-
公开(公告)号：CN107955827B
公开(公告)日：2019-07-02
申请号：CN201711352434.8
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0073 , C12N15/70 , C12P33/06 , C12Y114/13142
Abstract: 本发明公开了一种酶法转化生产9α‑羟基雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明将来源于Mycobacterium sp.Strain VKMAc‑1817D的3‑甾酮9α‑羟基化酶的氧化亚基KshA，还原亚基KshB，及未知活性亚基KshC成功在E.coliBL21中表达，并鉴定出KshC为氧化亚基，且酶活远高于KshA。利用本实验室已构建的BL21/pET‑28a(+)‑fdh表达甲酸脱氢酶FDH，以KSH(KshB+KshC)和FDH工程菌的粗酶液作为生物催化剂，以甾体化合物AD为底物，同时确定了最佳反应温度为30℃，pH7.0。在最优条件下转化AD生成产物9‑OH‑AD，在20小时内，9‑OH‑AD的产量为4.7g/L，摩尔转化率达到96.7％。本发明产生9‑OH‑AD实现了3‑甾酮9α‑羟基化酶羟化系统与辅酶循环体系的偶联，具有效率高，成本低，绿色环保等优点。
-
公开(公告)号：CN105062941B
公开(公告)日：2019-03-05
申请号：CN201510526416.1
申请日：2015-08-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用重组枯草芽孢杆菌全细胞转化生产L‑鸟氨酸的方法，属于生物工程和生物技术领域。本发明将来源于Bacillus cereus的精氨酸酶成功在Bacillus subtilis 168中表达。酶活测定结果表明，重组工程菌的精氨酸酶酶活比原始菌提高了近27倍。以此工程菌作为生物催化剂，以L‑精氨酸作为底物，进行转化法生产L‑鸟氨酸，采用分批补加底物L‑精氨酸的方法在5‑L发酵中进行转化法生产L‑鸟氨酸。12h后可以得到378.9g/L的L‑鸟氨酸，底物L‑精氨酸的摩尔转化率达到99.9％。本发明方法生产L‑鸟氨酸具有效率高，专一性强，能耗低等优点。
-
公开(公告)号：CN109370993A
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201811430826.6
申请日：2018-11-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的苯乙烯单加氧酶突变体及其应用，属于基因工程以及微生物工程技术领域。此突变体是通过将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的苯乙烯单加氧酶的第305位氨基酸由天冬氨酸突变为甘氨酸得到的；此突变体的酶活可达99.12±1.5U/mL、Kcat/Km可达268.2±19.5mM-1·min-1，分别较野生型提高了1.7倍、3.4倍；此突变体的温度稳定性以及pH稳定性较野生型有了明显的提高，将此突变体在60℃下保持24h依旧可残留59％的酶活，在pH5.0的状态下保持12h依然可残留71％的酶活。
-
公开(公告)号：CN109266635A
公开(公告)日：2019-01-25
申请号：CN201811384656.2
申请日：2018-11-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明在天然L-天冬酰胺酶的基础上，通过定点突变生物技术改造L-天冬酰胺酶分子结构，L-天冬酰胺酶突变体的纯酶液酶活提高至2037.13U/mg，较原始酶酶活(约1483.81U/mg)相比提高了约37.3％。本发明表明第22位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的在食品行业中的应用潜力。
-
公开(公告)号：CN108559735A
公开(公告)日：2018-09-21
申请号：CN201810443305.8
申请日：2018-05-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供一种亮氨酸脱氢酶突变体的构建及其应用，属于基因工程领域。本发明提供了SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6及SEQ ID NO.8三个亮氨酸脱氢酶突变体，以及上述突变体或产生突变体的基因工程菌在氨化还原α-酮酸制备光学纯手性L-α-氨基酸中的应用。本发明在于：所述亮氨酸脱氢酶突变体或含有突变体基因工程菌氨化还原制备L-α-氨基酸具有高催化活性及稳定性，能够合成高光学纯度L-α-氨基酸(ee>99％)，如突变体酶催化L-苯甘氨酸的转化速率提高了2.62倍，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
-
Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108103038A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201711352466.8
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0016 , C12N9/0008 , C12P13/04 , C12Y102/01002 , C12Y104/01009
Abstract: 本发明公开了一种高效合成L‑苯甘氨酸的单细胞工厂及其构建与应用，属于微生物技术领域。本发明首先实现了来源于Bacillus cereus的亮氨酸脱氢酶在大肠杆菌中的高效表达，并通过定点突变得到还原特性显著提高的突变体N71S，并将该突变酶与甲酸脱氢酶突变体在大肠杆菌中共表达，形成胞内原位辅因子NADH循环体系，通过启动子和RBS序列优化控制甲酸脱氢酶突变体的表达量，成功构建了重组大肠杆菌单细胞工厂，并利用单细胞工厂进行全细胞转化制备L‑苯苷氨酸，该方法转化过程简单快捷，成本低廉，没有副产物，利于分离纯化，在5L发酵罐中转化4h，L‑苯甘氨酸产量可达105.7g/l，转化率为93.3％，L‑苯苷氨酸的时空产率为26.3g/L·h，为L‑苯苷氨酸的工业化生产提供了一种实际有效的策略。
-
公开(公告)号：CN107988176A
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201711353989.4
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活和稳定性提高的酪氨酸酶突变体及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将187位氨基酸由缬氨酸突变成苏氨酸得到的。本发明的突变体酶的纯酶比酶活较突变前提高了38％，60℃的半衰期(t1/2)较突变期提高了2.9倍。本发明表明10位氨基酸残基突变成半胱氨酸与天然酪氨酸酶的30位半胱氨酸残基形成正确的二硫键从而提高了酶的稳定性和催化效率，加强了该酶的工业应用潜力。
-
公开(公告)号：CN107881159A
公开(公告)日：2018-04-06
申请号：CN201711352455.X
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/06 , C12N15/53 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P7/40 , C12P13/04 , C12P35/02 , C12Q1/26 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种提高D-氨基酸氧化酶可溶性异源表达的方法，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的氨基酸的基础上，在甲硫氨酸后面添加三个额外的组氨酸和一个甘氨酸。本发明得到的突变体获得的体积酶活比野生型提高3.4倍。同时突变体经5L发酵罐发酵最终获得体积酶活为86.8U/mL，体积产率为4.52kU·L-1·h-1，为圆冬红酵母在大肠杆菌中表达获得的最高酶活，加强了该酶的工业应用潜力。
-
公开(公告)号：CN107828710A
公开(公告)日：2018-03-23
申请号：CN201711328979.5
申请日：2017-12-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种无标记多位点整合表达谷氨酰胺酶菌株及其构建方法，属于基因工程领域。本发明的是将谷氨酰胺酶基因在16S rDNA、nprB、nprE、aprE、spo0A、epr、bpr 7个位点整合表达，最终得到了多位点无抗性整合表达谷氨酰胺酶菌株BSM7。本发明得到的BSM1和BSM7，摇瓶发酵24h后，酶活分别为40.5U/mL和85.6U/mL，突变酶活提高了111.4％。BSM7菌株分批补料发酵，在32h左右达到最高酶活，为375.6U/mL。通过遗传稳定性分析发现，BSM7的遗传稳定性远远大于改基因的质粒表达的稳定性。该发明提高了谷氨酰胺酶酶在食品工业的应用潜力。
-
公开(公告)号：CN105418461B
公开(公告)日：2017-10-31
申请号：CN201510819440.4
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
IPC: C07C277/08 , C07C279/14
Abstract: 本发明提供了一种L‑精氨酸的提取工艺，所述L‑精氨酸是通过微生物发酵制得，包括以下步骤：1)L‑精氨酸发酵液通过陶瓷膜过滤除菌，再经超滤膜过滤除蛋白；2)膜过滤液进入连续离子交换系统，经阳离子交换树脂吸附，氨水洗脱，得到的L‑精氨酸的洗脱液；3)经连续离子交换后经驱氨，脱色，浓缩结晶，离心分离，烘干后得到L‑精氨酸成品，L‑精氨酸总收率为80％以上，产品纯度95％以上。
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Search Results
408
records
(took 0.024 seconds)
