一种分枝杆菌的17β-羟基类固醇脱氢酶突变体及其异源表达

    公开(公告)号:CN112592904A

    公开(公告)日:2021-04-02

    申请号:CN202011620795.8

    申请日:2020-12-31

    申请人: 江南大学

    发明人: 许正宏 李会 刘伟

    摘要: 本发明公开了一种分枝杆菌的17β‑羟基类固醇脱氢酶突变体及其异源表达,属于酶基因工程及酶工程领域。本发明提供一种来自于分枝杆菌(Mcobacterium sp.)LY‑1的放线菌17β‑羟基类固醇脱氢酶17β‑HSDy1及其基因序列,以pMA5为表达质粒,以枯草芽孢杆菌WB600为表达宿主,实现了分枝杆菌LY‑1的17β‑HSDy1的外源表达。对软件模拟获得的该酶关键T239位点,突变成了酪氨酸,酶活提高了19.2%,达到9571.77U·mg‑1。对突变获得的重组枯草芽孢杆菌WB600‑pMA5‑17βHSDy1‑T239Y进行酶活‑生长曲线的测定,在发酵28h时,重组枯草芽孢杆菌WB600‑pMA5‑17βHSDy1‑T239Y的比酶活达到最高。该异源表达菌株可用于雄甾烯‑1,4‑烯‑3,17‑二酮转化宝丹酮的生产,具有潜在的工业应用。

    利用角蛋白酶进行金纳米粒子制备的方法及其应用

    公开(公告)号:CN109456958A

    公开(公告)日:2019-03-12

    申请号:CN201811320351.5

    申请日:2018-11-07

    申请人: 江南大学

    IPC分类号: C12N9/56 C12P3/00 C12R1/125

    摘要: 本发明公开了一种生物法制备金纳米粒子,即采用角蛋白酶进行金纳米粒子制备的方法,属于工业生物技术领域。基于本专利所采用的角蛋白酶突出的还原性能,将角蛋白酶液加入到配制好的不同浓度氯金酸溶液中,通过控制氯金酸溶液浓度、酶液添加量和反应时间等因素逐步进行合成反应优化,成功制备获得金纳米粒子,粒径为30nm左右,Zeta电位为-13mV。该生物法制备金纳米粒子,可以有效解决传统的物理法所需设备的限制和化学法存在环境污染等问题,同时,该方法周期短,工艺简单,适合于工业化大规模的生产。另外,金纳米粒子独特的光学特性以及增强效应,使其被广泛应用于生物及医学检测等领域,具有良好的应用前景。

    一株高产维生素K2(MK-7)的纳豆芽孢杆菌及其应用

    公开(公告)号:CN108410775A

    公开(公告)日:2018-08-17

    申请号:CN201810392873.X

    申请日:2018-04-27

    申请人: 江南大学

    IPC分类号: C12N1/20 C12P7/66 C12R1/125

    摘要: 本发明公开了一株高产维生素K2(MK-7)的纳豆芽孢杆菌及其应用,属于微生物领域。本发明的纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)ND-1-A27于2018年3月14日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址为中国武汉武汉大学,保藏编号为CCTCC NO:M 2018131。大幅度提高了维生素K2(MK-7)的产量,产量约达70mg/L,并且仅需要3天即可达到最大产量,大大缩短了发酵周期,节约时间成本,能够应用于工业化发酵生产且该菌株遗传稳定性良好,连续传代5代其产维生素K2(MK-7)产量基本稳定,维持在同一较高水平,能够作为进一步研究和开发的生产菌株。

    一种利用重组Bacillussubtilis全细胞转化胆固醇生成胆甾-4-烯-3-酮的方法

    公开(公告)号:CN103981207B

    公开(公告)日:2016-11-23

    申请号:CN201410249906.7

    申请日:2014-06-05

    申请人: 江南大学

    摘要: 一种利用重组Bacillus subtilis全细胞转化胆固醇生成胆甾‑4‑烯‑3‑酮的方法,属于基因工程和酶工程领域。本发明首先获得新金色分枝杆菌中胆固醇氧化酶(ChoM)的基因扩增,然后利用pMA5质粒,实现了该基因在模式菌株枯草芽孢杆菌168中的过量表达。本发明构建以胆固醇为底物全细胞转化为方法的高产胆甾‑4‑烯‑3‑酮的枯草芽孢杆菌工程菌株,对该菌株的酶活力及发酵性能进行研究发现胆固醇氧化酶的活力较出发菌株有了明显提高,以0.1%(w/v)胆固醇为底物,全细胞转化24h,底物摩尔转化率达到67%和83%,是出发菌株相对转化率的20和25倍。本发明为微生物一步发酵法生产胆甾‑4‑烯‑3‑酮的工业化提供了有益的指导。