公开(公告)号：CN117143786A

公开(公告)日：2023-12-01

申请号：CN202210575715.4

申请日：2022-05-24

Applicant: 江南大学 ,  山东华泰纸业股份有限公司

Inventor： 吴敬 ,  张凤山 ,  刘展志 ,  刘燕韶 ,  周景蓬 ,  晏婷婷

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/18 ,  C07K19/00 ,  C12N15/55 ,  C12N15/53 ,  D21C5/02 ,  D21C5/00 ,  D21C9/08 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高角质酶‑锚定肽融合蛋白在大肠杆菌中表达水平的方法，属于发酵工程领域。本发明以大肠杆菌E.coli C43(DE3)为出发菌株，可获得正确折叠的融合蛋白HiC‑OMP25，并且此HiC‑OMP25在50℃下具有较好的稳定性，能够很好地适应PEA降解的环境、并发挥良好的降解作用。进一步的，在重组细胞中表达二硫键异构酶可将HiC‑OMP25的胞内表达量较对照提升2.18倍；在此基础上，在重组细胞中表达巯基氧化酶，可显著提升融合蛋白HiC‑OMP25胞外表达量，胞外酶活达到了135.43U·mL‑1，较对照提高了2.14倍。因而本申请的方法及构建的重组大肠杆菌在聚合物降解领域有很大的应用前景。

公开(公告)号：CN117903493A

公开(公告)日：2024-04-19

申请号：CN202311854938.5

申请日：2023-12-28

Applicant: 江南大学 ,  山东华泰纸业股份有限公司 ,  山东黄三角生物技术产业研究院有限公司

Inventor： 吴敬 ,  王蕾 ,  时梦 ,  孔德民 ,  张凤山 ,  刘燕韶 ,  周景蓬 ,  刘展志 ,  陈晟 ,  张慧

IPC: C08J11/10 ,  C08J11/16 ,  C08J11/24 ,  C08L27/06

Abstract: 本发明公开了一种橡胶氧化酶联合处理聚氯乙烯的方法，属于环境科学、材料学及酶工程领域。本发明通过脱氯处理聚氯乙烯，结合橡胶氧化酶酶解脱氯PVC，可使处理后的聚氯乙烯数均分子量由最初的28567Da降低至14289Da，重均分子量由最初的82340Da降低至75570Da，为聚氯乙烯的生物降解提供了新的思路。

公开(公告)号：CN117402866A

公开(公告)日：2024-01-16

申请号：CN202311620368.3

申请日：2023-11-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 夏伟 ,  吴敬 ,  李娟 ,  黄燕 ,  陈晟 ,  刘展志

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/24 ,  C12P19/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种L‑阿拉伯糖异构酶突变体在制备D‑塔格糖中的应用，属于酶工程技术领域。本发明通过定点突变和叠加组合构建获得对乳糖转化率显著提高的L‑阿拉伯糖异构酶系列单点突变体，然后将它们进行叠加组合突变，获得了催化效率提高的组合突变Y19E/F279I。对其D‑塔格糖的制备条件进行了优化，在55℃，pH 6.0，500g·L‑1乳糖浓度，加酶量1.0mg·mL‑1，并含Mn2+与Co2+的条件下，转化率可达23.01％，较野生型的14.56％大幅提高，具有较好的工业化应用潜力。

公开(公告)号：CN116926041A

公开(公告)日：2023-10-24

申请号：CN202310946829.X

申请日：2023-07-31

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘展志 ,  吴敬 ,  刘一迪

IPC: C12N9/18 ,  C12N1/21 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  B09B3/60 ,  C12R1/19 ,  B09B101/75

Abstract: 本发明公开了PET聚酯塑料解聚酶突变体及其应用，属于分子生物学与酶工程领域。本发明结对Ideonella sakaiensis来源的PET解聚酶进行了突变和高通量筛选，获得了催化能力提高的PET解聚酶突变体，使突变体对底物的水解效率较突变前具有显著提升，以对硝基苯酚丁酸酯底物的水解活力可达野生型的1.72倍，产物释放速率较野生型提升2.4倍；以高结晶度商业化PET塑料为底物的产物释放速率达野生型的1.8倍。本发明构建的PET解聚酶突变体在PET塑料的处理能力上展现出了显著的优势，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN116814600A

公开(公告)日：2023-09-29

申请号：CN202210285676.4

申请日：2022-03-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘展志 ,  吴敬 ,  刘姝含

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12P19/24 ,  C12P19/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了热稳定性提高的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体及其应用，属于酶定向进化以及蛋白质工程技术领域。本发明提供了一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶(D‑allulose3‑epimerase，简称DAEase)热稳定性提高突变体的筛选及其应用。将来源于Clostridiumcellulolyticum H10的DAEase通过定向进化获得一系列热稳定性提高的突变体，经热处理后，其残余酶活从野生型的16.06％提升至20.62％～66.24％，突变体热稳定性得到显著提高，在工业生产中具有较高的应用价值。

公开(公告)号：CN115029363A

公开(公告)日：2022-09-09

申请号：CN202110254263.5

申请日：2021-03-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  刘展志 ,  张昕昱 ,  许滢

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/64 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种体内连续定向进化系统及其应用，属于基因工程和酶工程领域。该系统包括携带随机突变模块MP、程序化死亡模块TAS以及目的基因表达模块TP的大肠杆菌宿主菌。模块间通过相互偶联，最终实现对宿主菌中目的基因的高效进化以及筛选。该系统具有较好的实用价值，可应用于多种不同功能型蛋白质的定向进化。

公开(公告)号：CN115011622A

公开(公告)日：2022-09-06

申请号：CN202110254391.X

申请日：2021-03-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘展志 ,  吴敬 ,  王逸凡 ,  刘姝含

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/65 ,  C12N15/61 ,  C12N15/10 ,  C12N1/21 ,  C12N9/90 ,  C12P19/24 ,  C12P19/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体的筛选方法及其应用，属于酶工程技术领域。本发明筛选方法的筛选通量可以达到108/天，有效提高了DPEase突变体的筛选效率。通过定向进化Clostridium cellulolyticum来源的DPEase获得比活提高的突变体，当第206位甘氨酸或第207位组氨酸发生突变时，其比活是野生型的1.03‑1.83倍，具有极高的工业应用潜力。

公开(公告)号：CN113373135B

公开(公告)日：2022-08-23

申请号：CN202010114415.7

申请日：2020-02-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  刘展志 ,  龙乃云 ,  刘姝含

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12P19/24 ,  C12P19/02

Abstract: 本发明提及了一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的突变体及其应用。将来源于Clostridium cellulolyticum的野生型DPEase通过定向进化获得一系列发酵酶活提高的突变体，本发明得到DPEase突变体H56Q的发酵酶活是野生型的1.61倍；并且突变体H56Q在55℃的半衰期较野生型的半衰期延长了87.5％，热稳定性得到提高，具有良好的工业应用潜力。

公开(公告)号：CN112501025A

公开(公告)日：2021-03-16

申请号：CN202011482484.X

申请日：2020-12-15

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  王蕾 ,  饶德明 ,  刘展志 ,  陶秀梅 ,  霍润甜 ,  罗慧

IPC: C12N1/06

Abstract: 本发明公开了一种提高高通量筛选中表达宿主细胞破碎效率的方法，属于蛋白工程和发酵工程技术领域。本发明在微生物细胞破碎体系中加入十六烷基三甲基溴化铵，从而使得细胞破碎效率得到提高且破碎均匀，使得胞内酶被充分地被释放出来，对于表达量较低的酶也能有效释放至细胞外，有利于菌株的筛选、降低假阳性率。操作简便，利于高通量筛选。

公开(公告)号：CN112143722A

公开(公告)日：2020-12-29

申请号：CN202011047985.5

申请日：2020-09-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  王蕾 ,  饶德明 ,  陈晟 ,  刘展志 ,  霍润甜 ,  杨卫康 ,  盛露菲

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N15/74 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种提高4,6‑α‑葡萄糖基转移酶可溶性表达量的方法，属于蛋白质工程和发酵工程技术领域，具体涉及分别以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌为宿主表达来源于发酵乳杆菌的4,6‑α‑葡萄糖基转移酶(GtfB)过程中，在发酵培养基中添加甜菜碱、麦芽糖、β‑环糊精、海藻糖、山梨醇小分子物质，提高4,6‑α‑葡萄糖基转移酶(GtfB)可溶性表达量的方法，使得发酵总酶活本发明为高效表达4,6‑α‑葡萄糖基转移酶(GtfB)提供了一个有效的策略，操作工艺简单，且成本较低，效果显著，为工业化生产奠定了基础。