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公开(公告)号:CN111172213B
公开(公告)日:2022-03-04
申请号:CN202010058267.1
申请日:2020-01-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种用双酶串联制备L‑2‑氨基丁酸的方法,属于生物工程领域。本发明通过分别培养表达L‑谷氨酸变位酶和L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶的重组大肠杆菌,获得L‑谷氨酸变位酶和L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶。将两种酶以一定质量比添加到反应体系中,以L‑谷氨酸为底物,进行酶反应制备L‑2‑氨基丁酸,当L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶的用量为2mg/mL,反应24h,转化生成8.5mmol/L L‑2氨基丁酸,摩尔转化率为85.00%。此法与化学生产法相比,生产工艺安全,无环境污染。与以苏氨酸为底物的多酶合成体系相比,底物价格更便宜,工艺更简单。
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公开(公告)号:CN111019964B
公开(公告)日:2021-12-28
申请号:CN201911421812.2
申请日:2019-12-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种改造钴内稳态减少腈水合酶生产中钴用量的方法,属于基因工程和发酵工程技术领域。本发明所述方法中使用的Co2+内稳态系统是通过引入外排蛋白RcnA和摄取蛋白NiCoT构建而成的。在人工Co2+内稳态的帮助下,大肠杆菌对于高浓度的Co2+耐受性增强,同时使用型诱导系统表达外源基因时,蛋白可被更低浓度的Co2+有效诱导。将该系统应用于腈水合酶生产时,达到最大酶活的Co2+使用量从500μM降低至300μM,在腈水合酶的酶活和产量不变的基础上,可以显著降低Co2+的使用量,降低了生产成本,减少了生产过程中对环境的潜在污染。
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公开(公告)号:CN112941003A
公开(公告)日:2021-06-11
申请号:CN202110418599.0
申请日:2021-04-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种双酶偶联全细胞催化马来酸合成L‑丙氨酸的方法,属于生物工程领域。本发明通过统建一种偶联表达马来酸顺反异构酶和L‑天冬氨酸β脱羧酶的重组菌株,并对该重组菌株进行宿主菌改造优化,获得能够全细胞高转化率催化马来酸生成L‑丙氨酸的重组菌。该重组菌株能够利用价格相对便宜的马来酸生成L‑丙氨酸,几乎没有中间产物富马酸和L‑天冬氨酸的积累,转化率到达96%以上,最高生产速率达28.43g/(L·h),最高产量达261.2g/L。
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公开(公告)号:CN112522245A
公开(公告)日:2021-03-19
申请号:CN202011450235.2
申请日:2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种腈水合酶氨基酸基序的改造及其应用,属于生物工程技术领域。本发明对来源于嗜热假诺卡氏菌腈水合酶做了改造,分别是对野生型对β亚基上的46号位,α亚基上的6、126号位进行了突变,构建得到的突变体比酶活显著提升,可较野生型提升1‑5倍。且底物谱也得到拓宽,对于异丁腈、正戊腈、丙烯腈、烟腈、2‑氰基吡嗪、苯甲腈、肉桂腈和萘甲腈等均有很好的催化作用,并且对相应底物的催化性能也显著提升。使得到的腈水合酶突变体能适用于更多的生产场景,并提高生产效率。
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公开(公告)号:CN112501151A
公开(公告)日:2021-03-16
申请号:CN202011450515.3
申请日:2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种腈水合酶突变体及其应用,属于生物工程技术领域。本发明对腈水合酶氨基酸基序中β亚基上的第48号构建的单点突变体L48D和L48H的酶活分别为750.26±1.63U/mg、820.01±0.98U/mg,与未进行改造的野生型腈水合酶的比酶活220.30±2.28U/mg相比,都有明显的提高。其中,突变体L48D与突变体L48H的酶活分别为野生型的3.4和3.7倍。上述这两个氨基酸残基的突变显著改善腈水合酶催化活性,有利于应用于工业上精细化学品如烟酰胺的生产,提高催化效率,降低生产成本。
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公开(公告)号:CN112481278A
公开(公告)日:2021-03-12
申请号:CN202011449689.8
申请日:2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于AIP诱导的生物传感器及其应用,属于基因工程技术领域。本发明将agr群体感应系统感受AIP的关键组分异源构建至枯草芽孢杆菌168中,使其能够在AIP的诱导下表达绿色荧光蛋白sfGFP。利用该系统,可以通过sfGFP的表达荧光反应AIP的浓度。同时将AIP合成相关基因异源构建至大肠杆菌中,使得大肠杆菌能够合成分泌AIP,获得AIP产生菌。在AIP产生菌中建立AIP的突变体库,在AIP感应菌种筛选突变的AIP,实现AIP高通量突变和筛选。该系统能够方便地研究AIP不同位点突变对其功能的影响,并且获得具有不同特性的突变体AIP。
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公开(公告)号:CN112322607A
公开(公告)日:2021-02-05
申请号:CN202011307749.2
申请日:2020-11-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种融合型腈水合酶及其应用,属于基因工程领域和酶工程领域。本发明公开了多种稳定性提高的亚基融合型腈水合酶,属于基因工程领域。本发明将来源于Pseudomonas putida NRRL 1886的腈水合酶作为初始对象,分别通过不同种类不同长度Linker融合其β亚基和α亚基,得到多种亚基融合型腈水合酶,稳定性得到显著提高。本发明方法简单高效,不仅得到了稳定性显著提高的腈水合酶可用于工业生产,还总结了基因融合影响腈水合酶稳定性的规律,为提高腈水合酶稳定性提高理论研究。
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公开(公告)号:CN109652418B
公开(公告)日:2020-12-01
申请号:CN201811547733.1
申请日:2018-12-18
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种新终止子及其应用,属于基因工程技术领域。本发明首先对单终止子的活性进行表征,通过不同活性的终止子进行组合串联的方式,得到了一系列可提高目的蛋白产量的新型终止子,以绿色荧光蛋白基因作为终止子上游基因,以红色荧光蛋白基因作为终止子下游基因,表征终止子对上下游基因的调控水平。结果表明,这些新型终止子对于提高上游基因表达量和抑制下游基因表达量都有良好的效果。这对在枯草芽孢杆菌中生产目的蛋白具有重要的应用价值。
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公开(公告)号:CN104774790B
公开(公告)日:2020-11-06
申请号:CN201510158566.1
申请日:2015-04-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效发酵生产L‑丙氨酸的大肠杆菌,属于微生物代谢工程技术领域。本发明提供的大肠杆菌(Escherichia coli)CGMCC No.10628的染色体上副产物乙酸、甲酸、乙醇、琥珀酸、乳酸合成途径编码基因ackA‑pta、pflB、adhE、frdA、ldhA被删除,且其染色体dadX基因被替换为丙氨酸脱氢酶基因。利用该重组菌在28~45℃条件下发酵26h,产生106g/L或以上具有高光学纯度和高化学纯度的L‑丙氨酸,整个发酵过程生产强度达到4.27g/L·h或以上。
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公开(公告)号:CN111718885A
公开(公告)日:2020-09-29
申请号:CN202010725236.7
申请日:2020-07-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌高效稳定的双质粒系统,属于基因工程领域。本发明构建了适用于双质粒转化的载体。省去了先在大肠杆菌中进行多拷贝复制,可直接进行枯草芽孢杆菌的转化,并且能够通过通过外源添加相应的诱导剂,诱导目的蛋白的表达。此系统表达效果稳定,以枯草芽孢杆菌为宿主,得到的产物安全无致病性,适用于多种生产场景。
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