一种重组纳豆芽孢杆菌的构建方法及其发酵制备维生素K2的方法

    公开(公告)号:CN109971788A

    公开(公告)日:2019-07-05

    申请号:CN201910181289.4

    申请日:2019-03-11

    Abstract: 一种重组纳豆芽孢杆菌的构建方法及其发酵制备维生素K2的方法,包括下列步骤:步骤1:以pKD46质粒为模板,以Up‑AmpR‑F和AmpR‑Down‑R为引物,通过PCR获得包含有同源臂的重组片段;步骤2:构建纳豆芽孢杆菌的感受态细胞,将步骤1获得的包含有同源臂的重组片段转导进入所述纳豆芽孢杆菌的感受态细胞内,诱导同源重组;步骤3:以氨苄青霉素作为筛选压力,挑选阳性克隆;步骤4:以Verify‑F和Verify‑R为引物,通过PCR确定所述阳性克隆的真实性;步骤5:以氨苄青霉素为培养压力,对阳性克隆进行驯化培养获得纳豆芽孢杆菌工程菌。本发明以清夜进行发酵,具有生产效率高的优点。

    利用纳豆芽孢杆菌发酵联产维生素K<base:Sub>2</base:Sub>和纳豆激酶的方法

    公开(公告)号:CN106701719A

    公开(公告)日:2017-05-24

    申请号:CN201710029003.1

    申请日:2017-01-16

    Abstract: 本发明公开了一种利用纳豆芽孢杆菌发酵联产维生素K2和纳豆激酶的方法,包括以下步骤:菌种活化:将纳豆芽孢杆菌划线至平板培养基中培养,再取单菌落在试管培养基,进行培养;制备种子:将试管中纳豆芽孢杆菌接种到种子培养基中培养;纳豆激酶、维生素K2的生产:配置联产发酵培养基,待配置联产发酵培养基冷却后,取制备的种子液,接种,于最佳联产培养条件下进行纳豆激酶和维生素K2的生产;纳豆激酶、维生素K2的分离和提取:将发酵液离心后,上清与沉淀分离,向上清中添加无机高分子絮凝剂,并选用壳聚糖作为助凝剂,将上清中维生素K2和纳豆激酶分离。本发明具有提高了原料的利用率且适合于工业生产的优点。

    一种NovQ芳香族异戊烯基转移酶催化合成维生素K2的方法

    公开(公告)号:CN105861582A

    公开(公告)日:2016-08-17

    申请号:CN201610392463.6

    申请日:2016-05-31

    CPC classification number: C12P7/66

    Abstract: 本发明公开一种NovQ芳香族异戊烯基转移酶催化合成维生素K2的方法,(1)维生素K3溶解于乙醇水溶液中,加入NaBH4,在N2保护下,控制温度不超过50℃,搅拌反应至体系呈淡绿色透明液体,中和至pH4.0后,用乙酸乙酯萃取产物,浓缩后冷冻结晶,过滤除清液得到维生素K3氢醌;(2)将维生素K3氢醌和DMAPP加入酶促反应体系中,反应在密闭和N2保护条件下进行,反应完成后,加入Fe3+,去除N2保护,充分氧化后,使用乙酸乙酯萃取得到产物。本发明核心环节为生物酶催化工程技术,利用廉价的维生素K3催化合成高值的维生素K2。本发明生产工艺简单,生产成本低廉,生产过程绿色环保。

    一种高效丝氨酸羟甲基转移酶体外进化的方法

    公开(公告)号:CN104017819A

    公开(公告)日:2014-09-03

    申请号:CN201410286347.7

    申请日:2014-06-23

    Abstract: 本发明公开了一种高效丝氨酸羟甲基转移酶体外进化的方法,步骤包括:对多种来源的丝氨酸羟甲基转移酶基因进行PCR扩增;上述多种来源的丝氨酸羟甲基转移酶基因体外低能离子注入,构建载体并转化受体菌;筛选高活性的丝氨酸羟甲基转移酶菌株并测序。本发明的有益效果在于,利用低能离子辐照技术,将低能离子直接作用于不同来源丝氨酸羟甲基转移酶基因,造成丝氨酸羟甲基转移酶基因体外辐照损伤和修饰,再与载体连接、转化受体菌,经体内修复与突变后,对突变基因文库进行表达和筛选,获得丝氨酸羟甲基转移酶突变基因,完成体外进化。本方法亦可应用于其他酶分子的体外进化。

    一种维生素K2及其制备方法

    公开(公告)号:CN103571897A

    公开(公告)日:2014-02-12

    申请号:CN201310521459.1

    申请日:2013-10-29

    Abstract: 本发明公开了一种维生素K2及其制备方法,该方法利用1-羟基-2-萘甲酸抗性黄杆菌株HNA12-D进行发酵培养,通过碳源甘油、氮源蛋白胨以及前体物质的分批补料,获得维生素K2在菌体内的高效代谢,并采用有机溶剂萃取,大孔树脂联合硅胶柱提取分离维生素K2,提高了产品的收率和纯度。本发明的黄杆菌HNA12-D经发酵培养120~144小时后,维生素K2粗品的总产量为200~600mg/L,经吸附层析后,产品的纯度达到80~99%,与现有技术相比,其产量和纯度都有大幅提高,并能应用于工业化生产中。

    一种具有磁场辅助处理功能的发酵罐

    公开(公告)号:CN214830289U

    公开(公告)日:2021-11-23

    申请号:CN202121879860.9

    申请日:2021-08-11

    Abstract: 一种具有磁场辅助处理功能的发酵罐,包括发酵罐体,发酵罐体内设置有第一搅拌器,第一搅拌器与一电机相连,发酵罐体的底端设置有出料管道,出料管道上设置有阀门;发酵罐体的一侧设置有磁场处理器,磁场处理器内设置有第二搅拌器;磁场处理器的上端连通第一管道,第一管道与发酵罐体的内腔相连通;磁场处理器的下端连通第二管道,第二管道与发酵罐体的出料管道相连通;第二管道上设置有泵体;第二管道与出料管道的接口位于阀门的上方。本实用新型设计的具有磁场辅助处理功能的发酵罐,结构简单,成本低,用于对发酵液的均匀磁场处理,实现磁场对微生物生长和代谢的作用,实用性强,效率高,适合推广。

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