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公开(公告)号：CN116286934A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202211664220.5
申请日：2022-12-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种恶臭假单胞菌中冷休克蛋白调控有机化合物耐受性的研究方法，以P.putidaKT2440为原始菌，构建得到敲除菌ΔCapB和过表达菌株CapB，构建敲除菌ΔCspA1和过表达菌株CspA1，构建敲除菌ΔCspA2和过表达菌株CspA2，证明了冷休克蛋白作为一种调控蛋白作用于细胞，通过调控细胞释放OMV进而影响细胞对有机化合物的耐受性，这一发现对优化底盘细胞调控网络从而提高生物合成有机化合物的效益意义重大。
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公开(公告)号：CN109913490B
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN201910187914.6
申请日：2019-03-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种在谷氨酸棒杆菌表达菌株Corynebacterium glutamicum CGMCC1.15647的增强型表达载体，用于外源蛋白表达。其特征在于：将内源双顺反子元件引入到穿梭载体pXMJ19的多克隆位点之前，得到含有增强型Ptac启动子的谷氨酸棒杆菌表达载体pGX19，该载体能够显著提高外源蛋白GFP、SUMO‑NT‑proBNP、VHH的表达能力。
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公开(公告)号：CN114574618B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN202210219429.4
申请日：2022-03-08
Applicant: 江南大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6851 , C12Q1/6806 , C12N15/11 , C12R1/84
Abstract: 本发明公开了一种巴斯德毕赤酵母不同生长阶段的内参基因及其引物和应用，所述内参基因为TIF1基因和/或RPL19A基因。本发明获得了适用于巴斯德毕赤酵母不同生长阶段的实时荧光定量内参基因，并设计了候选内参基因的实时荧光定量引物，该引物特异性强，扩增效率高，填补了巴斯德毕赤酵母不同生长阶段没有针对性的内参基因的现状。
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公开(公告)号：CN114574490B
公开(公告)日：2022-11-11
申请号：CN202210238177.X
申请日：2022-03-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种巴斯德毕赤酵母组成型启动子及其改造方法和应用，所述组成型启动子为P0887‑GAP、P0887‑AOX1和P0887‑GS中的一种；所述启动子P0887‑GAP的核苷酸序列如SEQ ID NO.31所示；所述启动子P0887‑AOX1的核苷酸序列如SEQ ID NO.32所示；所述启动子P0887‑GS的核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示。本发明通过替换启动子P0887的5’非翻译区序列，改造后启动子的转录活性基本不变，荧光强度提高至原始启动子的37倍。
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公开(公告)号：CN110511954B
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN201910107636.9
申请日：2019-02-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种适用于谷氨酸棒杆菌分泌表达木聚糖酶的重组载体，其能实现于谷氨酸棒杆菌高分泌表达木聚糖酶。一种适用于谷氨酸棒杆菌分泌表达木聚糖酶的重组载体，其特征在于：重组载体包括可操作性连接的序列原件：AH6启动子、5’UTR及其前38bp序列、SD序列、cspB信号肽和木聚糖酶基因，AH6启动子、5’UTR及其前38bp序列和SD序列连接构成的片段其序列如SEQ ID NO.1所示，cspB信号肽的序列如SEQ ID NO.2所示。AH6启动子、5’UTR及其前38bp序列、SD序列、cspB信号肽和木聚糖酶基因构成双顺反子结构，能够实现木聚糖酶于谷氨酸棒杆菌的高分泌表达，酶活达到486.2 U/ml。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110511953B
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN201811015441.3
申请日：2018-08-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种适用于谷氨酸棒杆菌的重组表达载体，该表达载体适用于在谷氨酸棒杆菌中表达外源蛋白并具有较高的表达水平。一种适用于谷氨酸棒杆菌的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体中外源蛋白基因的启动子为∆cspB启动子、信号肽为∆cspB信号肽，所述∆cspB启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，∆cspB信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。本发明中的外源蛋白在表达过程中，在信号肽的引导下，表达的外源蛋白能分泌到胞外，不需要经过菌体破碎，分泌出的外源蛋白相对于胞内表达易于纯化；且无胞外蛋白酶，分泌出的外源蛋白在培养基中较为稳定。此外，本发明还提供了外源蛋白的外源蛋白表达系统、应用和外源蛋白的制备方法。
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公开(公告)号：CN113549619B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202110785194.0
申请日：2021-07-12
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/77 , C12N1/21 , C07K14/435 , C12R1/15
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子、其质粒载体及其应用，谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子，其基因序列如SEQ ID NO.5所示。本发明使用启动子PA368构建蛋白表达载体，并通过在培养基中添加乙醇，实现重组蛋白在谷氨酸棒杆菌二次生长阶段的高水平表达，克服了现有启动子强度低、诱导物渗透性且昂贵等不足，相比于现有的谷氨酸棒杆菌强启动子PH36，本发明启动子PA368调控下的绿色荧光蛋白表达水平提高了2.43倍，同时在分泌重组蛋白VHH及XynA时可以实现更高的表达水平。
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公开(公告)号：CN113652442A
公开(公告)日：2021-11-16
申请号：CN202110998111.6
申请日：2021-08-27
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/77
Abstract: 本发明基于pEC‑XK99E中的pGA1棒杆菌复制子这一在谷氨酸棒杆菌中拷贝数约为30的低拷贝质粒复制子，将复制蛋白Rep的325位异亮氨酸突变为苏氨酸、398位编码丝氨酸的氨基酸变为同义密码子，成功获得了一种可以提高棒杆菌质粒拷贝数的复制子pGA1‑Rep‑I325T/S398。将该复制子用于高拷贝质粒的构建，携带有pGA1‑Rep‑I325T/S398复制子的质粒pEC‑XK99E‑Rep‑T/S在谷氨酸棒杆菌中复制后，通过质粒体外抽提证实增加了菌体中质粒的数量。构建pEC‑XK99E‑EGFP‑Rep‑T/S质粒，通过测定不同菌体量下的荧光值，与为突变质粒相比荧光量增加三倍即改造后的质粒提高了蛋白的表达量。同时通过荧光定量PCR手段，测定突变后拷贝数为野生型复制子的质粒的8倍约为245。
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公开(公告)号：CN110511954A
公开(公告)日：2019-11-29
申请号：CN201910107636.9
申请日：2019-02-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种适用于谷氨酸棒杆菌分泌表达木聚糖酶的重组载体，其能实现于谷氨酸棒杆菌高分泌表达木聚糖酶。一种适用于谷氨酸棒杆菌分泌表达木聚糖酶的重组载体，其特征在于：重组载体包括可操作性连接的序列原件：AH6启动子、5’UTR及其前38bp序列、SD序列、cspB信号肽和木聚糖酶基因，AH6启动子、5’UTR及其前38bp序列和SD序列连接构成的片段其序列如SEQ ID NO.1所示，cspB信号肽的序列如SEQ ID NO.2所示。AH6启动子、5’UTR及其前38bp序列、SD序列、cspB信号肽和木聚糖酶基因构成双顺反子结构，能够实现木聚糖酶于谷氨酸棒杆菌的高分泌表达，酶活达到486.2 U/ml。
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