公开(公告)号：US06291647B1

公开(公告)日：2001-09-18

申请号：US08687580

申请日：1996-11-20

申请人： Leo Sjoerd Melchers ,  Anne Silene Ponstein ,  Saskia Kroon-Swart ,  Johanna Pieternella Els Van Deventer-Troost ,  Stephan Andreas Ohl ,  Alexandra Aleida Bres-Vloemans ,  Jürgen Logemann ,  Marianne Beatrix Sela-Buurlage

发明人： Leo Sjoerd Melchers ,  Anne Silene Ponstein ,  Saskia Kroon-Swart ,  Johanna Pieternella Els Van Deventer-Troost ,  Stephan Andreas Ohl ,  Alexandra Aleida Bres-Vloemans ,  Jürgen Logemann ,  Marianne Beatrix Sela-Buurlage

IPC分类号： C12N504

CPC分类号： A01N65/38 ,  A01N65/00 ,  A01N65/385 ,  C07K14/415 ,  C12N15/8282 ,  A01N2300/00

摘要： The present invention provides an isolated protein obtainable from a plant source which has anti-Phytophthora activity and a molecular weight of about 60±5 kDa as judged by SDS PAGE-electrophoresis, an isolated DNA sequence comprising an open reading frame capable of encoding a protein according to the invention, preferably characterized in that it comprises an open reading frame which is capable of encoding a protein as represented by amino acids 1 to 540 of SEQ ID NO: 6, or the precursor of said protein, and DNA capable of hybridising therewith under stringent conditions. The invention further comprises plants incorporating chimeric DNA capable of encoding a protein according to the invention, and wherein the protein is expressed. Also methods are provided for combatting fungi, especially Phytophthora infestans, using a protein or a host cell capable of producing the protein.

摘要翻译： 本发明提供从通过SDS PAGE-电泳判断的具有抗疫病活性和约60±5kDa分子量的植物来源获得的分离的蛋白质，包含能够编码蛋白质的开放阅读框的分离的DNA序列 根据本发明，其特征在于其包含能够编码由SEQ ID NO：6的氨基酸1至540表示的蛋白质或所述蛋白质的前体以及能够与其杂交的DNA的开放阅读框架 在严格条件下。 本发明还包括含有能够编码本发明的蛋白质的嵌合DNA的植物，并且其中所述蛋白质被表达。 还提供了使用能够产生蛋白质的蛋白质或宿主细胞来对抗真菌，特别是致病疫霉的方法。

公开(公告)号：US06864076B2

公开(公告)日：2005-03-08

申请号：US09258031

申请日：1999-02-25

申请人： Maarten Hendrik Stuiver ,  Jerome Hubertus Henricus Victor Custers ,  Marianne Beatrix Sela-Buurlage ,  Leo Sjoerd Melchers ,  Wessel Lageweg ,  Anne Silene Ponstein ,  Johanna Pieternella Els Van Deventer-Troost

发明人： Maarten Hendrik Stuiver ,  Jerome Hubertus Henricus Victor Custers ,  Marianne Beatrix Sela-Buurlage ,  Leo Sjoerd Melchers ,  Wessel Lageweg ,  Anne Silene Ponstein ,  Johanna Pieternella Els Van Deventer-Troost

IPC分类号： A01H5/00 ,  C07K14/415 ,  C07K16/40 ,  C12N5/10 ,  C12N9/00 ,  C12N9/02 ,  C12N9/04 ,  C12N15/09 ,  C12N15/62 ,  C12N15/82 ,  C12Q1/68 ,  C07H21/04

CPC分类号： C12N9/0004 ,  A01N65/12 ,  C07K14/415 ,  C12N9/0006 ,  C12N15/8282

摘要： The present invention provides an isolated protein obtainable from a plant source which has antifungal activity, specifically anti-Phytophthora activity and/or anti-Pythium activity and a molecular weight of about 55-65 kDa as judged by SDS PAGE-electrophoresis, an isolated DNA sequence comprising an open reading frame capable of encoding a protein according to the invention, preferably characterized in that it comprises an open reading frame which is capable of encoding a protein depicted in SEQ ID NO. 16, SEQ ID NO. 57, SEQ ID NO. 70, SEQ ID NO. 72 or SEQ ID NO. 74 or muteins thereof, and DNA capable of hybridizing therewith under stringent conditions. The invention further comprises plants incorporating chimeric DNA capable of encoding a protein according to the invention, and wherein the protein is expressed. Also shown is the carbohydrate and preferably hexose oxidating activity of said protein. Also methods are provided for combating fungi, especially Phytophthora and Pythium species, using a protein or a host cell capable of producing the protein.

摘要翻译： 本发明提供从植物来源获得的分离的蛋白质，其具有抗真菌活性，特别是抗疫苗活性和/或抗腐霉菌活性，并且通过SDS PAGE-电泳判断分子量为约55-65kDa，分离的DNA 其包含能够编码本发明的蛋白质的开放阅读框，其特征在于，其包含能够编码SEQ ID NO：1所示蛋白质的开放阅读框。 16，SEQ ID NO： 57，SEQ ID NO： 70，SEQ ID NO： 72或SEQ ID NO。 74或突变蛋白，以及能够在严格条件下与其杂交的DNA。 本发明还包括含有能够编码本发明的蛋白质的嵌合DNA的植物，并且其中所述蛋白质被表达。 还显示了所述蛋白质的碳水化合物和优选己糖氧化活性。 还提供了使用能够产生蛋白质的蛋白质或宿主细胞来对抗真菌，特别是疫霉属（Phytophthora）和腐霉属（Pythium）物种的方法。

公开(公告)号：US5994625A

公开(公告)日：1999-11-30

申请号：US935886

申请日：1997-09-23

申请人： Leo Sjoerd Melchers ,  Marianne Beatrix Sela-Buurlage ,  Alexandra Aleida Bres-Vloemans ,  Anne Silene Ponstein ,  Marion Apotheker-De Groot ,  Bernardus Johannes Clemens Cornelissen

发明人： Leo Sjoerd Melchers ,  Marianne Beatrix Sela-Buurlage ,  Alexandra Aleida Bres-Vloemans ,  Anne Silene Ponstein ,  Marion Apotheker-De Groot ,  Bernardus Johannes Clemens Cornelissen

IPC分类号： C07K14/415 ,  C12N9/24 ,  C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  C12N15/84 ,  A01H5/00

CPC分类号： C07K14/415 ,  C12N15/8282 ,  C12N9/244 ,  C12N9/2442 ,  C12Y302/01006 ,  C12Y302/01014

摘要： Chimeric genes encoding antifungal chitin binding proteins (antifungal CBPs) with very low chitinase activity (10% or less than that of the class-I chitinases from tobacco). Also substantially pure DNA sequences encoding antifungal CBP are provided for the obtention of transgenic plants producing antifungal CBP. Plants expressing an antifungal CBP gene, optionally in combination with a plant expressible glucanase gene, show reduced susceptibility to fungi.

摘要翻译： 编码抗真菌几丁质结合蛋白（抗真菌CBPs）的嵌合基因具有非常低的几丁质酶活性（比来自烟草的I类几丁质酶的10％或更低）。 提供编码抗真菌CBP的基本上纯的DNA序列用于获得产生抗真菌CBP的转基因植物。 表达抗真菌CBP基因的植物，任选地与植物可表达的葡聚糖酶基因组合显示降低的对真菌的敏感性。

公开(公告)号：US5993808A

公开(公告)日：1999-11-30

申请号：US591629

申请日：1996-02-15

申请人： Leo Sjoerd Melchers ,  Marion Apotheker-De Groot ,  John Ferdinand Bol ,  Bernardus Johannes Clemens Cornelissen ,  Hubertus Josephus Maria Linthorst ,  Anne Silene Ponstein ,  Marianne Beatrix Sela-Buurlage

发明人： Leo Sjoerd Melchers ,  Marion Apotheker-De Groot ,  John Ferdinand Bol ,  Bernardus Johannes Clemens Cornelissen ,  Hubertus Josephus Maria Linthorst ,  Anne Silene Ponstein ,  Marianne Beatrix Sela-Buurlage

IPC分类号： A01H5/00 ,  A01N65/00 ,  A01N65/36 ,  A01N65/38 ,  A01P3/00 ,  A61P31/10 ,  C07K14/415 ,  C12N1/21 ,  C12N5/10 ,  C12N9/24 ,  C12N15/09 ,  C12N15/56 ,  C12N15/82 ,  C12R1/01 ,  A61K38/47 ,  C12N9/42

CPC分类号： A01N65/385 ,  A01N65/00 ,  A01N65/38 ,  C12N15/8282 ,  C12N9/2442 ,  C12Y302/01014

摘要： There is provided a method for inhibiting growth and/or germination of a fungus, by contacting the fungus, or causing the fungus to be contacted with a composition including an effective amount of a pathogenesis-related protein occurring naturally in a plant. The protein has endochitinase activity, antifungal activity and a molecular weight of about 40 to 43 kDa as judged by Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide electrophoresis. There is also provided a composition for inhibiting growth and/or germination of a fungus. The composition includes a pathogenesis-related protein occurring naturally in a plant. The protein has endochitinase activity, antifungal activity and a molecular weight of about 40 to 43 kDa as judged by Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide electrophoresis. The composition also includes .beta.-1,3-glucanase in an amount sufficient to enhance the effectiveness of the composition in inhibiting the growth or germination of the fungus.

摘要翻译： PCT No.PCT / EP94 / 02761 Sec。 371日期：1996年2月15日 102（e）日期1996年2月15日PCT 1994年8月17日PCT公布。 出版物WO95 / 05467 日期1995年2月23日提供了一种抑制真菌生长和/或发芽的方法，通过使真菌接触或使真菌与包含有效量的发病相关蛋白质的组合物接触，所述组合物在 厂。 根据十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳测定，该蛋白具有内切壳酶活性，抗真菌活性和约40至43kDa的分子量。 还提供了抑制真菌生长和/或发芽的组合物。 组合物包括在植物中天然存在的发病相关蛋白。 根据十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳测定，该蛋白具有内切壳酶活性，抗真菌活性和约40至43kDa的分子量。 组合物还包括足以提高组合物抑制真菌生长或发芽的有效性的β-1,3-葡聚糖酶。

公开(公告)号：US6087560A

公开(公告)日：2000-07-11

申请号：US801563

申请日：1997-02-18

申请人： Bernardus J. C. Cornelissen ,  Leo Sjoerd Melchers ,  Elisabeth J. S. Meulenhoff ,  Jeroen S. C. van Roekel ,  Marianne Beatrix Sela-Buurlage ,  Alexandra Aleida Vloemans ,  Charles Peter Woloshuk ,  John Ferdinand Bol ,  Hubertus J. M. Linthorst

发明人： Bernardus J. C. Cornelissen ,  Leo Sjoerd Melchers ,  Elisabeth J. S. Meulenhoff ,  Jeroen S. C. van Roekel ,  Marianne Beatrix Sela-Buurlage ,  Alexandra Aleida Vloemans ,  Charles Peter Woloshuk ,  John Ferdinand Bol ,  Hubertus J. M. Linthorst

IPC分类号： C12N9/24 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  C12N1/21

CPC分类号： C12Y302/01039 ,  A01N65/38 ,  C12N15/8282 ,  C12N9/2405 ,  C12N9/2442 ,  C12Y302/01014

摘要： Plants are provided with improved resistance against pathogenic fungi. They are genetically transformed with one or more polynucleotides which essentially comprise one or more genes encoding plant chitinases and .beta.-1,3-glucanases. Preferred are the intracellular forms of the said hydrolytic enzymes, especially preferred are those forms which are targeted to the apoplastic space of the plant by virtue of the modification of the genes encoding the said enzymes. Particularly preferred are plants exhibiting a relative overexpression of at least one gene encoding a chitinase and one gene encoding a .beta.-1,3-glucanase.

摘要翻译： 植物具有改善的抗病原菌的抗性。 它们用一种或多种基本上包含编码植物几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的一种或多种基因的多核苷酸遗传转化。 优选的是所述水解酶的细胞内形式，特别优选的是通过修饰编码所述酶的基因而靶向植物的外胚层空间的那些形式。 特别优选的是表现出编码几丁质酶的至少一种基因和编码β-1,3-葡聚糖酶的一种基因的相对过表达的植物。

公开(公告)号：US5670706A

公开(公告)日：1997-09-23

申请号：US47413

申请日：1993-04-19

申请人： Bernardus J. C. Cornelissen ,  Leo Sjoerd Melchers ,  Elisabeth J. S. Meulenhoff ,  Jeroen S. C. van Roekel ,  Marianne Beatrix Sela-Buurlage ,  Alexandra Aleida Vloemans ,  Charles Peter Woloshuk ,  John Ferdinand Bol ,  Hubertus J. M. Linthorst

发明人： Bernardus J. C. Cornelissen ,  Leo Sjoerd Melchers ,  Elisabeth J. S. Meulenhoff ,  Jeroen S. C. van Roekel ,  Marianne Beatrix Sela-Buurlage ,  Alexandra Aleida Vloemans ,  Charles Peter Woloshuk ,  John Ferdinand Bol ,  Hubertus J. M. Linthorst

IPC分类号： A01H5/00 ,  A01H1/00 ,  A01N65/00 ,  C12N20060101 ,  C12N1/20 ,  C12N1/21 ,  C12N9/24 ,  C12N15/00 ,  C12N15/09 ,  C12N15/29 ,  C12N15/52 ,  C12N15/56 ,  C12N15/63 ,  C12N15/82 ,  A01H4/00

CPC分类号： C12N15/8282 ,  A01N65/38 ,  C12N9/244 ,  C12N9/2442 ,  C12Y302/01006 ,  C12Y302/01014 ,  C12Y302/01039 ,  C12Y302/01058

摘要： Plants are provided with improved resistance against pathogenic fungi. They are genetically transformed with one or more polynucleotides which essentially comprise one or more genes encoding plant chitinases and .beta.-1,3-glucanases. Preferred are the intracellular forms of the said hydrolytic enzymes, especially preferred are those forms which are targeted to the apoplastic space of the plant by virtue of the modification of the genes encoding the said enzymes. Particularly preferred are plants exhibiting a relative overexpression of at least one gene encoding a chitinase and one gene encoding a .beta.-1,3-glucanase.

摘要翻译： 植物具有改善的抗病原菌的抗性。 它们用一种或多种基本上包含编码植物几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的一种或多种基因的多核苷酸遗传转化。 优选的是所述水解酶的细胞内形式，特别优选的是通过修饰编码所述酶的基因而靶向植物的外胚层空间的那些形式。 特别优选的是表现出编码几丁质酶的至少一种基因和编码β-1,3-葡聚糖酶的一种基因的相对过表达的植物。