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公开(公告)号：CN104630229A
公开(公告)日：2015-05-20
申请号：CN201510074949.0
申请日：2015-02-11
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了一种具有启动子功能的DNA片段与应用，所述DNA片段为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO:1相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列；(c)对SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列添加一个或多个核糖体结合位点的序列。该DNA具有启动子功能，具有很强的表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现外源基因的高表达，将其运用于耐热β-半乳糖苷酶和转谷氨酰胺酶的表达。特别为解淀粉芽孢杆菌外源基因的表达提供了有效的工具。
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公开(公告)号：CN103911366A
公开(公告)日：2014-07-09
申请号：CN201410103466.4
申请日：2014-03-19
申请人： 华南理工大学
IPC分类号： C12N15/10
摘要： 本发明公开了一种基因组DNA提取方法及试剂盒，该试剂盒包含研磨器、溶液A（裂解液）、溶液B（DNA结合液）、溶液C（DNA洗涤液）、溶液D（DNA洗脱液）和纯化柱。该发明的试剂盒，成本低廉，试剂成分简单，操作流程少，不仅适用于微生物基因组的提取而且还适用于动物组织和植物组织的基因组的提取。同时提取基因组的过程耗时短（30min以内），提取的基因组质量高，基因组条带大小约为23kb，基因组的量可稳定保持在1μg-30μg的范围内；提取的过程不会用到有毒的试剂苯酚、氯仿，能很好的满足SouthernBlot，PCR，RFLP，DNA文库构建等各种分子生物学实验。
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公开(公告)号：CN103497968A
公开(公告)日：2014-01-08
申请号：CN201310432662.1
申请日：2013-09-22
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了一种高效改造丝状真菌的方法及改造的丝状真菌菌株，方法是向丝状真菌细胞中同时导入多基因干扰构建体和目的蛋白表达构建体，再通过筛选得到高效改造丝状真菌；其中多基因干扰构建体包含可以在丝状真菌细胞内起始转录的启动子、由内含子隔开的由2-30个靶基因的编码区序列嵌合连接在一起的反向重复序列、可以在丝状真菌细胞内终止转录的终止子；目的蛋白表达构建体包含可以在丝状真菌细胞内起始转录的启动子、目的蛋白的编码区序列、可以在丝状真菌细胞内终止转录的终止子。本发明提高了丝状真菌的改造效率，降低了目的蛋白的下游分离纯化成本。经过一次转化后改造的丝状真菌细胞能够用于生产食品安全级酶制剂。
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公开(公告)号：CN103275981A
公开(公告)日：2013-09-04
申请号：CN201310201254.5
申请日：2013-05-27
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开一种丝状真菌蛋白分泌压力反馈调控元件与抗反馈抑制的启动子、质粒及制备方法和转化细胞，该调控元件为丝状真菌启动子-378bp～-291bp区域的碱基序列。该调控元件与蛋白分泌压力反馈相关。抗反馈抑制的启动子为丝状真菌启动子上至少缺失或者替换掉-378bp～-291bp区域的碱基所得的碱基序列、并且具有启动子活性。本发明的启动子可以在丝状真菌，特别是在米曲霉中蛋白能够高效表达。
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公开(公告)号：CN101691560B
公开(公告)日：2011-08-31
申请号：CN200810220160.1
申请日：2008-12-19
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了大肠杆菌及其可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原的方法，该方法包括如下几个步骤：(1)根据茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因的核苷酸序列，设计PCR引物进行PCR扩增，克隆到原核表达载体pET22b(+)中，构建表达载体pET22b-proMTG，转化为大肠杆菌E.coli BL21/proMTG，该菌株保藏号为CCTCC M 208240；(2)可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原；(3)转谷氨酰胺酶酶原的激活；(4)高密度发酵；(5)蛋白纯化工艺。本发明方法的转谷氨酰胺酶产量及比活力达到直接在大肠杆菌中表达形成包涵体并经变性及复性生产该酶的水平，而且发酵生产工艺更简单。
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公开(公告)号：CN115820746B
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202211388724.9
申请日：2022-11-08
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了激酶基因在调控丝状真菌菌丝形态中的应用。本发明首次在丝状真菌中构建RNP基因编辑体系，构建的RNP体系可以编辑黑曲霉的基因，该方法免去构建重组载体的繁琐程序，操作简单，可以用于黑曲霉的基因编辑。结合RNP体系进行基因编辑发现，敲除MpkA基因时，黑曲霉菌落较小，生长缓慢，菌丝呈现短杆状，基本无分支。同时，黑曲霉MpkA基因被敲除时，可以促进其蛋白的分泌量。本发明在丝状真菌的遗传操作以及高通量技术的应用提供了良好的材料以及理论依据，为丝状真菌在工业酶制剂领域的发展提供了研究思路。
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公开(公告)号：CN115976082A
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202210816750.0
申请日：2022-07-12
申请人： 华南理工大学
IPC分类号： C12N15/66 , C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/70 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/10 , C12N15/54 , C12R1/125
摘要： 本发明提供了一种无抗性标记基因枯草表达重组质粒及其构建方法与应用。本发明利用枯草芽孢杆菌SCK6超级感受态直接构建不含大肠杆菌复制起始位点Ori及氨苄抗性基因的Bsggt重组表达质粒，能够获得更小的游离质粒表达系统，为异源蛋白在生产应用过程中提供了更小质粒的稳定表达工具。本发明使用Cas9n‑AID碱基编辑技术进行无抗性标记表达质粒的构建对于菌株的筛选过程简单，所构建的无抗性标记表达质粒相对于传统的穿梭质粒更小，且表达过程中不需要添加诱导剂进行蛋白的诱导表达，由于表达质粒无抗性标记，在培养过程中由于没有抗生素的压力生长速度能明显提高，高表达的同时无抗生素的引入更适用于食品安全级别的生产应用。
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公开(公告)号：CN112730388B
公开(公告)日：2022-05-24
申请号：CN202011533189.2
申请日：2020-12-22
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开一种基于明亮发光杆菌快速检测玉米赤霉烯酮生物毒性的方法，涉及玉米赤霉烯酮生物毒性检测领域。该方法使用明亮发光杆菌冻干粉作为检验玉米赤霉烯酮生物毒性的受试生物。本方法中，在室温下，不同浓度玉米赤霉烯酮与明亮发光杆菌接触后，随着玉米赤霉烯酮浓度升高，明亮发光杆菌相对发光强度减弱。表明玉米赤霉烯酮浓度越高，对明亮发光杆菌发光抑制性越强，即玉米赤霉烯酮浓度越高对明亮发光杆菌的生物毒性作用越强。本发明的检测结果完全能够满足对玉米赤霉烯酮残留检测，该方法前处理简单、反应快、检测灵敏、操作简便、成本低，可对玉米赤霉烯酮生物毒性实现快速检测。因此，本发明提供的方法适于规模化工业生产及应用。
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公开(公告)号：CN114410608A
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202210054940.3
申请日：2022-01-18
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开一种高效表达及纯化Cas9蛋白的方法和应用。本发明主要包括Cas9表达载体的构建，大肠杆菌的转化，Cas9蛋白的诱导表达，Cas9蛋白的纯化，以及体内体外的应用。使用GB1作为促溶标签，可增加SpCas9的稳定性及溶解性，初步提高SpCas9的表达量，且GB1不影响SpCas9的功能，后续不需去除，简便可行。再通过使用10×His标记，有助于融合蛋白与Ni‑NTA树脂的高亲和力，并有助于高盐洗去除污染的核酸，提高纯化效果。使用串联T7启动子，明显提高SpCas9的表达量。通过体内外应用，证明了所纯化得到的SpCas9‑GB1蛋白正确折叠，具有切割DNA的能力，且可入核进行基因编辑。
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公开(公告)号：CN113186141A
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202110376139.6
申请日：2021-04-08
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开一种一锅法高效合成莱鲍迪苷M的方法，属于生物工程技术领域。本发明在不添加UDPG的条件下，利用廉价底物ST在体外先经UGT76G1催化为RA，再经EUGT11催化产生RD，最终被UGT76G1转化为RM，旨在用较简单的生产方法，更廉价的底物，得到高品质的甜味剂RM。当三重启动子启动转录时，限速酶EUGT11酶活是单启动子控制转录时的2.13倍，且在酶活力配比为SUS1：UGT76G1：EUGT11/3copies of T7＝1：2：6.39的条件下，该体系将10mM ST转化为3.79±0.31mM莱鲍迪苷M，较之前提升了2.35倍，为低成本高效酶法合成RM提供技术支持。
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