公开(公告)号：CN108753833A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810525963.1

申请日：2018-05-28

申请人： 上海海洋大学

发明人： 张庆华 ,  岳倩文 ,  季策 ,  徐行 ,  张秋月 ,  李伟明

IPC分类号： C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  A01K67/027

CPC分类号： C12N15/902 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/40 ,  C07K14/47 ,  C12N15/113 ,  C12N2310/20

摘要： 本发明公开了涉及一种斑马鱼notch3基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch3基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch3‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；对PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼胚胎一细胞期中，培养获得稳定遗传的notch3基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，通过选择独特的一段打靶区，使得斑马鱼中的notch3基因被敲除，又不“误伤”其他基因，形成Notch3敲除的斑马鱼；另外，本发明还公开了notch3基因缺失斑马鱼突变体的表型，对于研究Notch信号通路意义重大。

公开(公告)号：CN108040459A

公开(公告)日：2018-05-15

申请号：CN201680028215.1

申请日：2016-05-17

申请人： 马里兰大学巴尔的摩县

发明人： 翁天佐 ,  约纳坦·祖海尔

IPC分类号： A01K67/027 ,  C12N15/113 ,  C12N15/87

CPC分类号： A01K67/027 ,  A01K2207/05 ,  A01K2207/20 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/02 ,  A01K2267/03 ,  C12N15/113 ,  C12N15/87 ,  C12N2310/11 ,  C12N2310/3233 ,  C12N2310/351 ,  C12N2320/32 ,  Y02A90/40

摘要： 提供了用于将至少一种药剂递送至来自产卵水生动物的一个或多个卵中的方法，该方法包括使来自所述产卵水生动物的一个或多个受精卵或未受精卵在含胍化合物存在下与该至少一种药剂接触，该含胍化合物能提高所述一个或多个卵的绒毛膜的通透性。提供了用于进行药物筛选和化合物毒性测定的方法。还提供并描述了用于产生用于水产养殖、水族贸易和入侵物种控制的在繁殖上绝育的鱼和水生动物的方法。该方法包括通过施用造成可育的性腺发育失败的药剂来中断性腺发育。通过在包含感兴趣的药剂的浸没介质中接触卵，可以在受精前或受精后直接将药剂递送至卵中。

公开(公告)号：CN107881200A

公开(公告)日：2018-04-06

申请号：CN201711157630.X

申请日：2017-11-20

申请人： 扬州大学

发明人： 崔恒宓 ,  薛松磊 ,  孙振 ,  欧阳娟 ,  徐慧 ,  沈晖

IPC分类号： C12N15/90 ,  C12N15/89 ,  C12N9/22 ,  A01K67/027

CPC分类号： C12N15/902 ,  A01K67/0275 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/03 ,  C12N9/22 ,  C12N15/89

摘要： 本发明提供一种应用于模式动物斑马鱼转基因的快速筛选方法，包括以下步骤：1)构建含有强启动子、目的基因和标签基因的基因表达载体；2)设计出针对靶基因的特异性靶点，获得靶向SgRNA序列；3)在特异性靶点的基础上构建同源重组载体；4)将同源重组载体片段、SgRNA序列体外转录合成的mRNA，以及体外转录合成的nCas9-mRNA，三者共同注射斑马鱼受精卵；5)先筛选出靶基因功能缺失的斑马鱼；再通过标签基因进行第二次筛选，获得标签基因表达个体，从而获得表达目的基因表达个体。该方法可以对早期斑马幼鱼进行筛选，达到快速建立转基因模型目的。

公开(公告)号：CN107734965A

公开(公告)日：2018-02-23

申请号：CN201680019700.2

申请日：2016-04-06

申请人： 全国农业协同组合连合会

发明人： 出田笃司 ,  小西正人 ,  千代丰 ,  山下司朗 ,  山口辽作 ,  相马茉莉绘

IPC分类号： A01K67/027 ,  C12N5/10 ,  C12N15/09

CPC分类号： A01K67/0276 ,  A01K67/027 ,  A01K67/0271 ,  A01K2207/12 ,  A01K2217/077 ,  A01K2227/101 ,  A01K2227/40 ,  A61D19/04 ,  C12N15/8509 ,  C12N2510/00 ,  C12N2517/04

摘要： 本发明公开了一种即使在大动物中也可进行敲除个体的稳定性的量产的新型手段。本发明的方法是生产来自不同个体的配子的非人大型哺乳动物或鱼类(非人动物)的制作方法，该方法包括：向来自第1非人动物的、具有nanos3基因功能被抑制的基因组的卵裂期的胚中移植来自第2非人动物的至少1个多能细胞以调制嵌合胚，产生该嵌合胚，得到个体。作为来第2非人动物的多能细胞，使用具有敲除了所期望的基因的基因组的多能细胞时，在第1非人动物中可以制作敲除了所期望的基因的生殖细胞，因此通过这样的非人动物的交配可以容易地量产敲除非人动物。

公开(公告)号：CN107058386A

公开(公告)日：2017-08-18

申请号：CN201710240061.9

申请日：2017-04-13

申请人： 厦门大学

发明人： 左正宏 ,  沈超 ,  周懿翕 ,  王重刚

IPC分类号： C12N15/85 ,  A01K67/027

CPC分类号： C12N15/8509 ,  A01K67/0278 ,  A01K2217/203 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/0393 ,  C12N2800/60

摘要： 一种转基因斑马鱼的制备方法，涉及基因工程。1)CYP1A启动子序列的改造；2)Tol2转座子系统敲入质粒的构建和显微注射样品的制备；3)斑马鱼胚胎的显微注射和继代培养。提供一种含有12个DRE的CYP1A启动子的构建方法，以及含有该启动子连接绿色荧光蛋白基因的重组Tol2转座子敲入质粒，质粒线性化纯化的方法和显微注射样品的配方。通过显微注射技术制备得到的Tg(pCYP1A‑6×DRE‑EGFP)和Tg(pCYP1A‑12×DRE‑EGFP)转基因斑马鱼，对比了含有6个DRE与12个DRE启动子的活性。

公开(公告)号：CN106191112A

公开(公告)日：2016-12-07

申请号：CN201610599740.0

申请日：2016-07-27

申请人： 湖南师范大学

发明人： 陈湘定 ,  刘薇薇 ,  苏幸 ,  邵梦思 ,  邓云 ,  谭丽君 ,  邓红文

IPC分类号： C12N15/85 ,  A01K67/027

CPC分类号： C12N15/8509 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/02 ,  A01K2267/03 ,  C07K14/461 ,  C12N2800/106 ,  C12N2800/80 ,  C12N2810/10

摘要： 本发明公开了一种基因敲除选育wnt16基因缺失型斑马鱼的方法，与现有技术相比，本发明能更高效且更精确地在生物体基因组中沉默特定基因，且制作简单、成本低，且可同时对靶基因上多个位点进行剪切，沉默任意数目的单个基因。用于进行基因与骨骼发育的相关研究，也可进项其他方面探索研究，检测wnt16基因的缺失与其他器官的发育是否具有相关性，例如心脏具有很好的医学研究价值，同时敲除wnt16基因的斑马鱼其成长周期明显缩短，也具有很好的商业价值。

公开(公告)号：CN105918255A

公开(公告)日：2016-09-07

申请号：CN201610385062.8

申请日：2016-06-02

申请人： 贵州医科大学

发明人： 舒莉萍 ,  何志旭 ,  周艳华 ,  庹媛媛 ,  尚鲁俊 ,  吴西军 ,  崔冬冰

IPC分类号： A01K67/027 ,  A01K67/02 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65

CPC分类号： A01K67/0275 ,  A01K67/02 ,  A01K2217/05 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/0306 ,  C12N15/65 ,  C12N15/8509 ,  C12N2800/106

摘要： 本发明公开了一种G6PD118‑144位点缺陷的转基因斑马鱼模型，该模型是由红系细胞特异性启动子gata1驱动118‑144位点缺失的突变g6pd基因，同时也是表达EGFP的可示踪的转基因斑马鱼模型。其优点在于：gata‑1是原始红系发育中的特异性的转录因子，标记早期红系细胞。在24hpf，斑马鱼的血液循环开始建立，利用gata‑1 作为驱动突变的g6pd 基因的启动子可以使突变型g6pd 基因在红细胞中特异性表达。gata1同时驱动g6pd与egfp基因，可实现突变型g6pd基因在红细胞中表达的“可示踪”观察。斑马鱼胚胎与成鱼通体透明，构建的该动物模型可以在显微镜下示踪胚胎和鱼体内荧光标记红细胞在药物诱导下的变化规律，为筛选治疗G6PD缺乏症的药物提供可视的动物模型。

公开(公告)号：CN102199595A

公开(公告)日：2011-09-28

申请号：CN201010246876.6

申请日：2010-08-04

申请人： 香港城市大学

发明人： 郑淑娴 ,  陈雪平

IPC分类号： C12N15/11 ,  C12N15/63 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12N5/10 ,  A01K67/027 ,  G01N21/64

CPC分类号： A01K67/0275 ,  A01K2217/05 ,  A01K2217/052 ,  A01K2217/203 ,  A01K2217/206 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/0393 ,  C12N15/63 ,  C12N15/8509 ,  C12N2800/106 ,  C12N2830/002 ,  C12N2830/008

摘要： 本发明涉及一种表达盒，其包含编码报告蛋白的报告核苷酸序列、从青鳉鱼分离的雌激素反应5′-调控核苷酸序列和可操作地连接到所述报告核苷酸序列3′端的3′-调控区，其中所述调控核苷酸序列可操作地连接到所述报告核苷酸序列的5′端，以在雌激素或雌激素样化合物存在下诱导报告蛋白表达。本发明还涉及具有上述表达盒的转基因鱼。本发明还涉及出于各种目的使用所述转基因鱼的方法，所述目的包括例如：(1)鉴定雌激素内分泌干扰物；(2)监测测试样品的雌激素样活性；(3)鉴定抗雌激素内分泌干扰物；和(4)研究内分泌干扰物对肝脏再生的影响。本发明还公开了宿主细胞和水生动物的转基因细胞等。

公开(公告)号：CN1294808C

公开(公告)日：2007-01-17

申请号：CN03125455.1

申请日：2003-09-26

申请人： 中国科学院水生生物研究所

发明人： 胡炜 ,  朱作言 ,  汪亚平 ,  黎双飞

IPC分类号： A01K61/00

CPC分类号： C07K14/461 ,  A01K67/0275 ,  A01K2217/05 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/02

摘要： 本发明公开了一种不育转基因鱼的制备方法，以鲤鱼肌动蛋白基因启动子作为启动子，以反义的286bp鲤鱼鲑鱼型促性腺激素释放激素基因互补脱氧核糖核酸片段[包括sGnRH十肽、促性腺激素释放激素相关肽编码区和64bp的3′非编码区序列]为靶位基因，草鱼生长激素基因3′侧翼序列为终止顺序，构建鲑鱼型促性腺激素释放激素反义RNA表达载体，采用显微注射法将重组DNA片段导入鲤鱼受精卵，聚合链式酶反应及放射免疫检测筛选获得不育转基因鱼。本发明方法易行，操作方便，为解决转基因鱼的遗传和生态安全问题提供了具有普遍适用性的技术平台。

公开(公告)号：CN1528131A

公开(公告)日：2004-09-15

申请号：CN03125455.1

申请日：2003-09-26

申请人： 中国科学院水生生物研究所

发明人： 胡炜 ,  朱作言 ,  汪亚平 ,  黎双飞

IPC分类号： A01K61/00

CPC分类号： C07K14/461 ,  A01K67/0275 ,  A01K2217/05 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/02

摘要： 本发明公开了一种不育转基因鱼的制备方法，以鲤鱼肌动蛋白基因启动子作为启动子，以反义的286bp鲤鱼鲑鱼型促性腺激素释放激素基因互补脱氧核糖核酸片段[包括sGnRH十肽、促性腺激素释放激素相关肽编码区和64bp的3′非编码区序列]为靶位基因，草鱼生长激素基因3′侧翼序列为终止顺序，构建鲑鱼型促性腺激素释放激素反义RNA表达载体，采用显微注射法将重组DNA片段导入鲤鱼受精卵，聚合链式酶反应及放射免疫检测筛选获得不育转基因鱼。本发明方法易行，操作方便，为解决转基因鱼的遗传和生态安全问题提供了具有普遍适用性的技术平台。