一种鱼源抗菌肽pleurocidin突变体及其应用

    公开(公告)号:CN105968179A

    公开(公告)日:2016-09-28

    申请号:CN201610363295.8

    申请日:2016-05-30

    发明人: 侯竹美

    CPC分类号: C07K14/461

    摘要: 本发明提供了一种鱼源抗菌肽pleurocidin突变体及其应用。本发明通过分析鱼源抗菌肽pleurocidin的氨基酸序列,将原始25个氨基酸中的3处氨基酸进行突变(K8R、V16K和L21R),同时为了保证抗菌肽C末端的酰胺化,在C末端添加了天冬酰胺N。将鱼源抗菌肽pleurocidin突变体基因进行毕赤酵母偏爱密码子优化后人工合成,克隆于毕赤酵母中表达,结果重组表达的鱼源抗菌肽pleurocidin突变体与原始抗菌肽相比抗菌效力获得显著提高。将重组菌株发酵规模放大到发酵罐水平,发酵液进一步纯化后可制成抗菌肽制剂,用于水产动物疾病的预防和治疗。

    池沼公鱼抗凝血蛋白及其制备方法

    公开(公告)号:CN105218655A

    公开(公告)日:2016-01-06

    申请号:CN201510624892.7

    申请日:2015-09-28

    CPC分类号: C07K14/461

    摘要: 本发明公开了池沼公鱼抗凝血蛋白及其制备方法,它包括:1)池沼公鱼处理;2)抗凝蛋白提取;3)抗凝蛋白初级沉淀;4)透析脱盐及浓缩;5)阴离子层析,得到抗凝蛋白E峰。所述的抗凝蛋白E峰经琼脂糖凝胶过滤层析后收集第二峰,即抗凝蛋白E-Ⅱ峰,透析后冻干。所述的抗凝蛋白E-Ⅱ峰经葡聚糖凝胶过滤层析,收集第一峰,即抗凝蛋白E-Ⅱ-1峰。抗凝蛋白E-Ⅱ-1浓度为1mg/mL时,APTT值为128.06s,正常对照值为24.56s。该抗凝蛋白的分子量约为37KDa,具有体外抗凝的作用,它来自池沼公鱼,安全性高、作用缓和,用于抗凝血功能食品及抗凝血药物具有广阔的市场前景,并对血栓性疾病的预防与治疗具有重大意义。

    重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白及制备方法

    公开(公告)号:CN104628842A

    公开(公告)日:2015-05-20

    申请号:CN201410700412.6

    申请日:2014-11-28

    IPC分类号: C07K14/46 C12N15/12 C12N15/70

    CPC分类号: C07K14/461 C12N15/70

    摘要: 本发明公开一种重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2(IRF2)蛋白及制备方法,提取新鲜红鳍东方鲀肾脏总RNA,并反转录进行第一链的cDNA的合成;以所得到的第一链的cDNA为模板、设计引物扩增该基因的蛋白编码序列并与pMD19T载体连接得重组质粒,经双酶切后再与表达载体pET-32a(+)连接,获得重组表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中;通过IPTG诱导实现了重组蛋白的可溶性表达。该表达质粒表达的融合蛋白带有组氨酸标签,将细胞破碎后取上清纯化,避免了样品的变性和复性,不但操作简单,更主要的是蛋白结构不受破坏;重组蛋白纯度好、得率高且不易降解,适应于工业化生产。