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公开(公告)号:CN113651717B
公开(公告)日:2024-08-30
申请号:CN202110898385.8
申请日:2021-08-05
申请人: 浙江工业大学
IPC分类号: C07C255/04 , C07C253/30
摘要: 本发明涉及一种光学纯异丁基丁二腈的消旋方法。所述方法包括:将(S)‑异丁基丁二腈或(R)‑异丁基丁二腈与有机溶剂混合,加入固体碱催化剂,在20~50℃温度下搅拌反应1~10h,反应结束后获得反应混合液,离心、洗涤,回收固体碱催化剂,将离心后的上清液和洗涤液合并,回收有机溶剂,剩余液即为外消旋异丁基丁二腈。该方法采用固体碱催化剂在有机溶剂中进行消旋,消旋速度快,消旋收率达到90%以上;本发明方法获得的外消旋异丁基丁二腈可进一步用于酶催化反应,消旋催化剂易分离和可重复利用,且后处理简单、环保;本发明简便易操作,可应用于腈水解酶法合成普瑞巴林工艺的光学纯异丁基丁二腈规模化消旋回用工艺。
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公开(公告)号:CN112359036B
公开(公告)日:2022-03-08
申请号:CN202011383565.4
申请日:2020-11-30
申请人: 浙江工业大学
摘要: 本发明公开了一种腈水解酶突变体及其在水解外消旋异丁基丁二腈合成普瑞巴林手性中间体(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸中的应用,属于生物工程技术领域。本发明提供的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的腈水解酶突变体BaNITmut/V82L或氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的双突变体BaNITmut/V82L/C237S能够催化高浓度IBSN水解,且显著降低酰胺副产物。本发明通过定向进化技术提升腈水解酶活性及反应专一性,大幅度降低工业化生产成本,在普瑞巴林手性中间体(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸的工业化生产中具有良好的应用前景。
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公开(公告)号:CN112359036A
公开(公告)日:2021-02-12
申请号:CN202011383565.4
申请日:2020-11-30
申请人: 浙江工业大学
摘要: 本发明公开了一种腈水解酶突变体及其在水解外消旋异丁基丁二腈合成普瑞巴林手性中间体(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸中的应用,属于生物工程技术领域。本发明提供的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的腈水解酶突变体BaNITmut/V82L或氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的双突变体BaNITmut/V82L/C237S能够催化高浓度IBSN水解,且显著降低酰胺副产物。本发明通过定向进化技术提升腈水解酶活性及反应专一性,大幅度降低工业化生产成本,在普瑞巴林手性中间体(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸的工业化生产中具有良好的应用前景。
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公开(公告)号:CN105039361B
公开(公告)日:2019-08-30
申请号:CN201510383476.2
申请日:2015-06-30
申请人: 浙江工业大学
IPC分类号: C12N15/53 , C12N9/04 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P13/02 , C12P7/62 , C12P13/00 , C12P17/14 , C12N1/16 , C12R1/645
摘要: 本发明公开了一种来源于圆红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloides)ZJB14212的羰基还原酶、基因、载体、菌株,以及其在制备手性药物中间体中的应用;所述羰基还原酶能够生物催化制备高光学纯度的(S)‑N,N‑双甲基‑3‑羟基‑3‑(2‑噻吩基)丙酰胺、(S)‑N‑甲基‑3‑羟基‑3‑(2‑噻吩基)丙酰胺、(R)‑3‑氯‑1‑(2‑噻吩基)‑1‑丙醇、(S)‑3‑羟基‑3‑(2‑噻吩基)丙酸乙酯、(S)‑3‑羟基‑3‑(2‑噻吩基)丙腈、6‑氯‑(3R,5S)‑二羟基己酸叔丁酯、(4S)‑3‑[(5S)‑5‑(4‑氟苯基)‑5‑羟基戊酰基]‑4‑苯基‑1,3‑氧氮杂环戊烷‑2‑酮及[S‑(E)]‑2‑[3‑[3‑[2‑(7‑氯‑2‑喹啉基)乙烯基]苯基]‑3‑羟基丙基]苯甲酸甲酯。
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公开(公告)号:CN109439647A
公开(公告)日:2019-03-08
申请号:CN201811115006.8
申请日:2018-09-25
申请人: 浙江工业大学
摘要: 本发明属于生物化学领域,具体公开了一种核壳结构的磁性固定化酶载体及其制备方法和应用,制备方法包括:将四氧化三铁纳米颗粒加入到含有多巴胺的Tris-HCl缓冲溶液中,在20~30℃条件下搅拌8~24h,洗涤、烘干后得到四氧化三铁多巴胺核颗粒;再将四氧化三铁多巴胺核颗粒、氯化锆、月桂酸溶于有机溶剂,超声后加入氨基对苯二甲酸,在75~85℃条件下保温1~3h后升温到100~120℃保温10~24h,经过后处理,得到的磁性固定化酶载体易于分离、可重复利用、酶载量高;将制备得到的磁性固定化酶载体应用于酰胺酶的固定化中,可以使得到的固定化酰胺酶的酶活回收率高、热稳定性和有机溶剂耐受性好。
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公开(公告)号:CN112941122B
公开(公告)日:2022-12-09
申请号:CN202110204296.9
申请日:2021-02-23
申请人: 浙江工业大学
IPC分类号: C12P13/00 , C07C253/34 , C07C255/19 , C12R1/19
摘要: 本发明公开了一种(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸的制备方法,以腈水解酶为生物催化剂,以异丁基丁二腈为底物,以水为反应介质,在25‑35℃、300‑400rpm条件下进行转化反应,反应结束后,获得转化液;转化液经离心、萃取、硅藻土处理、超滤和反渗透,获得(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸浓缩液。本发明方法提取收率达到95%以上。利用该方法提取的(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸直接用于加氢反应,加氢收率大于80%,远高于目前专利报道的加氢收率。本发明简便易操作,可应用于工业化合成普瑞巴林。
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公开(公告)号:CN109439647B
公开(公告)日:2020-10-13
申请号:CN201811115006.8
申请日:2018-09-25
申请人: 浙江工业大学
摘要: 本发明属于生物化学领域,具体公开了一种核壳结构的磁性固定化酶载体及其制备方法和应用,制备方法包括:将四氧化三铁纳米颗粒加入到含有多巴胺的Tris‑HCl缓冲溶液中,在20~30℃条件下搅拌8~24h,洗涤、烘干后得到四氧化三铁多巴胺核颗粒;再将四氧化三铁多巴胺核颗粒、氯化锆、月桂酸溶于有机溶剂,超声后加入氨基对苯二甲酸,在75~85℃条件下保温1~3h后升温到100~120℃保温10~24h,经过后处理,得到的磁性固定化酶载体易于分离、可重复利用、酶载量高;将制备得到的磁性固定化酶载体应用于酰胺酶的固定化中,可以使得到的固定化酰胺酶的酶活回收率高、热稳定性和有机溶剂耐受性好。
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公开(公告)号:CN117165563A
公开(公告)日:2023-12-05
申请号:CN202311208908.7
申请日:2023-09-19
申请人: 浙江工业大学
IPC分类号: C12N9/78 , C12N11/089 , C12N11/14
摘要: 本发明属于生物化工领域,具体涉及一种腈水解酶的固定化方法,所述固定化方法包括以下步骤:S1、向对苯二甲酸二钠溶液中加入氯化钙,搅拌得到反应体系A;S2、向反应体系A中加入腈水解酶,搅拌后,静置得到反应体系B;S3、向反应体系B中加入偏硅酸钠和三乙烯四胺得到反应体系C;反应体系C经离心、洗涤后得到固定化酶。本发明通过采用金属有机框架自组装和仿生矿化的技术方案,提高了制备的固定化酶的酶活回收率、蛋白固载率和热稳定性。
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公开(公告)号:CN105039361A
公开(公告)日:2015-11-11
申请号:CN201510383476.2
申请日:2015-06-30
申请人: 浙江工业大学
IPC分类号: C12N15/53 , C12N9/04 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P13/02 , C12P7/62 , C12P13/00 , C12P17/14 , C12N1/16 , C12R1/645
摘要: 本发明公开了一种来源于圆红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloides)ZJB14212的羰基还原酶、基因、载体、菌株,以及其在制备手性药物中间体中的应用;所述羰基还原酶能够生物催化制备高光学纯度的(S)-N,N-双甲基-3-羟基-3-(2-噻吩基)丙酰胺、(S)-N-甲基-3-羟基-3-(2-噻吩基)丙酰胺、(R)-3-氯-1-(2-噻吩基)-1-丙醇、(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)丙酸乙酯、(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)丙腈、6-氯-(3R,5S)-二羟基己酸叔丁酯、(4S)-3-[(5S)-5-(4-氟苯基)-5-羟基戊酰基]-4-苯基-1,3-氧氮杂环戊烷-2-酮及[S-(E)]-2-[3-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-羟基丙基]苯甲酸甲酯。
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公开(公告)号:CN117025565A
公开(公告)日:2023-11-10
申请号:CN202310871912.5
申请日:2023-07-17
申请人: 浙江工业大学
摘要: 本发明涉及生物工程技术领域,具体涉及一种多聚磷酸激酶突变体、编码基因、制备方法及其应用。本发明提供了一种多聚磷酸激酶突变体,具有这样的特征,所述多聚磷酸激酶突变体是将SEQ ID NO:2所示氨基酸序列第56位或第125位进行单突变获得的,编码所述SEQ ID NO:2所示氨基酸序列编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供的两种多聚磷酸激酶突变体对SEQ ID NO:2所示氨基酸序列第56位或第125位进行单突变,得到的两种多聚磷酸激酶突变体具有高活性,在实际应用中,多聚磷酸激酶突变体的ADP转化率高于野生型多聚磷酸激酶突变体,显著加快反应速率,提高反应效率,减少了ATP的用量,经济性强。
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