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公开(公告)号：CN105274129B
公开(公告)日：2019-01-04
申请号：CN201510817023.6
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种信号肽及其在利用淀粉产L‑精氨酸重组菌中的应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过分子克隆技术和基因工程技术将来源Streptomyces kathirae CCTCC M 2012432不带自身信号肽的α‑淀粉酶与不同微生物来源的Sec和Tat两个主要分泌途径的十二条信号肽分别融合，在高产L‑精氨酸菌种中表达，筛选出一条高效分泌α‑淀粉酶的信号肽SEQ ID N0.1。首次报道，以该信号肽介导分泌α‑淀粉酶的重组钝齿棒状杆菌CGMCC No.0890/pMSPamy能利用廉价淀粉发酵生产L‑精氨酸，最优碳源添加条件下5L发酵罐上产量为48g/L。
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公开(公告)号：CN108642100A
公开(公告)日：2018-10-12
申请号：CN201810468484.0
申请日：2018-05-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种在钝齿棒杆菌中合成L-鸟氨酸的方法，属于基因工程和代谢工程领域。本发明利用表达质粒pDXW10质粒，将N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶、N-乙酰谷氨酸合酶进行表达并且对其RBS进行优化同时对起始密码子进行替代。5-L发酵罐发酵培养重组钝齿棒杆菌SYPO/pDXW10-EcargAHY-SmargE b72h，L-鸟氨酸的产量达到46.2g/L，比出发菌株钝齿棒杆菌，L-鸟氨酸的产量提高了62.2％，生产强度达到0.642g/L/h，并且糖酸转化率为0.414g/g。
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公开(公告)号：CN105296456B
公开(公告)日：2018-08-07
申请号：CN201510819438.7
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了种酸性稳定的谷氨酸脱羧酶(GAD)的pH稳定性向中性范围偏移的突变体,属于生物工程领域。将来源于植物乳杆菌GB01‑21谷氨酸脱羧酶的谷氨酸脱羧酶编码基因进行定点突变,主要将第91位的谷氨酸E分别突变为精氨酸R或丙氨酸A。谷氨酸脱羧酶突变体分别在pH6.5时的相对酶活由原来的38%提高至72%或84%,在中性pH范围内的酶活稳定性显著提高。以重组大肠杆菌合成的谷氨酸脱羧酶突变体进行转化时,GABA产量达到260g/L,产率为99.6%;而以重组谷氨酸棒杆菌合成的谷氨酸脱羧酶突变体进行转化时,GABA产量达到116g/L,产率为99.5%。本发明减少了发酵设备在酸性条件下的损耗,为高效合成γ‑氨基丁酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN108103049A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201711354028.5
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种嗜热L‑天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法，属于基因工程、酶工程和发酵工程领域。在枯草芽孢杆菌168中，以嗜热菌Pyrococcus yayanosii CH1来源的L‑天冬酰胺酶编码基因作为模板，以易错PCR技术构建突变文库，并通过“同步细胞破碎和酶活测定”的高通量筛选方法，筛选出比酶活提高的突变株。分析正突变株所包含的突变残基，构建比酶活得到提高的复合突变株S17G/A90S/R156S/K272A，其比酶活达到3108U/mg。利用强启动子P43及RBS优化的手段，提高复合突变株在枯草芽孢杆菌168中的表达量。最后通过培养基优化和pH补料偶联策略,将含L‑天冬酰胺酶复合突变株基因的枯草芽孢杆菌168在5L发酵罐中产酶发酵，L‑天冬酰胺酶酶活产量达到到6453±127U/mL。
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公开(公告)号：CN107988194A
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201711350235.3
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的L-天冬氨酸α-脱羧酶突变体及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第56位谷氨酸突变成丝氨酸。本发明得到的突变体在大肠杆菌中表达，经过对纯酶的酶活测定，突变酶E56S的酶活相对原始酶BsADC提高了55％，并且用水作为溶剂进行的产β丙氨酸实验，可以实现8h产215gβ丙氨酸，且其转化率为94％。本发明表明56位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107955805A
公开(公告)日：2018-04-24
申请号：CN201711323996.X
申请日：2017-12-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种稳定性提高的NADH氧化酶及其在乙偶姻生产中的应用，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的氨基酸的基础上，将第65位丙氨酸突变成半胱氨酸。本发明得到的突变体酶60度的半衰期(t1/2)较突变期提高了1.9倍。本发明表明65位氨基酸残基突变成半胱氨酸与天然NADH氧化酶的125位半胱氨酸残基形成正确的二硫键从而提高了酶的稳定性，加强了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN106636160A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201611010801.1
申请日：2016-11-17
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N15/70 , C12N9/0073 , C12N2800/101 , C12P33/02 , C12Y114/13054
Abstract: 一种利用重组Escherichia coli全细胞转化AD生成ADD的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明首先获得新金色分枝杆菌中3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶(KSDD)的基因扩增，然后利用pET28a质粒，实现了该基因在模式菌株大肠杆菌BL21中的过量表达。本发明构建以4‑AD为底物全细胞转化为方法的高产ADD的大肠杆菌工程菌株，对该菌株的酶活力及发酵性能进行研究发现3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的活力较出发菌株有了明显提高，以0.1％(w/v)4‑AD为底物，全细胞转化10h，底物摩尔转化率达到76.5％，是出发菌株相对转化率的25倍。本发明为微生物一步发酵法生产ADD的工业化提供了有益的指导。
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公开(公告)号：CN106520649A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201610979535.7
申请日：2016-11-08
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0006 , C12P7/18 , C12Y101/01027 , C12Y101/01028
Abstract: 本发明公开了一种利用钝齿棒杆菌全细胞转化葡萄糖合成2,3-丁二醇的方法，属于基因工程领域。本发明将来源于枯草芽孢杆菌alsSD基因转化到钝齿棒杆菌Corynebacterium crenatum SDNN403中，同时敲除其乳酸脱氢酶基因(ldh)，构建C.crenatumΔldh/pXMJ19-alsSD。基于获得的基因工程菌，全细胞转化100g/L葡萄糖合成2,3-丁二醇，产量达到28±1.1g/L，摩尔转化率达到理论值的57％。该菌在利用廉价葡萄糖一步法转化生产2,3-丁二醇方面有一定的工业化潜力。
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公开(公告)号：CN106282080A
公开(公告)日：2017-01-04
申请号：CN201610654331.6
申请日：2016-08-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种新金色分枝杆菌来源的甾酮C27-单加氧酶及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过基因敲除及加强表达的方法，在新金色分枝杆菌中筛选到甾醇边链降解过程中关键酶SMO的三个同工酶。将其分别在高产雄甾二烯二酮(ADD)的新金色分枝杆菌中加强表达，ADD产量得到明显提高，其中SMO2的效果最明显。通过过量表达SMO2，ADD最终产量从5.2g/L提高到7.3g/L。本发明为微生物发酵法提高ADD产量的工业化提供了有益的指导。
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公开(公告)号：CN106191190A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610576782.2
申请日：2016-07-20
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P33/02 , C12N9/0065 , C12Y111/01006
Abstract: 一种消除过氧化氢提高雄甾二烯二酮产量的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明首先获得短小芽孢杆菌中过氧化氢酶(CAT)的基因扩增，然后利用pMA5-ksdd质粒，实现了CAT与KSDD在模式菌株枯草芽孢杆菌168中的共表达。本发明构建以4-AD为底物全细胞转化为方法的高产ADD的枯草芽孢杆菌工程菌株，对该菌株的酶活力及发酵性能进行研究发现3-甾酮-△1-脱氢酶的活力较出发菌株有了明显提高，以0.3％(w/v)4-AD为底物，全细胞转化10h，最终底物摩尔转化率几乎能达到100％，ADD的产量最终达到2.86g/L，比原始菌提高了约4.4倍。本发明为微生物一步发酵法生产ADD的工业化提供了有益的指导。
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