公开(公告)号：CN108640990A

公开(公告)日：2018-10-12

申请号：CN201810549725.4

申请日：2018-05-31

申请人： 河南省农业科学院 ,  扬州大学 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  王爱萍 ,  朱礼倩 ,  黄丽嫒 ,  李青梅 ,  郭军庆 ,  乔松林 ,  周景明 ,  邢广旭 ,  刘燕凯 ,  陈玉梅 ,  王彦伟 ,  邓瑞广

IPC分类号： C07K16/10 ,  G01N33/577

摘要： 本发明公开了一种NcpBVDV单克隆抗体及其制备方法和应用，该单克隆抗体的重链型为：lgG1，轻链型为：Kappa型；IPMA效价不低于1.02×106。本发明提供一种NcpBVDV单克隆抗体的制备方法，并将所述的NcpBVDV单克隆抗体在抗病毒药物高通量筛选中应用。本发明还提供一种抗NcpBVDV药物筛选的方法。本发明具有较强的特异性，成本低，操作简便快速，显示检测结果直观准确，不依赖于大型仪器，易于在科研和临床诊断中广泛应用推广。

公开(公告)号：CN108802381A

公开(公告)日：2018-11-13

申请号：CN201810604281.X

申请日：2018-06-13

申请人： 河南中泽生物工程有限公司 ,  扬州大学

发明人： 刘东民 ,  朱礼倩 ,  傅小恬 ,  陈鑫烨 ,  杨继飞 ,  王丽 ,  李青梅 ,  郭军庆 ,  邢广旭 ,  周景明 ,  刘运超

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/558

摘要： 本发明公开了一种牛病毒性腹泻病毒鉴别检测试纸条及其制备方法，以快速灵敏检测BVDV抗体。该试纸条由支撑底板、包被吸附材料层、蛋白标记承载材料层、样品缓冲材料层、液体吸收材料层、外层保护材料组成；所述包被吸附材料设有测试线和质控线；所述试纸条的蛋白标记采用胶体金标记；所述蛋白标记所用的蛋白为从噬菌体多肽文库中筛选所得的与BVDV抗体结合的噬菌体单克隆；所述噬菌体单克隆表达的多肽表位为LTPHKHHKHLHA。其制备方法包括金标噬菌体单克隆的制备、金标垫的制备、硝酸纤维素膜的制备、组装各部件，即得。本发明可以在十分钟之内获得检测结果，快速敏感，成本低，操作简单易于基层在生产和科研中推广和应用。

公开(公告)号：CN108802381B

公开(公告)日：2021-03-12

申请号：CN201810604281.X

申请日：2018-06-13

申请人： 河南中泽生物工程有限公司 ,  扬州大学

发明人： 刘东民 ,  朱礼倩 ,  傅小恬 ,  陈鑫烨 ,  杨继飞 ,  王丽 ,  李青梅 ,  郭军庆 ,  邢广旭 ,  周景明 ,  刘运超

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/558

摘要： 本发明公开了一种牛病毒性腹泻病毒鉴别检测试纸条及其制备方法，以快速灵敏检测BVDV抗体。该试纸条由支撑底板、包被吸附材料层、蛋白标记承载材料层、样品缓冲材料层、液体吸收材料层、外层保护材料组成；所述包被吸附材料设有测试线和质控线；所述试纸条的蛋白标记采用胶体金标记；所述蛋白标记所用的蛋白为从噬菌体多肽文库中筛选所得的与BVDV抗体结合的噬菌体单克隆；所述噬菌体单克隆表达的多肽表位为LTPHKHHKHLHA。其制备方法包括金标噬菌体单克隆的制备、金标垫的制备、硝酸纤维素膜的制备、组装各部件，即得。本发明可以在十分钟之内获得检测结果，快速敏感，成本低，操作简单易于基层在生产和科研中推广和应用。

公开(公告)号：CN110627869A

公开(公告)日：2019-12-31

申请号：CN201910949075.7

申请日：2019-10-08

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 刘运超 ,  张改平 ,  陈玉梅 ,  王方雨 ,  尚延丽 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  刘东民 ,  邢广旭 ,  邓瑞广

IPC分类号： C07K7/06 ,  G01N33/569

摘要： 本发明涉及与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列及其应用，属于分子生物学领域。本发明借助于计算机辅助设计，在禽法氏囊病毒VP2蛋白晶体结构的基础上，通过分子对接虚拟筛选技术，搜寻虚拟多肽数据库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为SERWDN，即IBDVL9-15。本发明利用表达纯化的IBDV VP2蛋白分别进行ELISA和局域表面等离子体共振试验，结果表明，IBDVL9-15多肽能够与IBDV VP2蛋白有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对IBDV VP2抗原进行快速检测和分离纯化。

公开(公告)号：CN112301167A

公开(公告)日：2021-02-02

申请号：CN202011273737.2

申请日：2020-11-14

申请人： 郑州大学 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 王爱萍 ,  贾蕊 ,  张改平 ,  刘红亮 ,  孙亚宁 ,  邢广旭 ,  王彦伟 ,  蒋敏 ,  田媛媛 ,  白怡霖

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11

摘要： 本发明属于检验检疫技术领域，具体涉及一种检测非洲猪瘟病毒的引物探针组合及基于微流控芯片Digital PCR的检测方法。所述引物探针组合中引物对的核酸序列如SEQ ID NO.1~2所示，所述引物探针组合中探针的核酸序列如SEQ ID NO.3所示。所述引物探针组合用于扩增非洲猪瘟病毒的B646L基因的保守序列，所述保守序列具体如SEQ ID NO.4所示。当利用该引物探针组合进行基于微流控芯片Digital PCR时，对非洲猪瘟病毒的最低检测限可以低至每微升模板30.1995 copies，且Digital PCR具有很好的重复性，其平均CV值为9.56%。

公开(公告)号：CN109781980A

公开(公告)日：2019-05-21

申请号：CN201910088471.5

申请日：2019-01-30

申请人： 河南中泽生物工程有限公司 ,  郑州大学

发明人： 王爱萍 ,  陈玉梅 ,  赵建国 ,  刘运超 ,  邢广旭 ,  孙亚宁 ,  冯景

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/68 ,  G01N33/558 ,  G01N33/532

摘要： 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒快速检测卡及其应用，旨在解决非洲猪瘟病毒检测难的技术问题。该检测卡的金标垫上吸附有胶体金标记的抗非洲猪瘟病毒p30、p54和p72蛋白的多克隆抗体PoAbI；检测膜上设有羊抗或兔抗小鼠IgG抗体或金黄色葡萄球菌SPA印制的质控线C，还设有抗非洲猪瘟病毒p30、p54和p72蛋白的多克隆抗体PoAbII印制的检测线T。设计一种非洲猪瘟病毒快速检测卡的使用方法：采集待检样本加PBS或水混悬或研磨；滴入所述非洲猪瘟病毒快速检测卡的加样端；水平放置观察结果。本发明的非洲猪瘟病毒快速检测卡采用双抗体夹心法，特异性强、敏感性高，检测效率高，高效实用，具有重要的实际应用价值。

公开(公告)号：CN106947832A

公开(公告)日：2017-07-14

申请号：CN201710200348.9

申请日：2017-03-30

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  王爱萍 ,  苏运芳 ,  刘运超 ,  邓瑞广 ,  邢广旭 ,  陈玉梅 ,  郝慧芳 ,  王娟 ,  杨聪聪

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC分类号： C12Q1/701 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2561/101 ,  C12Q2545/114

摘要： 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典株和变异株荧光定量PCR鉴别检测方法，该方法基于PEDV经典毒株和变异毒株的S1基因，设计了两条特异性探针，并在探针的外围设计了一对特异性引物。分别以PEDV经典毒株和变异毒株的代表毒株CV777和CH/HNLY的cDNA为模板扩增目的片段，构建重组质粒作为标准品，用于建立标准曲线，并根据两个探针的不同报告基团来鉴别检测不同毒株。该方法具有较好的特异性、灵敏性和可重复性，可用于临床样本PEDV的鉴别检测。

公开(公告)号：CN109161575A

公开(公告)日：2019-01-08

申请号：CN201811083057.7

申请日：2018-09-17

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  刘运超 ,  邓瑞广 ,  邢广旭 ,  陈玉梅 ,  刘东民 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  周景明 ,  刘艳凯 ,  赵孟孟

IPC分类号： C12P21/02 ,  C07K14/08 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺，旨在解决工程菌禽法氏囊病毒VP2蛋白表达量低的技术问题。该发酵工艺包括以下步骤：（1）菌种活化；（2）种子培养；（3）补料分批发酵：I.细胞快速繁殖阶段：制备基础培养基置于发酵罐中，将二级种子液按4～6%的接种量接入发酵罐中发酵，待溶氧量急剧上升开始补料；II.蛋白表达阶段：加入终浓度为0.5mmol/L诱导剂；加入补料培养基之二，继续发酵至结束即成。本发明的工艺方法蛋白表达量高，能够缩短生产周期、减少设备投资，降低生产成本，提高生产效率，能够极大地提高产品在商场上的竞争力，为IBDV基因工程亚单位疫苗的研制和生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN110627869B

公开(公告)日：2022-04-22

申请号：CN201910949075.7

申请日：2019-10-08

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 刘运超 ,  张改平 ,  陈玉梅 ,  王方雨 ,  尚延丽 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  刘东民 ,  邢广旭 ,  邓瑞广

IPC分类号： C07K7/06 ,  G01N33/569

摘要： 本发明涉及与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列及其应用，属于分子生物学领域。本发明借助于计算机辅助设计，在禽法氏囊病毒VP2蛋白晶体结构的基础上，通过分子对接虚拟筛选技术，搜寻虚拟多肽数据库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为SERWDN，即IBDVL9‑15。本发明利用表达纯化的IBDV VP2蛋白分别进行ELISA和局域表面等离子体共振试验，结果表明，IBDVL9‑15多肽能够与IBDV VP2蛋白有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对IBDV VP2抗原进行快速检测和分离纯化。

公开(公告)号：CN106148358A

公开(公告)日：2016-11-23

申请号：CN201610557798.9

申请日：2016-07-15

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  刘运超 ,  王爱萍 ,  陈玉梅 ,  邢广旭 ,  姬鹏超 ,  刘文英 ,  王娟 ,  冯景 ,  刘东民 ,  邓瑞广

IPC分类号： C12N15/35 ,  C07K14/015 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N7/04 ,  A61K39/23 ,  A61P31/20 ,  C12R1/19

CPC分类号： C07K14/005 ,  A61K39/12 ,  A61K2039/5258 ,  C12N7/00 ,  C12N15/70 ,  C12N2750/14322 ,  C12N2750/14323 ,  C12N2750/14334 ,  C12N2800/101 ,  C12N2800/22

摘要： 本发明公开了一种猪细小病毒VP2蛋白的编码基因、原核表达VP2蛋白病毒样颗粒的方法及其在疫苗制备中的应用。对序列进行优化，人工合成VP2基因，将合成的基因插入pET28a载体，然后和伴侣蛋白质粒共转入BL21(DE3)宿主菌中，使VP2蛋白和伴侣蛋白共表达，以促进VP2蛋白的正确折叠。实验证明，通过该重组菌表达的VP2蛋白能在体外实现自组装，且具有良好的免疫原性。使用由本发明表达的VP2蛋白制备的病毒样颗粒亚单位疫苗免疫小鼠和豚鼠能够诱导高水平的血凝抑制抗体和中和抗体产生，而且此疫苗能够预防豚鼠免受猪细小病毒强毒的感染。采用本发明的重组菌能够高效制备猪细小病毒病毒样颗粒，生产成本低、操作简单、具有更好的生物安全性。