用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包

    公开(公告)号:CN114574517A

    公开(公告)日:2022-06-03

    申请号:CN202210208817.2

    申请日:2022-03-04

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包,属于基因工程和代谢工程领域。通过更换起始密码子降低了TPR1的表达强度,获得了可用于酿酒酵母基因组高拷贝整合的重组质粒。更换TRP1的启动子为AAG或者GUG后的TRR1AAGdeg和TRR1GUGdeg具有良好的高拷贝整合能力,使转化后的菌株的荧光强度显著提升且降低了转化子数量,提升了筛选效率并有助于获得更高拷贝的菌株。对基因在酵母中过量表达基因和蛋白质有广阔的应用前景。

    一种利用分子设计导向提高适配体特异性和亲和力的方法

    公开(公告)号:CN114121154A

    公开(公告)日:2022-03-01

    申请号:CN202111211545.3

    申请日:2021-10-18

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明属于生物工程技术领域,具体涉及一种利用分子设计导向提高适配体特异性和亲和力的方法,包括以下步骤,S1:利用虚拟计算,从化合物信息库中筛选出适配体的靶标;S2:通过实验验证步骤S1筛选的结果;S3:对适配体的位点进行虚拟突变,筛选出适配体的突变位点;S4:对所述适配体的突变位点进行碱基替代;S5:检测碱基替代后的适配体与步骤S1筛选出的靶标的结合参数,选择碱基替代后提高了特异性和亲和力的适配体。本发明利用计算机理性计算开发一种高效分子设计导向的提高适配体结合特异性和亲和力的理性设计方法,从而定向改造提升适配体的特异性和结合力,对于适配体投入实际应用具有重要意义。

    一种α-氨基酸酯酰基转移酶在细胞表面表达的重组大肠杆菌与应用

    公开(公告)号:CN114107150A

    公开(公告)日:2022-03-01

    申请号:CN202111339299.X

    申请日:2021-11-12

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明提供了一种α‑氨基酸酯酰基转移酶在细胞表面表达的重组大肠杆菌与应用。所述重组大肠杆菌是通过将SAET蛋白与外膜蛋白OmpA融合表达得到。所述重组大肠杆菌的构建方法为:(1)以pET30a质粒、pACYCDuet‑1质粒或pET21a质粒为载体,将SAET蛋白基因构建至载体上,得到表达载体1;(2)将外膜蛋白OmpA的基因构建至表达载体1上SAET蛋白基因的上游,得到表达载体2;(3)将步骤(2)中所得表达载体2转化到宿主菌中,筛选SAET蛋白与外膜蛋白OmpA融合表达的重组菌,即为所述重组大肠杆菌。所述大肠杆菌在催化合成丙谷二肽中的应用。本发明生产成本低、操作步骤简单,利于其产业化应用。

    一种合成胭脂红酸的重组酿酒酵母的构建及其应用

    公开(公告)号:CN111979134B

    公开(公告)日:2022-02-15

    申请号:CN202010888117.3

    申请日:2020-08-28

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种合成胭脂红酸的重组酿酒酵母的构建及其应用,属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在酿酒酵母中异源表达环化酶zhuI、芳香化酶zhuJ、Octaketide synthase 1的OKS、C‑葡萄糖基转移酶UGT2、单加氧酶aptC和4’‑磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶npgA,获得能够合成胭脂红酸的重组酿酒酵母菌CA‑B2。所述重组酿酒酵母能够通过基于自身合成的乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A作为前体合成胭脂红酸,因而所述重组酿酒酵母在化妆品、纺织品、食品领域具有重要作用。

    一种基于N端编码序列改造调控蛋白质表达的方法

    公开(公告)号:CN111850096B

    公开(公告)日:2022-02-01

    申请号:CN202010742774.7

    申请日:2020-07-29

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于N端编码序列改造调控蛋白质表达的方法,属于基因工程及酶工程技术领域。本发明是以枯草芽孢杆菌为表达宿主,通过预测模型,评价N端编码区同义突变中,最有利于促进基因表达的核苷酸序列。通过结合超折叠绿色荧光蛋白(sfGFP)的NCS的前十个氨基酸同义突变文库,测定文库中蛋白的荧光强度,选择172个代表性样本并测序鉴定,使用统计学方法建立预测模型。通过该模型优化融合了BlgS信号肽的普鲁兰酶,可使普鲁兰酶胞外酶活提高至改造前的2.67倍以及降低48%,从而为N端基因的从头设计提供理性改造的方向,有利于简易地调控基因的表达。

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