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公开(公告)号：CN109439584A
公开(公告)日：2019-03-08
申请号：CN201811371823.X
申请日：2018-11-15
申请人： 广东省农业科学院农业生物基因研究中心
摘要： 本发明公开一种从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法，属于生化工程后处理技术领域。本发明首先将大肠杆菌发酵液pH值调整至合适范围，然后加入天然安全无毒絮凝剂和促凝剂溶液，充分搅拌使絮凝剂与发酵液中细胞结合并絮凝成团，静置一段时间后移去上层清液，回收下层富含细菌的絮团沉积液。通过这种絮凝沉积方法，可使大肠杆菌发酵液浓缩至原体积1/5～1/10，细菌回收率达90％以上，最高可达98％。本发明通过往发酵液中添加絮凝剂方式使发酵液中大肠杆菌细胞絮凝成团并快速沉降浓缩，可从发酵液中快速回收高浓度菌体，该方法可减少传统喷雾干燥工艺蒸发量，可大大减少设备投资，节省后处理时间，降低生产成本。
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公开(公告)号：CN111575319B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202010439225.2
申请日：2020-05-22
申请人： 广东省农业科学院农业生物基因研究中心
摘要： 本发明公开了一种高效的CRISPR RNP和供体DNA共位介导的基因插入或替换方法及其应用。该方法包括如下步骤：(1)将供体DNA进行生物素标记，得到生物素标记的供体DNA；(2)将Cas9蛋白与单价链霉亲和素的融合蛋白，sgRNA和生物素标记的供体DNA混合均匀，静置，得到CRISPR RNP‑供体DNA复合体；(3)将CRISPR RNP‑供体DNA复合体进行细胞核转化，实现基因插入或替换。本发明中利用该融合蛋白能结合生物素标记供体DNA的特性，使CRISPR RNP和供体DNA共同出现在目标位点，实现供体DNA在目标位点的精准插入或对目标位点基因的精准替换，适用于农作物和家畜育种方面。
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公开(公告)号：CN110879256B
公开(公告)日：2021-01-08
申请号：CN201910937442.1
申请日：2019-09-30
申请人： 广东省农业科学院农业生物基因研究中心
摘要： 本发明公开了一种高通量检测玉米花粉中初生代谢物的质谱方法，首先采用气质联用技术对普通玉米花粉代谢组提取液进行快速分析，得到其全面的代谢轮廓谱。首次系统鉴定了花粉中含有的67种初生代谢物。然后针对67种初生代谢物建立一种靶标代谢组分析方法，可以一次性对玉米花粉初生代谢组进行定量分析。包括:样品前处理、色谱质谱分离、代谢物结果鉴定、代谢物的定量分析。该方法重复性好，稳定性高，快速可靠，适用于玉米花粉以及其他作物花粉样品的初生代谢组分析。
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公开(公告)号：CN110878326A
公开(公告)日：2020-03-13
申请号：CN201910937420.5
申请日：2019-09-30
申请人： 广东省农业科学院农业生物基因研究中心
摘要： 本发明公开了一种增加次生代谢产物曲酸含量的培养基方法及其应用。先将200微升250毫摩尔每升溶于无水乙醇的α-亚麻酸母液，至无菌三角瓶中，在超净工作台内自然挥干，加入18毫升的GMS合成培养基混合均匀制成目标培养基T2；其次，将2毫升的扩大培养的黄曲霉菌孢子悬液至目标培养基T2中；最后，将其放置在摇床培养2-7天,摇床设置为28℃，180rpm。结果表明，通过向GMS合成培养基中添加α-亚麻酸制成的目标培养基T2，并利用该培养基培养黄曲霉菌，不仅可抑制黄曲霉毒素的合成，还可以增加黄曲霉菌的次生代谢产物曲酸的含量，从而可以合理有效的提高生产过程中曲酸的产量，降低生产成本，大力提升曲酸及其衍生产品用途的开发力度。
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公开(公告)号：CN110672740A
公开(公告)日：2020-01-10
申请号：CN201910937443.6
申请日：2019-09-30
申请人： 广东省农业科学院农业生物基因研究中心
摘要： 本发明公开了一种基于GC-MS技术的高通量定量分析猪肝脏内源代谢物的方法，包括样品前处理、色谱质谱分离、代谢物结果鉴定、代谢物的定量分析、代谢通路分析。本发明采用有机溶剂对猪肝脏样品进行超声辅助萃取得到全面的代谢物提取物，采用保留时间和质谱谱图库定性鉴定GC-MS采集的64种代谢物，然后采用非靶标定量分析方法定量分析所采集的64种代谢物，该方法重复性好，稳定性高，快速可靠，为开展肝脏代谢组相关研究提供了重要的参考。
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公开(公告)号：CN109666646A
公开(公告)日：2019-04-23
申请号：CN201811357061.8
申请日：2018-11-15
申请人： 广东省农业科学院农业生物基因研究中心
摘要： 本发明涉及细胞基因工程的技术领域，特别是涉及一种CD163基因编辑的猪胚胎成纤维细胞系的制备及应用，其可以减少外援遗传物质的携带，并且可以减少其他生物学功能缺失；包括以下步骤：（1）Cas9蛋白的表达；（2）Cas9蛋白的纯化；（3）sgRNA引导序列的设计；（4）体外转录；（5）猪胚胎成纤维细胞核转化；（6）细胞稀释；（7）分隔筛选；（8）扩大培养；（9）收集鉴定，本发明的细胞系可作为体细胞核移植的供体，用于转基因猪的制备。
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公开(公告)号：CN108359712A
公开(公告)日：2018-08-03
申请号：CN201810135075.9
申请日：2018-02-09
申请人： 广东省农业科学院农业生物基因研究中心
IPC分类号： C12Q1/6811
摘要： 本发明公开了一种快速高效筛选SgRNA靶向DNA序列的方法，该方法基于SgRNA靶向DNA序列框架，设计多条SgRNA靶向引物；然后以SgRNA载体为模板，通过PCR的方法获得hU6启动子序列+靶向SgRNA序列的DNA片段；接着将其转染到稳定表达Cas9细胞中，48小时后提取基因组；再通过PCR扩增获得含SgRNA靶点的基因组DNA片段，经双向测序分析，从而筛选SgRNA靶向DNA序列切割活性位点。本发明的筛选方法极大地缩短了筛选基因靶点时间，并降低了Crispr-Cas9系统的操作难度，具有操作性强、重复性好、成功率高、使用简单方便、可流程化操作等优点，适合试剂盒的研发。
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公开(公告)号：CN105907721A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610322402.2
申请日：2016-05-13
申请人： 广东省农业科学院农业生物基因研究中心
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/867
CPC分类号： C12N5/10 , C12N15/867 , C12N5/0679 , C12N15/86 , C12N2510/00 , C12N2740/15043 , C12N2800/107
摘要： 本发明公开了一种稳定表达Cas9蛋白的猪肠道上皮细胞系，是以新生仔猪非转化肠道上皮细胞系IPEC?J2为宿主细胞，转染含Cas9的慢病毒表达载体，经过20μg/mL的Blasticidin筛选得到的能够稳定表达Cas9蛋白的转化体。其构建方法为：(1)含Cas9的慢病毒表达载体的构建；(2)转化HEK293T细胞；(3)转染IPEC?J2细胞；(4)单克隆筛选。本发明的猪肠道上皮细胞系IPEC?J2?Cas9，能够稳定表达Cas9蛋白，生长曲线和未转化的IPEC?J2细胞相同，细胞形态与IPEC?J2细胞相同。本发明在研究仔猪肠道上皮细胞生长、分化以及应对外源物质刺激方面具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN105624194A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610087909.4
申请日：2016-02-16
申请人： 广东省农业科学院农业生物基因研究中心
IPC分类号： C12N15/867 , C12N5/10
CPC分类号： C12N15/86 , C12N5/0605 , C12N2740/15043
摘要： 本发明公开了一种条件性诱导Cas9表达的猪滋养层细胞系及其建立方法和应用，其是将Tet-on系统控制Cas9基因表达的慢病毒载体进行病毒包装，浓缩、纯化；慢病毒与特征的猪滋养层细胞系孵育后换液，添加嘌呤霉素进行药物筛选，将细胞稀释至单个细胞进行培养，得到单个细胞来源的Tet-on调控Cas9表达的猪滋养层细胞系。本发明的猪滋养层细胞系操作简单，使用方便，对于研究一些滋养层细胞的关键功能基因和猪基因靶点的筛选具有潜在的使用价值，这个细胞系将成为研究猪胎盘发育的一个重要的细胞材料，可应用于猪早期胎盘发育和子宫妊娠机制的相关研究，同时对于人类早期胚胎发育的研究也具有很大的参考价值。
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公开(公告)号：CN117337903A
公开(公告)日：2024-01-05
申请号：CN202210734244.7
申请日：2022-06-27
申请人： 广东省农业科学院农业生物基因研究中心 , 惠州养之源饲料科技有限公司
摘要： 本发明公开了大麦虫粉在制备改善雏鸡绒毛结构和免疫功能因子基因表达的饲料添加剂中的应用。发明人发现在日粮中添加大麦虫粉对雏鸡绒毛结构和免疫功能因子基因表达指标有改善作用或者显著改善作用，从而大麦虫粉能用于制备替代抗生素的饲料添加剂。大麦虫以南瓜、麸皮等农作物废弃物为食，对食物要求简单，生长速度快，转化效率高，安全性好，成本低廉，可大规模饲养。因此，本发明的前景广阔。
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