公开(公告)号：CN108949716A

公开(公告)日：2018-12-07

申请号：CN201810651498.6

申请日：2018-06-22

申请人： 青岛中科爱博生物科技有限公司

发明人： 郑春杨 ,  刘金朝 ,  申奥 ,  张国林

IPC分类号： C12N9/12

CPC分类号： C12N9/1252 ,  C12Y207/07007

摘要： 本发明公开一种热启动TaqDNA聚合酶的制备方法，包括以下步骤：(1)将纯化的TaqDNA聚合酶作为底物包被，利用噬菌体展示技术进行三轮的淘选流程，得到富集的同底物具有高亲和力的阳性备选配体；(2)分析富集的阳性备选配体序列组成，同底物结构比对后，选择若干可以与之结合的阳性克隆，利用大肠杆菌体外表达系统表达得到系列阳性配体；(3)将体外表达得到的配体、TaqDNA和多克隆抗体按照3：3：1的比例混合后得到热启动TaqDNA聚合酶。本发明制备的热启动TaqDNA聚合酶，能够在最大限度保持酶活性的基础上常温更好的封闭酶的活性，在分子诊断多个平台上验证其使用效果优于传统的热启动TaqDNA聚合酶。

公开(公告)号：CN107868774A

公开(公告)日：2018-04-03

申请号：CN201610849001.2

申请日：2016-09-23

申请人： 上海紫众生物科技有限公司

发明人： 刘喜朋

IPC分类号： C12N9/12 ,  C12N15/10

CPC分类号： C12N9/1252 ,  C12Q1/686 ,  C12Y207/07007 ,  C12Q2521/101 ,  C12Q2527/127

摘要： 本发明公开了一种热启动DNA聚合酶、制备方法及其应用。其采用dU修饰寡核苷酸为DNA聚合酶抑制剂，由DNA聚合酶和dU修饰寡核苷酸室温下混合制备得到。作为聚合酶活性抑制剂的dU修饰寡核苷酸可以是茎环结构、双链结构或单链结构。dU核苷酸的数目为1-5个。本发明中，热启动DNA聚合酶在PCR技术领域中应用时，PCR过程中加入热稳定性UDG作为聚合酶活性激活剂。本发明的有益效果在于：制备方法操作简便、成本低。得到的热启动DNA聚合酶热启动效果好、通用性强。

公开(公告)号：CN107636004A

公开(公告)日：2018-01-26

申请号：CN201680027667.8

申请日：2016-05-13

申请人： 豪夫迈·罗氏有限公司

发明人： A.艾尔 ,  C.阿诺德 ,  C.施瓦布 ,  E.泰 ,  I.莱德曼 ,  C.麦克高 ,  T.舒尔茨

IPC分类号： C07K1/00 ,  C07K14/00 ,  C07K17/00 ,  C12N9/12

CPC分类号： C12N9/1241 ,  C12N9/1252 ,  C12Y207/07 ,  C12Y207/07007

摘要： 本文描述了具有至少一个选自以下的突变的变体pol6聚合酶：H223、N224、Y225、H227、I295、Y342、T343、I357、S360、L361、I363、S365、S366、Y367、P368、D417、E475、Y476、F478、K518、H527、T529、M531、N535、G539、P542、N545、Q546、A547、L549、I550、N552、G553、F558、A596、G603、A610、V615、Y622、C623、D624、I628、Y629、R632、N635、M641、A643、I644、T647、I648、T651、I652、K655、W656、D657、V658、H660、F662、L690及其组合。

公开(公告)号：CN107257854A

公开(公告)日：2017-10-17

申请号：CN201680008277.6

申请日：2016-02-01

申请人： 豪夫迈·罗氏有限公司

发明人： A.阿耶 ,  A.比比洛 ,  B.埃克特 ,  S.苏科 ,  C.R.阿诺尔德 ,  C.W.施瓦布 ,  E.泰 ,  I.莱德曼 ,  C.A.麦克戈 ,  T.O.舒尔茨 ,  M.伯尼茨-杜拉特 ,  B.韦斯德费尔 ,  D.D.旺德利希

IPC分类号： C12N9/12

CPC分类号： C12N9/1252 ,  C07K2319/21 ,  C12Y207/07007

摘要： 本文描述了具有至少一个选自以下的突变的变体pol6聚合酶：H223、N224、Y225、H227、I295、Y342、T343、I357、S360、L361、I363、S365Q、S366、Y367、P368、D417、E475、Y476、F478、K518、H527、T529、M531、N535、G539、P542、N545、Q546、A547、L549、I550、N552、G553、F558、A596、G603、A610、V615、Y622、C623、D624、I628、Y629、R632、N635、M641、A643、I644、T647、I648、T651、I652、K655、W656、D657、V658、H660、F662、L690及其组合。

公开(公告)号：CN106929506A

公开(公告)日：2017-07-07

申请号：CN201710189761.X

申请日：2011-06-21

申请人： 生命技术公司

发明人： C·特里恩 ,  T·徐 ,  施雅婷 ,  F·N·勒 ,  C·马约里班克斯

IPC分类号： C12N15/10 ,  C12Q1/68

CPC分类号： C12Q1/686 ,  C12Q1/6848 ,  C12Y207/07007 ,  C12Q2527/125 ,  C12Q2521/101

摘要： 包含热稳定性DNA聚合酶和PCR抑制剂阻断剂的组合物，其中PCR抑制剂阻断剂以有效地增强装配的PCR对PCR抑制剂的耐受性的量存在。

公开(公告)号：CN106350493A

公开(公告)日：2017-01-25

申请号：CN201610737135.5

申请日：2016-08-26

申请人： 周辉

发明人： 周辉

IPC分类号： C12N9/12 ,  C12N15/10

CPC分类号： C12N9/1252 ,  C12Q1/686 ,  C12Y207/07007 ,  C12Q2521/101 ,  C12Q2541/101

摘要： 本发明涉及一种热启动Taq DNA聚合酶的制备方法，通过SELEX技术从人工合成ssDNA文库中筛选一种与Taq DNA聚合酶高亲和性，而且在45℃以下亲和性稳定的阳性克隆菌，进一步分析该克隆菌的序列组成，人工合成这一ssDNA适配子，该适配子与Taq DNA聚合酶按照一定比例溶解于Enhancer溶液中。本发明在PCR过程中不仅在第一步实现热启动，在PCR反应的后续步骤中同样可以实现热启动，从而避免了非特异性扩增和引物二聚体的产生，提高反应特异性和灵敏度。

公开(公告)号：CN106191009A

公开(公告)日：2016-12-07

申请号：CN201610607681.7

申请日：2016-07-29

申请人： 苏州泓迅生物科技有限公司

发明人： 郭天玮 ,  钟云鹏 ,  胡涛 ,  李彦敏 ,  杨平

IPC分类号： C12N9/22 ,  C12N9/12 ,  C12N15/63

CPC分类号： C12N9/22 ,  C12N9/1252 ,  C12N15/63 ,  C12Y207/07007

摘要： 本发明涉及一种体外多段重组酶系统及其在基因组装中的应用，按体积百分比计，所述的体外多段重组酶系统包括如下配方：5X pre-assembly buffer35~45%，T5核酸外切酶0.1~0.15%，高保真Taq酶4.5~5.5%，ddH2O50~60%；其中，所述的5X pre-assembly buffer包括如下配方：占所述的5X pre-assembly buffer总体积20~30%的聚乙二醇、450~550mM的三（羟甲基）氨基甲烷、45~55mM的MgCl2、45~55mM的二硫苏糖醇、0.9~1.1mM的dNTPs。本发明的重组酶系统无需使用NAD和Taq DNA连接酶，使得整体成本降低。

公开(公告)号：CN106119222A

公开(公告)日：2016-11-16

申请号：CN201610519079.8

申请日：2016-07-04

申请人： 翌圣生物科技(上海)有限公司

发明人： 张瑞

IPC分类号： C12N9/16 ,  C12N9/00 ,  C12N9/12 ,  C12N15/63

CPC分类号： C12N9/16 ,  C12N9/1252 ,  C12N9/93 ,  C12Y207/07007 ,  C12Y301/11

摘要： 本发明公开了一种可用于体外同源重组的混合蛋白酶体系，包括基于该体系的体外同源重组无缝克隆试剂盒及其使用方法。本发明中混合蛋白酶体系可在37‑55℃下对目标片段(单片段及多片段)进行重组反应，与其它相同功能的酶或酶体系相比，本发明的混合蛋白酶体系在37‑55℃下具有较高的活性，从而提高了重组反应的特异性，可有效地避免突变的产生，且反应完成后无需进行冰浴即可直接进行转化实验，极大地提高了反应的特异性、准确性并且简化了实验操作。

公开(公告)号：CN106011100A

公开(公告)日：2016-10-12

申请号：CN201610640034.6

申请日：2016-08-08

申请人： 吴江近岸蛋白质科技有限公司

发明人： 石加加 ,  陈飞 ,  刘宽 ,  张冰

IPC分类号： C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70

CPC分类号： C12N9/1252 ,  C12Y207/07007

摘要： 本发明提供一种Pfu DNA聚合酶及其制备方法，该方法包括构建Fast Pfu DNA聚合酶的原核构建获得表达菌株的步骤，将菌株接种到培养基中，经诱导表达后，收集菌体；菌体经破菌、纯化后，得到所述Fast Pfu DNA聚合酶。本发明采用分子进化技术对普通Pfu酶进行改造，制备新型的Fast Pfu聚合酶，具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点，是新一代的高保真DNA聚合酶。

公开(公告)号：CN105916992A

公开(公告)日：2016-08-31

申请号：CN201480072215.2

申请日：2014-11-20

申请人： 诺松制药股份公司

发明人： A·佩什 ,  F·雅罗什 ,  M·雅恩兹 ,  S·克鲁斯曼 ,  R·大卫

IPC分类号： C12P19/34 ,  C12N9/12 ,  C12N15/10

CPC分类号： C12P19/34 ,  C12N9/1252 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q1/6844 ,  C12Y207/07007 ,  C12Q2525/101

摘要： 本发明涉及一种用于添加一个或多个L?核苷酸到第一L?核酸的3'端的方法，其中所述方法包括在包含突变酶活性展现部分的蛋白质存在下使所述一个或多个L?核苷酸与所述第一L?核酸反应的步骤，其中所述酶活性能够添加一个或多个L?核苷酸到所述第一L?核酸的3'端，其中所述突变酶活性展现部分包含氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的氨基酸是D?氨基酸，其中所述突变酶活性展现部分是酶活性展现部分的变体，其中所述酶活性展现部分由根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成，并且其中根据SEQ ID NO:15的所述氨基酸序列的氨基酸是D?氨基酸，其中所述突变酶活性展现部分的所述氨基酸序列与由根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成的所述酶活性展现部分的所述氨基酸序列至少在一个氨基酸位置处、优选在三个氨基酸位置处不同，和/或其中所述突变酶活性展现部分的所述氨基酸序列是根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列的截短形式，以及其中所述突变酶活性展现部分的所述氨基酸序列不同于根据SEQ ID NO 15至22和51中的任一个的氨基酸序列。