸突变为精氨酸的基础上，将第89位的酪氨酸分别突变为甘氨酸、天冬氨酸和天冬酰胺，所得突变体相比于野生CGT酶，β-环化活力明显提高，更适合环糊精的工业化生产。
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