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公开(公告)号：CN104531630B
公开(公告)日：2017-07-14
申请号：CN201410752769.9
申请日：2014-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提出了一种高对映体选择性的AuEH2G218S和AuEH2S247Y突变酶的设计与构建，通过序列同源性分析、同源建模、分子对接和动力学模拟等最终确定突变位点，利用大引物PCR技术获得突变基因命名为Aueh2G218S和Aueh2S247Y。本发明还公开了突变酶工程菌的构建以及高效表达的方法，制备的突变酶具有高对映体选择性及催化活性的特性，具有较大的工业化生产潜力。
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公开(公告)号：CN104531729A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410758084.5
申请日：2014-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明的目的是提供一种阿魏酸酯酶A热稳定性改造、突变阿魏酸酯酶A工程菌构建以及突变阿魏酸酯酶A高效异源表达的方法。根据来源于A.usamii E001阿魏酸酯酶A(AuFaeA)的空间结构设计突变A126C和N152C，得到突变阿魏酸酯酶A：AuFaeAA126C-N152C，其成熟肽基因序列为SEQ ID NO:1，C126和C152可以形成一个二硫键。实验结果表明突变后该酶热稳定性有了明显的提高，为其它酶的改造提供新的技术路径，作为一种耐热型的酶制剂，该阿魏酸酯酶具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN104531728A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410755394.1
申请日：2014-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的一种环氧化物水解酶cDNA基因序列的克隆方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1，命名为Aueh1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2，该酶命名为AuEH1。本发明还公开了AuEH1工程菌的构建以及重组AuEH1的异源表达和活性测定的方法。以20mM消旋体环氧苯乙烷为底物，重组AuEH1工程菌全细胞催化，获得(S)-SO的对映体过量率ee>94％。AuEH1具有较高的催化活性和手性选择性，有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值。
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公开(公告)号：CN104531630A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410752769.9
申请日：2014-12-10
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/14 , C12Y303/02003
摘要： 本发明提出了一种高对映体选择性的AuEH2G218S和AuEH2S247Y突变酶的设计与构建，通过序列同源性分析、同源建模、分子对接和动力学模拟等最终确定突变位点，利用大引物PCR技术获得突变基因命名为Aueh2G218S和Aueh2S247Y。本发明还公开了突变酶工程菌的构建以及高效表达的方法，制备的突变酶具有高高对映体选择性及催化活性的特性，具有较大的工业化生产潜力。
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公开(公告)号：CN104404066A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410758070.3
申请日：2014-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明的目的是提供一种天然二硫键与阿魏酸酯酶A功能相关性的验证方法，以及突变阿魏酸酯酶A工程菌构建、突变酶异源表达的方法。根据来源于A.usamii E001阿魏酸酯酶A(AuFaeA)的模拟空间结构设计单突变C29T、C91T和C234T，得到突变阿魏酸酯酶A：AuFaeAC29T、AuFaeAC91T和AuFaeAC234T，其成熟肽基因序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5。突变后该酶的酶活性和最适温度都有大幅下降，证明了二硫键是影响阿魏酸酯酶A功能发挥的关键因素，为其它与AuFaeA一级结构相似的A类阿魏酸酯酶的耐热性改造奠定了基础。
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公开(公告)号：CN104404015A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410758722.3
申请日：2014-12-10
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/2494 , C07K2319/00 , C12Y302/01078
摘要： 本发明提出了一种新型地利用计算机技术与生物信息学方法对宇佐美曲霉Aus Man5A分子进行理性设计，并结合基因工程技术构建一种底物亲和力强、催化效率高的AusMan5A-CBM27融合酶的方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1，氨基酸序列为SEQ ID NO:2，相应的基因命名为man5A-cbm27。本发明还公开了融合酶工程菌的构建以及高效表达和纯化的方法，制备的融合酶具有底物亲和力强、催化效率高的特性，具有较大的工业化应用潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN104388451A
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201410758941.1
申请日：2014-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明为耐热木聚糖酶(Xyl11M)基因的合成及其在毕赤酵母中的表达，涉及一种来源于嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的耐热β-1,4-内切木聚糖酶(Xyl11M)在毕赤酵母中表达、活性测定及酶学性质分析方法。其基因命名为xyl11M，它的核苷酸序列为SEQ ID NO:1，编码的蛋白质为Xyl11M，氨基酸序列为SEQ ID NO:2。所制备的重组酶的活性为157U/mL；其最适反应温度为70℃，70℃下保温60min，残余酶活为98％，表明该酶热稳定性非常好；其最适pH为6.0，在pH 5.0～8.0范围内较稳定；金属离子对该酶活性影响较小。作为一种耐热型的酶制剂，该酶具有较大的工业化应用潜力及经济价值。
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公开(公告)号：CN103642850A
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201310666357.9
申请日：2013-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明的目的是提供一种对共表达阿魏酸酯酶/木聚糖酶的酶解产物阿魏酸进行体外抗氧化活性的测定方法。利用共表达阿魏酸酯酶A和木聚糖酶的酵母系统(GS115/faeA-xyn11A)所产的共表达酶液水解小麦麸皮获得阿魏酸，从还原力、DPPH自由基和羟基自由基清除率三个方面对该阿魏酸进行体外抗氧化活性的测定。实验结果证明阿魏酸有良好的还原能力和自由基清除能力，该测定方法简单有效、方便快捷，在工业应用中阿魏酸的抗氧化测定方面有一定的潜在价值。
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公开(公告)号：CN103642777A
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201310666413.9
申请日：2013-12-10
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/2482 , C12N15/815 , C12Y302/01008
摘要： 本发明提出了一种新型的利用计算机技术与生物信息学方法对常温的木聚糖酶进行定向改造的方法，运用基因工程技术构建出了具有高效表达能力的突变木聚糖酶工程菌。将来源于米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC40186菌株的常温木聚糖酶进行热稳定性的定向改造，获得了一种木聚糖酶突变体，其热稳定性有了一定的提高，而其催化活性较原酶无明显改变。作为一种耐热型的酶制剂，该木聚糖酶具有较大的工业化生产潜力和应用价值。
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公开(公告)号：CN103627776A
公开(公告)日：2014-03-12
申请号：CN201310666269.9
申请日：2013-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明属于生物技术领域，涉及一种制备S-2-(4-硝基苯基)环氧乙烷的方法。该方法以消旋体对硝基溴代苯乙酮为原料，经过化学合成法，双酶偶联反应，最终经超滤和过硅胶柱得到高纯度的S-2-(4-硝基苯基)环氧乙烷。这种制备S-2-(4-硝基苯基)环氧乙烷的方法，所用酶酶活高，时间短，成本底，S-2-(4-硝基苯基)环氧乙烷纯度高，反应条件温和，具有很好的工业化前景。
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