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公开(公告)号：CN1724670A
公开(公告)日：2006-01-25
申请号：CN200510027317.5
申请日：2005-06-30
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12N15/63 , C12N15/66 , C12N15/70 , C12N15/33 , C07K14/005
Abstract: 一种H9N2型禽流感NS1蛋白表达质粒pET－NS1。提供的pET－NS1表达质粒是通过将pET－32a(+)和经PCR扩增后含有限制性酶切位点的禽流感NS1基因酶切，连接，获得的表达质粒；pET－NS1表达质粒转化大肠杆菌BL21种，用IPTG诱导，即可表达出H9N2型禽流感NS1蛋白表达质粒pET－NS1的蛋白翻译区核苷酸序列，在这一段序列中包含H9N2型禽流感病毒NS1蛋白的核苷酸序列；还可表达出禽流感NS1蛋白表达质粒pET－NS1的蛋白翻译区氨基酸序列，这一段序列含有H9N2型禽流感NS1蛋白的氨基酸序列。本发明诱导表达的适用温度范围广，方便了样品的鉴定和纯化，使蛋白结构不受破坏。克服了纯化蛋白容易降解的缺点，可以在－40℃长时间保存。所表达的NS1蛋白还可用于禽流感病毒野毒感染的检测。
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公开(公告)号：CN119733037A
公开(公告)日：2025-04-01
申请号：CN202411951321.X
申请日：2024-12-27
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及葡萄球菌裂解酶LysNM及其编码基因在制备抗菌剂中的应用。本发明提供了葡萄球菌裂解酶LysNM及其编码基因在制备抗菌剂中的新应用。体外实验结果表明：葡萄球菌裂解酶LysNM在体外的杀菌效率达到98.80％；葡萄球菌裂解酶LysNM在血浆中稳定性较好；葡萄球菌裂解酶LysNM几乎不影响细胞增殖，且对细胞没有毒性；葡萄球菌裂解酶LysNM几乎不会引起促炎性细胞因子的表达。体内实验结果表明：葡萄球菌裂解酶LysNM在小鼠体内使用具备良好的安全性，并且在感染细菌后立即使用葡萄球菌裂解酶LysNM进行治疗，小鼠存活率能够达到70％。
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公开(公告)号：CN111187782B
公开(公告)日：2022-10-14
申请号：CN202010064111.4
申请日：2020-01-20
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12N15/50 , C07K14/165 , C12N15/866 , A61K39/215 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供了一种猪Delta冠状病毒病毒样颗粒及其制备方法和应用，首先设计并扩增猪Delta冠状病毒结构蛋白基因，并利用结构蛋白基因构建重组穿梭质粒，利用重组穿梭质粒构建重组杆粒，将重组杆粒转染Sf9细胞，得到表达猪Delta冠状病毒结构蛋白的重组杆状病毒，将重组杆状病毒感染Sf9细胞，纯化，得到猪Delta冠状病毒样颗粒；本发明的制备方法使用无血清培养的Sf9细胞表达制备，结合蔗糖密度溶液超速离心获得PDCoV‑VLP病毒样颗粒，该PDCoV‑VLP病毒样颗粒具有完整性，免疫原性好，免疫动物产生抗体滴度和安全性高的优点，可用于猪Delta冠状病毒病毒病的预防，故具有良好的开发和应用前景。
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公开(公告)号：CN114908053A
公开(公告)日：2022-08-16
申请号：CN202210436750.8
申请日：2022-04-24
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种孔雀成纤维永生化细胞系的制备方法及其在病毒扩增中的应用，通过将编码hTERT基因的真核表达质粒pCI‑neo‑hTERT转入原代培养的孔雀成纤维细胞，经筛选后连续培养至50代，得到永生化的细胞系PEF‑1，用于感染新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)及水泡性口炎病毒(VSV)，实现高效增殖。本发明采用基因重组技术，将端粒酶逆转录酶基因(hTERT)转染孔雀原代成纤维细胞，首次建立制备永生化的孔雀细胞系的方法。制备出永生化的孔雀成纤维细胞，生长旺盛、速度快。禽流感和新城疫等禽类病毒可以在该细胞中高效复制，且复制能力显著高于目前在用的MDCK细胞，使用方便，可以用来生产禽用病毒疫苗。
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公开(公告)号：CN109180822B
公开(公告)日：2021-08-10
申请号：CN201811353476.8
申请日：2018-11-14
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种猪链球菌B细胞优势表位串联蛋白，同时本发明涉及一种猪链球菌B细胞优势表位串联疫苗的制备方法，第三方面，本发明公开了B细胞优势表位串联基因和融合蛋白在制备疫苗中的应用，本发明通过软件筛选出猪链球菌保护性抗原GAPDH、MRP和DLDH的B细胞优势表位并以氨基酸序列为GGGG的柔性片段进行串联，将上述串联片段构建重组表达载体进行原核表达，纯化表达的融合蛋白并与弗氏佐剂制成疫苗制剂，经小鼠免疫效力评价表明该疫苗能够对2型猪链球菌提供高效的免疫保护效力，相对于传统灭活疫苗和弱毒疫苗，本发明提供的基因工程疫苗具备制备流程方便安全，生产效率高，所得产物纯度高、稳定性好、产量高、安全性高等优点。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110055254B
公开(公告)日：2021-06-18
申请号：CN201910352557.4
申请日：2019-04-28
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12N5/10 , C12Q1/686
Abstract: 本发明公开了一种靶向敲除鸡IRF7基因的方法及其在疫苗制备中的应用；基于CRISPR/Cas9，设计针对鸡IRF7基因的gRNA靶序列并连接至VK001‑02质粒，获得鸡IRF7基因打靶载体；利用脂质体将打靶载体转染至鸡成纤维细胞中。通过嘌呤霉素筛选转染成功的细胞后，经有限倍比稀释法筛选获得敲除chIRF7基因的鸡成纤维细胞。该敲除细胞系经TCID50验证表明其可使病毒滴度增高。该方法适用于鸡天然免疫模式识别受体所介导的干扰素表达通路中重要转录因子IRF7的作用及功能的研究。同时本发明所构建的敲除细胞系可使许多先天免疫通路所介导的干扰素β表达水平下调，利于病毒繁殖，可用于疫苗制备中病毒的扩增。
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公开(公告)号：CN108384804B
公开(公告)日：2021-03-09
申请号：CN201810136202.7
申请日：2018-02-09
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N5/10
Abstract: 本发明提供了一种鸡TBK1基因的小干扰RNA质粒的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：S1、设计针对鸡TBK1的两条干扰靶序列；S2、根据步骤S1设计的两条干扰靶序列，分别合成用于构建shRNA片段的两组互补的单链DNA序列，并分别在所述两组互补的单链DNA序列中引入相应的酶切位点；S3、将所述两组互补的单链DNA序列分别经变性退火后，分别形成带有黏末端的双链DNA片段；然后，分别将所述双链DNA片段与载体连接，得到所述鸡TBK1基因的小干扰RNA。我们通过细胞水平实验，证实本发明构建的靶向鸡TBK1小干扰RNA的干扰质粒能高效特异性抑制鸡TBK1基因的表达，为深入研究TBK1在鸡抗病毒先天免疫中的作用提供了平台。
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公开(公告)号：CN102539772A
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201210002401.1
申请日：2012-01-06
Applicant: 上海交通大学
IPC: G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一种检测伏马毒素B1的方法，包括以下步骤：将FB1半抗原与OVA偶联，得到偶联物FB1-OVA；将抗FB1单克隆抗体与免疫磁珠结合；将抗体-磁珠结合物加入EP管中，洗涤，将待侧样品的萃取液加入上述管中，震荡；去除上清液，洗涤，将OVA-FB1加入上述管中，震荡；去除上清液，洗涤，将抗FB1单克隆抗体加入上述管中，震荡；去除上清液，洗涤，将HRP标记羊抗鼠二抗加入上述管中，震荡；去除上清液，洗涤，加入发光底物，震荡，测定发光值；制作标准曲线，再根据待测样品的发光值，通过标准曲线得到对应的FB1浓度。本发明采用抗FB1单克隆抗体，与其他谷物中的真菌毒素无交叉反应，特异性强，减少了假阳性率。
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公开(公告)号：CN102520177A
公开(公告)日：2012-06-27
申请号：CN201110402715.6
申请日：2011-12-07
Applicant: 上海交通大学
IPC: G01N33/577 , G01N33/531
Abstract: 本发明涉及一种定量检测玉米赤霉烯酮的方法，包括如下步骤：1、制备偶联物ZEN-BSA和ZEN-OVA；2、制备抗ZEN的单克隆抗体；3、制备胶体金，标记抗ZEN的单克隆抗体；将标记后的单克隆抗体喷涂到金标垫上；4、在硝酸纤维素膜上进行点样；5、组装成试纸条；6、绘制ZEN浓度与显色值的标准曲线，将待测样品的显色值带入标准曲线中，得到待测样品中ZEN的含量。本发明检测对象单一且针对性强，准确率高，检测速度快，所需时间短，不需经培训的专业人员就可使用本发明方法来检测，满足粮食储存销售机构、出入境、海关等检验部门快速、正确地判断玉米赤霉烯酮含量的要求，并且便于基层推广和运用。
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公开(公告)号：CN102384977A
公开(公告)日：2012-03-21
申请号：CN201110239694.0
申请日：2011-08-19
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种玻碳电极免疫检测玉米赤霉稀酮的方法，包括如下步骤：将ZEN半抗原通过活泼酯法与OVA偶联，得到偶联物ZEN-OVA；对待侧样品进行萃取，得到萃取液；将ZEN-OVA包被在酶标反应板上，封闭后分别加入已知的不同浓度的ZEN纯品与抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的混合溶液，待测样品萃取液与抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的混合溶液，孵育；孵育后加入ALP标记的二抗，之后再加入底物缓冲液和终止液，进行氧化峰电流测定，得到结果；制作标准曲线，通过标准曲线得到待测样品萃取液中的ZEN浓度。本发明可以快速、准确检测出待测样品中含有的ZEN量，同时相比传统的ELISA方法还具有仪器便携，利于现场检测的特点。
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