公开(公告)号：CN102830189A

公开(公告)日：2012-12-19

申请号：CN201210347439.2

申请日：2012-09-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  石增秀 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  荣瑶

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/34

Abstract: 本发明公开了一种L-天冬氨酸α-脱羧酶活性的HPLC测定方法，生物工程技术领域。该方法简单有效，建立的苯基异硫氰酸酯(PITC)衍生氨基酸的高效液相色谱分析的方法，在紫外254nm处检测，分析速度快，灵敏度高。

公开(公告)号：CN119391679A

公开(公告)日：2025-02-07

申请号：CN202411616294.0

申请日：2024-11-13

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  韩来闯 ,  程中一 ,  宋佳恩 ,  崔文璟 ,  刘中美 ,  郭军玲

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种活性和热稳定性提高的腈水合酶及其应用，属于生物工程技术领域。本发明针对腈水合酶二聚体界面、四聚体界面以及亚基内的氨基酸共进化对进行计算设计，构建突变，并进行筛选，最终获得活性和热稳定性提升的腈水合酶突变体。本发明构建的突变体的热稳定性显著提升，65℃下半衰期从野生型的21min提高至210min。

公开(公告)号：CN117660421A

公开(公告)日：2024-03-08

申请号：CN202311564155.3

申请日：2023-11-21

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  韩来闯 ,  罗杰 ,  崔文璟 ,  程中一 ,  刘中美 ,  周丽 ,  郭军玲

IPC: C12N9/54 ,  C12N15/57 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  A61K38/48 ,  A61P7/02 ,  A61P9/00 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了共进化位点改造提高热稳定性和活性的纳豆激酶突变体，属于蛋白质工程技术领域。本发明筛选得到4个活性或稳定性提升的双点突变体，且这四个突变位于2个共进化残基对上。对双点突变进行组合，获得稳定性和活性进一步提升的三个四点组合突变。其中，M5的比酶活为17.9U/mg；其热稳定性大幅提高，55℃下半衰期是野生型的3.5倍，达到718分钟。将M5与之前获得的高性能突变体M4进一步组合，获得突变体M6，其活性和热稳定性得到进一步提升，以为底物时，比酶活达到33.8U/mg，Tm达到73.4±0.5℃，55℃下半衰期达到6348min。

公开(公告)号：CN117448303A

公开(公告)日：2024-01-26

申请号：CN202311326116.X

申请日：2023-10-13

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  周丽 ,  谢婷 ,  韩来闯 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  程中一 ,  郭军玲

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/04 ,  C12P19/14 ,  C12P19/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种嗜热II型普鲁兰酶的分子改造及其在淀粉制糖中的应用，属于基因工程技术及制糖工业领域。本发明对超嗜热古菌(Pyrococcusyayanosii)CH1来源的II型普鲁兰酶进行突变得到突变体W30L/H400I/S552A。该突变体的比活和催化效率与野生型相比，分别提高了3.2倍和5倍。利用该酶突变体生产低聚麦芽糖的反应显示，酶突变体低聚麦芽糖的转化率达到96.1％，比野生型提高了5.4％。此外，将酶突变体用于葡萄糖生产时，该酶突变体的葡萄糖产量分别比野生型和传统方法提高25.4％和43.5％。表明了该酶的突变体在淀粉糖工业中应用中存在巨大潜力。

公开(公告)号：CN117305376A

公开(公告)日：2023-12-29

申请号：CN202311178845.5

申请日：2023-09-13

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  周丽 ,  李云燕 ,  张慧 ,  张新蕊 ,  杨诗怡 ,  蒋紫怡 ,  王梦轩 ,  黎君 ,  王沁 ,  韩来闯

IPC: C12P7/02 ,  C12N15/70 ,  C12N15/60 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了调控大肠杆菌糖代谢合成倍半萜的方法，属于生物工程领域。本发明提供了丙酮酸感应糖代谢调控系统，并将该调控系统用于调控大肠杆菌合成半倍萜化合物，有效缓解了葡萄糖过速代谢，广藿香醇产量提高10.2％，在5L发酵罐中产量可达1464.5mg·L‑1；利用该倍半萜合成底盘细胞合成τ‑杜松醇，5L发酵罐中产量可达15.2g·L‑1。本发明还提供了解除葡萄糖抑制的方法，通过敲除cAMP合成途径编码基因，使广藿香醇产量提高27.7％。本发明提供的方法有助于降低成本，促进倍半萜的大规模发酵生产，具有很好的应用前景。

公开(公告)号：CN114277045B

公开(公告)日：2023-09-08

申请号：CN202111466694.4

申请日：2021-12-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  程中一 ,  来乾朋 ,  韩来闯 ,  崔文璟 ,  刘中美 ,  周丽 ,  郭军玲

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  G01N21/64 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种酰胺化合物生物传感器的构建及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一段AmiC‑AmiR突变体的氨基酸基序在检测酰胺类化合物中的应用。本发明通过对RBS进行优化、并将AmiC第83位取代为组氨酸，从而实现了此传感器对于酰胺类物质的响应，并且能检测到摩尔级别的含量，响应范围在0～10mM之间。从而具备良好的应用前景。

公开(公告)号：CN113583925B

公开(公告)日：2023-09-08

申请号：CN202110441638.9

申请日：2021-04-23

Applicant: 江南大学

Inventor： 周丽 ,  周哲敏 ,  王沁 ,  王禹锡 ,  韩来闯 ,  崔文璟 ,  刘中美

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/60 ,  C12N9/88 ,  C12P7/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种代谢工程大肠杆菌发酵制备广藿香醇的方法，属于生物工程领域。本发明改造广藿香醇合酶及宿主菌株，获得能够高效发酵生产广藿香醇的重组菌及其发酵方法。该重组菌株能够以廉价的葡萄糖为底物，发酵生成高附加值的广藿香醇，摇瓶发酵96h广藿香醇产量达到338.6mg/L，得率为48.6mg/g干2细胞重量，体积生产强度为84.6mg/L/d。在5L发酵罐中，广藿香醇产量可达到970.1mg/L，体积生产强度为199mg/L/d。

公开(公告)号：CN114317502B

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202111478383.X

申请日：2021-12-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  罗杰 ,  韩来闯 ,  崔文璟 ,  程中一 ,  刘中美 ,  周丽 ,  郭军玲

IPC: C12N9/56 ,  C12N15/57 ,  C12N1/21 ,  A23L29/00 ,  A23L33/10 ,  A61K38/48 ,  A61P9/00 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种高活性和高热稳定性的纳豆激酶突变体，属于蛋白质工程领域。本发明筛选得到三种纳豆激酶突变体，分别是突变体M2(S62AN181DY217KN218SN259P)，突变体M3(P57CA92C)以及突变体M4(S62AP57CA92CN181DY217KN218SN259P)。其中突变体M4在55℃与65℃下半衰期分别较野生型提升了20.7倍与12.9倍，这是目前已有的报道中关于纳豆激酶热稳定性最优的突变体，同时比酶活也较野生型提升了2.1倍。本发明实现了在提升纳豆激酶热稳定性的同时保持其催化活性，以突破“稳定性活性的权衡”，为纳豆激酶工业化应用奠定了基础。

公开(公告)号：CN114107270B

公开(公告)日：2023-07-18

申请号：CN202111485153.6

申请日：2021-12-07

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  刘中美 ,  郝明珠 ,  朱小青 ,  崔睿智 ,  周丽 ,  崔文璟 ,  郭军玲

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/06 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体E88R的比酶活相对野生型提高了2.1倍，比酶活达481±3.7U/mg。突变体E88R在50℃处理30分钟仍有59％残留酶活性，在pH 7.0和pH 8.0条件下，残余酶活分别为88％和82％。相比野生型酶，该突变体酶E88R的热稳定性与pH稳定性都有很大的提高，有利于以后的工业生产。在pH 7.5条件下，突变体E88R比酶活达到199±2.1U/mg，比野生型高1.9倍。以2.5M马来酸作为底物，全细胞催化制备L‑丙氨酸，生产速率达35.66g/(L·h)，比野生型提高1.68倍。

公开(公告)号：CN114317510B

公开(公告)日：2023-07-04

申请号：CN202210006581.4

申请日：2022-01-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  刘中美 ,  王畅 ,  王相玉 ,  周丽 ,  崔文璟 ,  郭军玲

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12P13/20 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种马来酸顺反异构酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的马来酸顺反异构酶的突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，该突变酶的温度稳定性相比野生酶有了较大的提高，同时该突变体具有更好的pH稳定性。将构建得到的马来酸顺反异构酶突变体与天冬氨酸酶AspA在大肠杆菌中偶联表达，并以马来酸为底物生产L‑天冬氨酸，转化率可达94％以上，具有广阔的工业生产应用前景。