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公开(公告)号：CN107955827A
公开(公告)日：2018-04-24
申请号：CN201711352434.8
申请日：2017-12-15
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/0073 , C12N15/70 , C12P33/06 , C12Y114/13142
摘要： 本发明公开了一种酶法转化生产9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明将来源于Mycobacterium sp.Strain VKMAc-1817D的3-甾酮9α-羟基化酶的氧化亚基KshA，还原亚基KshB，及未知活性亚基KshC成功在E.coliBL21中表达，并鉴定出KshC为氧化亚基，且酶活远高于KshA。利用本实验室已构建的BL21/pET-28a(+)-fdh表达甲酸脱氢酶FDH，以KSH(KshB+KshC)和FDH工程菌的粗酶液作为生物催化剂，以甾体化合物AD为底物，同时确定了最佳反应温度为30℃，pH7.0。在最优条件下转化AD生成产物9-OH-AD，在20小时内，9-OH-AD的产量为4.7g/L，摩尔转化率达到96.7％。本发明产生9-OH-AD实现了3-甾酮9α-羟基化酶羟化系统与辅酶循环体系的偶联，具有效率高，成本低，绿色环保等优点。
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公开(公告)号：CN106676156A
公开(公告)日：2017-05-17
申请号：CN201710137902.3
申请日：2017-03-09
申请人： 眉山市新功生物科技有限公司
CPC分类号： C12P33/06 , C12N9/0071
摘要： 本发明公开了一种石胆酸酶催化法制备鹅去氧胆酸的方法，包括如下步骤：步骤一、酶的提取，从鹅盲肠得到鹅盲肠黏膜液体并离心，接种培养得所需菌种，经过蒸馏水稀释，将稀释液调pH值后捣碎，离心，汲取上清液，即为7α‑羟化酶液，置于‑20℃以下保存，待用。步骤二、催化转化，利用7α‑羟化酶液催化石胆酸，得到鹅去氧胆酸。本发明利用鹅盲肠黏液培养得到7α‑羟化酶，原料来源广泛，成本低。而且本发明克服了常规的从鸭胆汁中提取鹅去氧胆酸的思路限制，提供一种合成鹅去氧胆酸的新思路，而且可以利用本发明的方法，使含石胆酸较高的鹅去氧胆酸不合格产品转化为鹅去氧胆酸合格产品。
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公开(公告)号：CN105274070A
公开(公告)日：2016-01-27
申请号：CN201510681787.7
申请日：2015-10-20
申请人： 南京普瑞特生物科技有限公司 , 刘志斌
CPC分类号： C12N9/0006 , C12P33/06 , C12Y101/01201
摘要： 本发明提供7β-羟基类固醇脱氢酶突变子及其应用和合成方法；一种7β-类固醇脱氢酶的突变子，其特征在于所述突变子的氨基酸序列Seq ID NO：4，编码核苷酸序列为Seq ID NO：3；或所述突变子的氨基酸序列Seq ID NO：6，编码核苷酸序列为Seq ID NO：5。使用高效的7β-类固醇脱氢酶及其突变子酶，以及辅酶再生系统来催化合成胆酸化合物特别是熊去氧胆酸，底物浓度高达100g/L，转化率为99.2-99.5%，重量收率高达94-96%。酶可以通过发酵方法廉价易得，生产成本和产品质量优于化学合成方法，适合于工业化生产。
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公开(公告)号：CN104560724A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201410635517.8
申请日：2014-11-12
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一株新菌株--枝孢霉ZF-35及其在微生物转化制备羟化环氧黄体酮中的应用，以枝孢霉ZF-35经发酵培养获得的含菌发酵液为酶源，以环氧黄体酮为底物，同时获得了三种羟基化环氧黄体酮：11α-羟基-16α,17α-环氧-孕甾-4-烯-3,20-二酮，6β-羟基-16α,17α-环氧-孕甾-4-烯-3,20-二酮，7β-羟基-16α,17α-环氧-孕甾-4-烯-3,20-二酮，具有一步引入、专一性强、环境污染小的优点，且操作简单，分离迅速，便于大规模生产应用，在工业生产性激素和其他甾体激素药物的方面，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN1224716C
公开(公告)日：2005-10-26
申请号：CN00817567.5
申请日：2000-10-17
申请人： 阿克佐诺贝尔公司
摘要： 描述了一种构建类固醇降解微生物的遗传修饰菌株的方法，其中参与类固醇核降解的多个基因，例如类固醇脱氢酶基因被失活。这些基因的例子是kstD1和kstD2。有多个失活的类固醇降解酶基因的菌株能用于高产率积累类固醇中间体，一种优选的积累产物是9α-羟基-4-雄烯-3，17-二酮。
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公开(公告)号：CN1413260A
公开(公告)日：2003-04-23
申请号：CN00817567.5
申请日：2000-10-17
申请人： 阿克佐诺贝尔公司
摘要： 描述了一种构建类固醇降解微生物的遗传修饰菌株的方法，其中参与类固醇核降解的多个基因，例如类固醇脱氢酶基因被失活。这些基因的例子是kstD1和kstD2。有多个失活的类固醇降解酶基因的菌株能用于高产率积累类固醇中间体，一种优选的积累产物是9α－羟基－4－雄烯－3，17－二酮。
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公开(公告)号：CN106086148A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610439697.1
申请日：2016-06-20
申请人： 苏州汉酶生物技术有限公司
发明人： 张跃
CPC分类号： C12P33/06 , C07J1/0011
摘要： 本发明公开了一种化学‑酶法制备去氢表雄酮的方法，以4‑雄烯二酮为初始底物，依次进行化学法和生物法两步制得去氢表雄酮，在制备过程中，对两步反应过程进行了优化，在化学法制备5‑雄烯二酮的过程中，将反应液加入到了混合有抗坏血酸钠和醋酸的水溶液中，使反应条件更为温和，同时在第二步生物法制备去氢表雄酮过程中，采用了酮还原酶作为催化剂，使得制备所得的产物的收率和纯度更高，同时在整个反应过程中辅酶和叔丁醇钾等原料的用量更低，具有较高的实用价值。
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公开(公告)号：CN106011106A
公开(公告)日：2016-10-12
申请号：CN201610440705.4
申请日：2016-06-20
申请人： 云南与诺生物工程有限责任公司
CPC分类号： C12N9/2402 , C12P33/005 , C12P33/06 , C12P33/20
摘要： 本发明涉及生物领域，公开了一种酶及其编码基因和它们的应用以及制备人参皂苷化合物K的方法。具体地，本发明提供了一种酶及其编码基因，含有该基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌，以及以该酶作为活性成分的组合物，及其在降解糖苷类化合物中的应用，并且提供了一种制备人参皂苷化合物K的方法。将本发明提供的酶用于降解三七叶总皂苷中的人参皂苷Rb3和绞股蓝皂苷IX时，其可能通过作用于人参皂苷Rb3和绞股蓝皂苷IX中C20位的木糖糖苷结构，同时也可将其C3位的葡萄糖水解下来，从而获得人参皂苷CK，并且人参皂苷CK的转化率在84％以上。
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公开(公告)号：CN105802926A
公开(公告)日：2016-07-27
申请号：CN201610236283.9
申请日：2016-04-14
申请人： 中国科学院天津工业生物技术研究所
CPC分类号： C12N9/0004 , C07K2319/20 , C07K2319/21 , C12P33/06
摘要： 本发明公开了三萜2位α?羟化酶MAA45及其相关生物材料与它们在制备山楂酸和科罗索酸中的应用。本发明公开的三萜2位α?羟化酶MAA45是如下A1)、A2)或A3)：A1)氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质；A2)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。实验证明，MAA45可以以齐墩果酸为底物制备山楂酸，还可以以乌索酸为底物制备科罗索酸，可以利用MAA45及其编码基因制备山楂酸和科罗索酸，还可以利用MAA45催化三萜2位α?羟化。
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