一种大肠杆菌重组工程菌及其应用

    公开(公告)号:CN119506179A

    公开(公告)日:2025-02-25

    申请号:CN202411617982.9

    申请日:2024-11-13

    Abstract: 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种大肠杆菌重组工程菌及其应用。所述大肠杆菌重组工程菌为大肠杆菌F10,保存于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M2024964;该大肠杆菌F10在发酵的过程中能够产生吲哚‑3‑甲醛和吲哚三聚体代谢产物,可用于制备吲哚‑3‑甲醛和吲哚三聚体。本发明还提供了一种吲哚类化合物的制备方法,具体为:将大肠杆菌F10进行发酵培养,得到发酵液,发酵液经离心后收集上清,向上清中加入乙酸乙酯进行萃取,萃取结束收集上层液,对上层液进行浓缩,得到提取物浸膏;对提取物浸膏进行硅胶柱层析分离,收集硅胶柱层析的洗脱流分;所述洗脱流分经凝胶柱层析、高效液相色谱分离纯化,得到吲哚类化合物。与现有的通过化学工艺制备方法相比,本发明吲哚类化合物的制备方法绿色环保,反应条件简单,副产物少,产物纯度高。

    一种酶联比色法测定磷脂酶D酶活性的优化方法

    公开(公告)号:CN113030471A

    公开(公告)日:2021-06-25

    申请号:CN202110254896.6

    申请日:2021-03-09

    Abstract: 本发明公开了一种酶联比色法测定磷脂酶D酶活性的优化方法,一是通过反应体系充分反应,得到待测样品溶液;二是使用全波长酶标仪对待测样品溶液进行吸光度进行检测,得到样品溶液的吸光度值;三是以氯化胆碱物质的量为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线,并以样品溶液的吸光度值对照标准曲线得到对应胆碱物质的量;四是通过定义酶活并通过公式计算得到酶活数据。本发明中优化了磷脂酶D酶活性测定方法,解决了现有的酶联比色法中关于底物溶解、反应条件、终止反应、以及数据取得的问题,利用该方法测定磷脂酶D的酶活性用时短、操作简便、灵敏度高、重复性好、实用性强,并且确定了反应中所用试剂组成,有望进一步开发形成商品化试剂盒。

    一种高效提取杜仲胶的方法

    公开(公告)号:CN114292417B

    公开(公告)日:2024-01-19

    申请号:CN202210033286.8

    申请日:2022-01-12

    Abstract: 本发明涉及杜仲胶提取技术领域,且公开了一种高效提取杜仲胶的方法,包括以下步骤:S1:土壤采样,采集杜仲林下的腐殖质土,然后备用;S2:富集培养,将取自杜仲林下的土壤加入培养基中富集细菌、嗜热菌及真菌;S3:涂布分离,富集结束后取100μL菌液利用平板涂布法将菌进行分离;S4:活化培养,将分离纯化后的菌种放入活化培养基中进行活化培养,活化培养基包括基础培养基和活化组分;S5:测定降解率。本发明能够进行实时检测,而且能够提高检测样本,控制检测时间和温度,提高测定效率,通过优化酶活条件,能够检测到菌种提取的杜仲胶的最佳效率,从而提高杜仲胶的提取效果。

    一种高效提取杜仲胶的方法

    公开(公告)号:CN114292417A

    公开(公告)日:2022-04-08

    申请号:CN202210033286.8

    申请日:2022-01-12

    Abstract: 本发明涉及杜仲胶提取技术领域,且公开了一种高效提取杜仲胶的方法,包括以下步骤:S1:土壤采样,采集杜仲林下的腐殖质土,然后备用;S2:富集培养,将取自杜仲林下的土壤加入培养基中富集细菌、嗜热菌及真菌;S3:涂布分离,富集结束后取100μL菌液利用平板涂布法将菌进行分离;S4:活化培养,将分离纯化后的菌种放入活化培养基中进行活化培养,活化培养基包括基础培养基和活化组分;S5:测定降解率。本发明能够进行实时检测,而且能够提高检测样本,控制检测时间和温度,提高测定效率,通过优化酶活条件,能够检测到菌种提取的杜仲胶的最佳效率,从而提高杜仲胶的提取效果。

    一种磷脂酶D的异源表达重组质粒以及其构建方法

    公开(公告)号:CN112813090B

    公开(公告)日:2024-02-06

    申请号:CN202011640263.0

    申请日:2020-12-31

    Abstract: 本发明涉及一种磷脂酶D的异源表达重组质粒,其构建方法包括步骤一,人工合成质粒pUC57‑STR_ORI,步骤二,人工合成质粒pUC57‑STR_PLD,步骤三,重组质粒的构建,最终得到包括Kasop*组成型强启动子,肉桂链霉菌的信号肽,链霉菌来源的磷脂酶D合成基因和ApmR抗性筛选基因的重组质粒。本发明中所得重组质粒能够在链霉菌中成功表达,启动子具有强启动作用,信号肽能够使引导新合成的蛋白质向分泌通路转移的效果良好,磷脂酶D合成基因段能够使得磷脂酶D成功表达。本发明中通过质粒合成方法合成基因的表达元件,进而形成完整的重组质粒,且质粒结构稳定,并且便于向链霉菌宿主内转移,并保证在链霉菌宿主内成功表达。

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