公开(公告)号：CN114672509B

公开(公告)日：2022-12-27

申请号：CN202210173671.2

申请日：2022-02-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘秀霞 ,  崔思楠 ,  詹锦玲 ,  杨艳坤 ,  刘春立 ,  李业 ,  白仲虎

IPC: C12N15/77 ,  C12N15/67 ,  C12N15/66 ,  C12N15/12 ,  C07K14/435

Abstract: 本发明提供了一种具有高表达能力的棒状杆菌和大肠杆菌双表达载体及其构建方法，目的在于提高外源蛋白的蛋白产量；从蛋白表达元件的突变入手，对目的基因前的一段序列加以突变，在不引入副产物，不对宿主菌株产生额外的影响下，提高蛋白产量；原pXMJ19‑egfp的荧光表达量在100000左右，现pXMJ19‑1676‑5’UTR‑egfp的荧光表达量在850000左右，对于5’utr核苷酸序列的加入，蛋白表达元件的绿色荧光蛋白表达能力有了8.5倍左右的提升。本发明不仅仅对egfp这种绿色荧光蛋白有效果，对m‑cherry的表达也有提升效果，说明，本发明中的质粒系统可以尝试应用于其他的外源蛋白表达。

公开(公告)号：CN114672509A

公开(公告)日：2022-06-28

申请号：CN202210173671.2

申请日：2022-02-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘秀霞 ,  崔思楠 ,  詹锦玲 ,  杨艳坤 ,  刘春立 ,  李业 ,  白仲虎

IPC: C12N15/77 ,  C12N15/67 ,  C12N15/66 ,  C12N15/12 ,  C07K14/435

Abstract: 本发明提供了一种具有高表达能力的棒状杆菌和大肠杆菌双表达载体及其构建方法，目的在于提高外源蛋白的蛋白产量；从蛋白表达元件的突变入手，对目的基因前的一段序列加以突变，在不引入副产物，不对宿主菌株产生额外的影响下，提高蛋白产量；原pXMJ19‑egfp的荧光表达量在100000左右，现pXMJ19‑1676‑5’UTR‑egfp的荧光表达量在850000左右，对于5’utr核苷酸序列的加入，蛋白表达元件的绿色荧光蛋白表达能力有了8.5倍左右的提升。本发明不仅仅对egfp这种绿色荧光蛋白有效果，对m‑cherry的表达也有提升效果，说明，本发明中的质粒系统可以尝试应用于其他的外源蛋白表达。

公开(公告)号：CN114457104A

公开(公告)日：2022-05-10

申请号：CN202210068136.0

申请日：2022-01-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘秀霞 ,  惠萌萌 ,  詹锦玲 ,  杨艳坤 ,  李业 ,  刘春立 ,  白仲虎

IPC: C12N15/77 ,  C12N15/38 ,  C12N15/66 ,  C12N1/21 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种猪伪狂犬病病毒糖蛋白gD的表达载体及其制备方法和应用，在启动子下游含有PRV‑gD基因的表达质粒；其中，所述启动子为组成型启动子H36,所述组成型启动子H36的基因序列如SEQ ID NO.4所示，所述PRV‑gD基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明表达的PRV‑gD具有免疫活性，为猪伪狂犬病亚单位疫苗的研究和建立高效免疫学检测技术提供技术指导和材料。

公开(公告)号：CN113265416A

公开(公告)日：2021-08-17

申请号：CN202110475309.6

申请日：2021-04-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘秀霞 ,  王亚丽 ,  崔思楠 ,  白仲虎 ,  杨艳坤 ,  李业 ,  刘春立

IPC: C12N15/77

Abstract: 本发明公开了一种分子伴侣质粒系统及其应用，其包括四种表达载体，所述四种表达载体为GSL1、GSL2、DJ1EK、DJ2EK。该分子伴侣质粒系统能有效促进谷氨酸棒杆菌外源蛋白的可溶性表达。

公开(公告)号：CN116732108A

公开(公告)日：2023-09-12

申请号：CN202310197297.4

申请日：2023-03-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 杨艳坤 ,  李康 ,  白仲虎 ,  杨少杰 ,  刘秀霞 ,  刘春立 ,  李业 ,  詹锦玲

IPC: C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  C12N15/81

Abstract: 本发明公开了一种提高基因敲除效率的方法及其应用。本发明提供的敲除技术是基于CRISPR‑Cas9质粒，进一步采用“回补策略”来进行目标基因的敲除。本发明所述的“回补策略”即是将目标敲除基因突变后表达于外源质粒，将基因组上的目标基因敲除后再将回补质粒消除，从而达到目标基因的缺失。“回补策略”的使用使得目标基因的敲除效率从0提高到了8％。

公开(公告)号：CN113549619A

公开(公告)日：2021-10-26

申请号：CN202110785194.0

申请日：2021-07-12

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘秀霞 ,  余心宇 ,  高雄 ,  杨艳坤 ,  刘春立 ,  李业 ,  白仲虎

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/77 ,  C12N1/21 ,  C07K14/435 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子、其质粒载体及其应用，谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子，其基因序列如SEQ ID NO.5所示。本发明使用启动子PA368构建蛋白表达载体，并通过在培养基中添加乙醇，实现重组蛋白在谷氨酸棒杆菌二次生长阶段的高水平表达，克服了现有启动子强度低、诱导物渗透性且昂贵等不足，相比于现有的谷氨酸棒杆菌强启动子PH36，本发明启动子PA368调控下的绿色荧光蛋白表达水平提高了2.43倍，同时在分泌重组蛋白VHH及XynA时可以实现更高的表达水平。