公开(公告)号：CN105647968B

公开(公告)日：2019-07-23

申请号：CN201610073847.1

申请日：2016-02-02

申请人： 浙江大学

发明人： 谢安勇 ,  郭涛 ,  冯依力

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12Q1/6897 ,  C12Q1/6811 ,  C12Q1/66

摘要： 本发明公开了一种CRISPR/Cas9工作效率快速测试系统及其应用，所述测试系统包括：(1)用于表达sgRNA的质粒；(2)用于表达Cas9的质粒；(3)用于测试CRISPR/Cas9基因编辑效率的报告系统；所述报告系统是将能够编码有效蛋白的核苷酸片段的C‑端与报告基因的N‑端拼接，拼接处插入两个限制性核酸内切酶酶切位点；在利用CRISPR/Cas9系统编辑(敲除)特定基因之前，靶序列的选择至关重要，这个选择会影响sgRNA对目的DNA的识别效率、与目的DNA的结合效率、Cas9的靶向切割效率和NHEJ修复效率，利用本系统可定量比较不同sgRNA–靶DNA序列的基因编辑效率，可以在短时间内确定工作效果最佳的sgRNA，提高实际敲除的成功率，这不仅可以降低工作成本，还可以提高工作效率，推动工作进程。

公开(公告)号：CN105647968A

公开(公告)日：2016-06-08

申请号：CN201610073847.1

申请日：2016-02-02

申请人： 浙江大学

发明人： 谢安勇 ,  郭涛 ,  冯依力

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/66

CPC分类号： C12N15/85 ,  C07K14/43595 ,  C12N9/0059 ,  C12N9/0069 ,  C12N9/2471 ,  C12N9/78 ,  C12N15/113 ,  C12N2310/10 ,  C12N2800/107 ,  C12N2800/80 ,  C12N2810/10 ,  C12Q1/6811 ,  C12Q1/6897 ,  C12Q2600/156 ,  C12Y110/03001 ,  C12Y113/12007 ,  C12Y302/01023 ,  C12Y305/04023 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2565/626

摘要： 本发明公开了一种CRISPR/Cas9工作效率快速测试系统及其应用，所述测试系统包括：(1)用于表达sgRNA的质粒；(2)用于表达Cas9的质粒；(3)用于测试CRISPR/Cas9基因编辑效率的报告系统；所述报告系统是将能够编码有效蛋白的核苷酸片段的C-端与报告基因的N-端拼接，拼接处插入两个限制性核酸内切酶酶切位点；在利用CRISPR/Cas9系统编辑(敲除)特定基因之前，靶序列的选择至关重要，这个选择会影响sgRNA对目的DNA的识别效率、与目的DNA的结合效率、Cas9的靶向切割效率和NHEJ修复效率，利用本系统可定量比较不同sgRNA–靶DNA序列的基因编辑效率，可以在短时间内确定工作效果最佳的sgRNA，提高实际敲除的成功率，这不仅可以降低工作成本，还可以提高工作效率，推动工作进程。

公开(公告)号：CN116970599A

公开(公告)日：2023-10-31

申请号：CN202310949103.1

申请日：2023-07-31

申请人： 浙江大学

发明人： 谢安勇 ,  冯依力 ,  王悦

IPC分类号： C12N15/10 ,  C12N15/85

摘要： 本发明公开了一种提高配对Cas9单切口酶基因编辑效率的方法，所述方法是将元件1和元件2用于在真核生物细胞内定点诱导3’‑黏性末端的DNA双链断裂的同时，提高基因编辑效率；所述元件1是配对Cas9单切口酶及其伴随元件；元件2是3’‑5’核酸外切酶TREX2；所述基因编辑包括基因敲除或基因敲进。本发明方法提高了配对Cas9单切口酶诱导的3’黏性末端的基因编辑效率，其中基因敲除效率提升最高达30倍，基因敲进效率提升最高达40倍；同时脱靶效应并没有因为TREX2的表达而改变，避免了脱靶效应的增强。本发明方法提高了配对Cas9单切口酶编辑的作用空间，融合质粒更为精简和安全，提高了应用的安全性和实用性。

公开(公告)号：CN116286975A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202310143821.X

申请日：2023-02-21

申请人： 浙江大学

发明人： 谢安勇 ,  冯依力 ,  刘嗣诚

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  C12N15/65

摘要： 本发明公开了一种基于dCas9的c‑NHEJ定点抑制系统及在提升HR介导的基因编辑效率中的应用，所述系统包括：(1)元件1：用于在真核细胞内定点诱导DSB的核酸酶及其伴随元件；(2)元件2：用于结合DNA断裂末端的dCas9‑sgRNA；(3)元件3：用于HR介导的基因编辑的同源模板。所述系统协同作用提高基因编辑效率。本发明提供了定点、高效抑制c‑NHEJ修复途径，同时定点、高效提升HR修复效率，有效提升HR介导的CRISPR基因编辑效率，同时降低脱靶效应。

公开(公告)号：CN109295060A

公开(公告)日：2019-02-01

申请号：CN201811088469.X

申请日：2018-09-18

申请人： 浙江大学

发明人： 谢安勇 ,  冯依力 ,  郭涛

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/63 ,  C12N15/90

摘要： 本发明公开了一种用于基因编辑的配对sgRNA及应用，根据靶标基因或靶标基因组位点的特定编辑需求设计多条sgRNA，选择两条特定间距、对应PAM特定位置组合的sgRNA作为配对sgRNA。本发明配对Cas9-sgRNA可以提高基因编辑效率及精准度，可以用来定量分析细胞和动物体内NHEJ，包括总NHEJ效率(即总编辑效率)、精准型NHEJ和突变型NHEJ的频率及比例、突变型NHEJ接口的增删方向、长度及频率、以及突变型NHEJ接口的微同源序列的利用度等。该技术更灵活、简单、快速，可方便地移植到各种细胞和组织器官中应用，而且准确度也不受影响。