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公开(公告)号：CN113121680A
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN202110390340.X
申请日：2021-04-12
Applicant: 华南农业大学
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N1/21 , G01N33/569 , G01N33/68 , A61K39/42 , A61K39/44 , A61P31/16 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于生物药物技术领域，具体涉及一种抗H5亚型禽流感纳米抗体蛋白及其编码基因与应用。所述的抗H5亚型禽流感病毒纳米抗体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该纳米抗体蛋白特异性针对甲型H5亚型禽流感病毒可以解决现有H5亚型禽流感诊断试剂研发过程中抗体亲和力低、生产过程中纯度低、检测过程中灵敏度低的问题。本发明进一步将抗H5亚型禽流感病毒纳米抗体蛋白在大肠杆菌体内和麦芽糖结合蛋白标签融合表达，可实现快速检测抗原，并应用于甲型H5亚型禽流感快速检测试剂盒的开发，且该融合蛋白可用于防治甲型H5亚型禽流感产品的开发。
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公开(公告)号：CN115747126B
公开(公告)日：2024-09-17
申请号：CN202211015993.0
申请日：2022-08-24
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明涉及生产微菌素J25的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株、构建方法及应用，属于微生物技术、药物和基因工程领域，本发明通过对mcjABCD基因序列和表达原件的优化，使得MccJ25可以在枯草芽孢杆菌中成功表达，并将mcjABCD基因同时整合至枯草芽孢杆菌基因组两个位点中，得到一株可以高效生产MccJ25的枯草芽孢杆菌W25AS2工程菌株，该菌可以在无抗性、无诱导、双位点共表达且无芽孢生成的条件下，对MccJ25具有较高的表达水平，并且表达产物对于肠炎沙门氏菌具有良好的杀菌活性，为MccJ25的生产应用开发了新的应用模式。
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公开(公告)号：CN117625666A
公开(公告)日：2024-03-01
申请号：CN202211020042.2
申请日：2022-08-24
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多杀性巴氏杆菌无抗性标记基因整合菌株的构建方法及其应用。本发明将点突变基因pheSm与温度敏感复制子Ts‑ori、卡那霉素抗性基因kan及大肠杆菌ColE1复制子构建得到温度敏感质粒pHYF01；接着通过无痕重组将质粒pHYF01与靶基因hptC的上、下同源臂片段连接构建得到重组质粒pHYF02；然后将重组质粒pHYF02电击转化禽多杀性巴氏杆菌，经卡那霉素筛选获得hptC重组菌株；再利用卡那霉素抗性筛选获得单交换菌株，利用四氯苯丙氨酸抗性筛选得到双交换菌株，即所述多杀性巴氏杆菌无抗性标记基因整合菌株。该整合菌株毒力显著降低，可用于开发禽多杀性巴氏杆菌疫苗。
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公开(公告)号：CN114634945B
公开(公告)日：2023-08-04
申请号：CN202210452692.8
申请日：2022-04-27
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/70 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12N1/21 , C07K14/255 , C12N15/31 , A61K38/16 , A61K35/74 , A61P31/04 , A23K20/147 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种MccY重组整合工程菌及其构建方法与应用。该MccY重组整合工程菌的构建方法包括如下步骤：(1)将sgRNA片段(SEQ ID NO.2)与T载体连接，得到pHsgRNA质粒；(2)将pCas9质粒转化大肠杆菌，并制成感受态细胞；然后将优化后的MccY的修复片段(SEQ ID NO.1)和pHsgRNA质粒转入感受态细胞中，经鉴定、培养、连续传代筛选消除双质粒的菌株，得到所述的MccY重组整合工程菌。本发明中构建得到的MccY重组整合工程菌无质粒无抗性基因，无需诱导剂，能够持续高效地分泌表达MccY，对鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、宋内志贺氏菌、痢疾志贺氏菌等有明显的抑制效果。
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公开(公告)号：CN115216478A
公开(公告)日：2022-10-21
申请号：CN202210618518.6
申请日：2022-06-01
Applicant: 华南农业大学
Inventor： 陈爱华 , 梁昭平 , 冯赛祥 , 江金飞 , 梁铭治 , 桑运芬 , 周梦若 , 赵一珊 , 孙娟 , 张广文 , 许斯祺 , 谢倩梅 , 代绘琳 , 刘宇彤 , 林敏 , 秦苗苗
Abstract: 本发明公开一种禽多杀性巴氏杆菌内毒素减毒灭活疫苗菌株的构建方法及应用。本发明通过构建表达LpxE基因的重组质粒，进行电击转化到禽多杀性巴氏杆菌中，成功获得内毒素减毒菌株。本发明采用优化后的LpxE基因特异性的去除也野生型菌株上部分类脂A1位上的磷酸基团，成功改造巴氏杆菌；且内毒素致凝活性显著高于野生型菌株，表明脂多糖结构改造后内毒素毒性下降；同时，能使细胞因子IL‑6，TNF‑α和趋化因子CXCL2的含量显著下降，减少MH‑S细胞促炎因子的产生。采用内毒素减毒菌株制备的灭活疫苗与野生型菌株灭活疫苗相比，保护效率更高，安全性也更好，能更好地应用于禽多杀性巴氏杆菌病的防治中。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114836460A
公开(公告)日：2022-08-02
申请号：CN202210553568.0
申请日：2022-05-19
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种表达微菌素Y的枯草芽孢杆菌工程菌株及其制备和应用，属于基因工程技术和生物技术领域，本发明首先将mcyA和mcyBCD的基因序列调整为相同方向，并且用SD和起始密码子序列相连获取mcyABCD改造基因，然后以PHT43作为载体，通过枯草芽孢杆菌对改造后的mcyABCD基因进行表达并成功表达MccY，其表达产物具有良好的鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌的杀菌活性，为MccY在养殖业生产实践中的应用提供了更经济便捷的模式。
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公开(公告)号：CN114645008A
公开(公告)日：2022-06-21
申请号：CN202210276737.0
申请日：2022-03-21
Applicant: 华南农业大学 , 广东永顺生物制药股份有限公司
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种微菌素J25重组整合工程菌及其构建方法与应用。本发明利用CRISPR‑Cas9基因编辑技术，将微菌素J25的全基因重组整合进了大肠杆菌MG1655的基因组中，而非质粒整合，使微菌素J25基因稳定存在于工程菌基因组中，构建得到微菌素J25重组整合工程菌。与现有的表达微菌素J25的重组菌株相比，该微菌素J25重组整合工程菌为基因组定向重组菌，非质粒整合，没有质粒横向转移的风险和危害，无任何标记基因，使用时不会对环境产生污染，无需任何诱导剂的参与，可稳定持续地表达微菌素J25并对沙门氏菌有明显的防控效果。
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公开(公告)号：CN114634945A
公开(公告)日：2022-06-17
申请号：CN202210452692.8
申请日：2022-04-27
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/70 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12N1/21 , C07K14/255 , C12N15/31 , A61K38/16 , A61K35/74 , A61P31/04 , A23K20/147 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种MccY重组整合工程菌及其构建方法与应用。该MccY重组整合工程菌的构建方法包括如下步骤：(1)将sgRNA片段(SEQ ID NO.2)与T载体连接，得到pHsgRNA质粒；(2)将pCas9质粒转化大肠杆菌，并制成感受态细胞；然后将优化后的MccY的修复片段(SEQ ID NO.1)和pHsgRNA质粒转入感受态细胞中，经鉴定、培养、连续传代筛选消除双质粒的菌株，得到所述的MccY重组整合工程菌。本发明中构建得到的MccY重组整合工程菌无质粒无抗性基因，无需诱导剂，能够持续高效地分泌表达MccY，对鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、宋内志贺氏菌、痢疾志贺氏菌等有明显的抑制效果。
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公开(公告)号：CN115216478B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202210618518.6
申请日：2022-06-01
Applicant: 华南农业大学
Inventor： 陈爱华 , 梁昭平 , 冯赛祥 , 江金飞 , 梁铭治 , 桑运芬 , 周梦若 , 赵一珊 , 孙娟 , 张广文 , 许斯祺 , 谢倩梅 , 代绘琳 , 刘宇彤 , 林敏 , 秦苗苗
Abstract: 本发明公开一种禽多杀性巴氏杆菌内毒素减毒灭活疫苗菌株的构建方法及应用。本发明通过构建表达LpxE基因的重组质粒，进行电击转化到禽多杀性巴氏杆菌中，成功获得内毒素减毒菌株。本发明采用优化后的LpxE基因特异性的去除也野生型菌株上部分类脂A1位上的磷酸基团，成功改造巴氏杆菌；且内毒素致凝活性显著高于野生型菌株，表明脂多糖结构改造后内毒素毒性下降；同时，能使细胞因子IL‑6，TNF‑α和趋化因子CXCL2的含量显著下降，减少MH‑S细胞促炎因子的产生。采用内毒素减毒菌株制备的灭活疫苗与野生型菌株灭活疫苗相比，保护效率更高，安全性也更好，能更好地应用于禽多杀性巴氏杆菌病的防治中。
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公开(公告)号：CN117535212A
公开(公告)日：2024-02-09
申请号：CN202210941651.5
申请日：2022-08-08
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/75 , C12N15/31 , C12N15/52 , C12N15/56 , C07K14/24 , A61K35/742 , A61P31/04 , A23K10/18 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一株具有广谱抗菌作用的枯草芽孢杆菌工程菌株及其构建方法与应用。该枯草芽孢杆菌工程菌株是通过将优化的mcyABCD基因和mcjABCD基因分别插入宿主枯草芽孢杆菌的Amye和SigF位点，获得的可同时生产微菌素Y和微菌素J25的枯草芽孢杆菌WYA25S工程菌株；其中，优化的mcyABCD基因序列如SEQ ID NO.1所示，优化的mcjABCD基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明中的枯草芽孢杆菌WYA25S工程菌株在正常生长(无诱导，无抗性)的情况下，对沙门氏菌等菌株具有抑菌作用，且在生长过程中不产生芽孢，具有生长可控性和菌株安全性，其应用前景好。
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