公开(公告)号：CN108586607A

公开(公告)日：2018-09-28

申请号：CN201810332746.0

申请日：2018-04-13

申请人： 郑州大学 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 王爱萍 ,  陈玉梅 ,  张改平 ,  刘东民 ,  王彦伟 ,  刘运超 ,  栗宁 ,  蒋敏

IPC分类号： C07K16/08 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577

CPC分类号： C07K16/084 ,  C07K2317/56 ,  G01N33/56983 ,  G01N33/577 ,  G01N2333/025

摘要： 本发明公开了一种抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体的制备方法及其应用。公开该抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体及其重链可变区和轻链可变区的DNA序列和氨基酸序列。设计了所述的抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体的制备方法。将所述的抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体在免疫学检测、抗原或抗体检测试剂盒中应用。该抗HPV16 L1蛋白的单克隆抗体能够特异性识别HPV16这一主要的流行亚型，与HPV16假病毒以及HPV16 L1蛋白都具有良好的反应性，与其他亚型的L1蛋白没有交叉反应。为进一步改造其抗体可变区序列制备不同组合形式的基因工程抗体和进行HPV不同亚型病原的临床检测研究奠定了良好的基础。

公开(公告)号：CN112625091A

公开(公告)日：2021-04-09

申请号：CN202011565041.7

申请日：2020-12-25

申请人： 河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  王爱萍 ,  王方雨 ,  刘东民 ,  周景明 ,  赵建国 ,  刘燕凯 ,  丁培杨 ,  冯景

IPC分类号： C07K7/06 ,  G01N33/569 ,  G01N33/68

摘要： 本发明主要涉及猪瘟病毒Erns蛋白亲和多肽及应用，该多肽由计算机模拟的虚拟分子对接技术设计而成，序列为WRHYIH。本发明以同源建模获得的猪瘟Erns蛋白晶体结构为模板，根据虚拟分子筛选技术，获得多肽序列P1。人工合成多肽后，采用酶联免疫吸附测定试验和等离子共振试验鉴定该序列与猪瘟Erns蛋白相互作用的亲和性，结果表明P1序列与猪瘟Erns蛋白具有较高的特异性和亲和力；本发明为以亲和肽作为亲和配基的亲和层析提供了可靠理论基础，可通过对多肽标记，从而对猪瘟Erns蛋白进行快速检测。

公开(公告)号：CN110627869B

公开(公告)日：2022-04-22

申请号：CN201910949075.7

申请日：2019-10-08

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 刘运超 ,  张改平 ,  陈玉梅 ,  王方雨 ,  尚延丽 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  刘东民 ,  邢广旭 ,  邓瑞广

IPC分类号： C07K7/06 ,  G01N33/569

摘要： 本发明涉及与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列及其应用，属于分子生物学领域。本发明借助于计算机辅助设计，在禽法氏囊病毒VP2蛋白晶体结构的基础上，通过分子对接虚拟筛选技术，搜寻虚拟多肽数据库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为SERWDN，即IBDVL9‑15。本发明利用表达纯化的IBDV VP2蛋白分别进行ELISA和局域表面等离子体共振试验，结果表明，IBDVL9‑15多肽能够与IBDV VP2蛋白有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对IBDV VP2抗原进行快速检测和分离纯化。

公开(公告)号：CN108802381B

公开(公告)日：2021-03-12

申请号：CN201810604281.X

申请日：2018-06-13

申请人： 河南中泽生物工程有限公司 ,  扬州大学

发明人： 刘东民 ,  朱礼倩 ,  傅小恬 ,  陈鑫烨 ,  杨继飞 ,  王丽 ,  李青梅 ,  郭军庆 ,  邢广旭 ,  周景明 ,  刘运超

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/558

摘要： 本发明公开了一种牛病毒性腹泻病毒鉴别检测试纸条及其制备方法，以快速灵敏检测BVDV抗体。该试纸条由支撑底板、包被吸附材料层、蛋白标记承载材料层、样品缓冲材料层、液体吸收材料层、外层保护材料组成；所述包被吸附材料设有测试线和质控线；所述试纸条的蛋白标记采用胶体金标记；所述蛋白标记所用的蛋白为从噬菌体多肽文库中筛选所得的与BVDV抗体结合的噬菌体单克隆；所述噬菌体单克隆表达的多肽表位为LTPHKHHKHLHA。其制备方法包括金标噬菌体单克隆的制备、金标垫的制备、硝酸纤维素膜的制备、组装各部件，即得。本发明可以在十分钟之内获得检测结果，快速敏感，成本低，操作简单易于基层在生产和科研中推广和应用。

公开(公告)号：CN108761098A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810960341.1

申请日：2018-08-22

申请人： 河南中泽生物工程有限公司

发明人： 周景明 ,  刘东民 ,  郭军庆 ,  蒋敏 ,  刘运超 ,  陈玉梅 ,  孙亚宁 ,  牛艳 ,  贾蕊

IPC分类号： G01N33/68

CPC分类号： G01N33/68

摘要： 本发明公开了一种致病性猪圆环病毒双联抗原快速检测试纸及其制备方法，旨在解决即时检测PCV2与PCV3的技术问题。该测试纸包括支撑板，样品端样品垫，金标垫，检测膜，手柄端吸水垫，检测线T1，检测线T2和质控线C，样品端样品垫、金标垫、检测膜、手柄端吸水垫互相交叉渗透；金标垫标记有PCV2单克隆抗体和PCV3 Cap蛋白单克隆抗体，检测线T1包被有PCV2单克隆抗体，检测线T2包被有PCV3 Cap蛋白单克隆抗体，质控线包被有兔抗小鼠IgG多克隆抗体或金黄色葡萄球菌SPA。本发明试纸廉价、特异、快速、简便无需仪器、易于运输，为疾病防控、检验检疫、感染监测以及临床和养殖基层的即时检测提供方便和效率。

公开(公告)号：CN106148358A

公开(公告)日：2016-11-23

申请号：CN201610557798.9

申请日：2016-07-15

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  刘运超 ,  王爱萍 ,  陈玉梅 ,  邢广旭 ,  姬鹏超 ,  刘文英 ,  王娟 ,  冯景 ,  刘东民 ,  邓瑞广

IPC分类号： C12N15/35 ,  C07K14/015 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N7/04 ,  A61K39/23 ,  A61P31/20 ,  C12R1/19

CPC分类号： C07K14/005 ,  A61K39/12 ,  A61K2039/5258 ,  C12N7/00 ,  C12N15/70 ,  C12N2750/14322 ,  C12N2750/14323 ,  C12N2750/14334 ,  C12N2800/101 ,  C12N2800/22

摘要： 本发明公开了一种猪细小病毒VP2蛋白的编码基因、原核表达VP2蛋白病毒样颗粒的方法及其在疫苗制备中的应用。对序列进行优化，人工合成VP2基因，将合成的基因插入pET28a载体，然后和伴侣蛋白质粒共转入BL21(DE3)宿主菌中，使VP2蛋白和伴侣蛋白共表达，以促进VP2蛋白的正确折叠。实验证明，通过该重组菌表达的VP2蛋白能在体外实现自组装，且具有良好的免疫原性。使用由本发明表达的VP2蛋白制备的病毒样颗粒亚单位疫苗免疫小鼠和豚鼠能够诱导高水平的血凝抑制抗体和中和抗体产生，而且此疫苗能够预防豚鼠免受猪细小病毒强毒的感染。采用本发明的重组菌能够高效制备猪细小病毒病毒样颗粒，生产成本低、操作简单、具有更好的生物安全性。

公开(公告)号：CN108752471B

公开(公告)日：2020-06-26

申请号：CN201810332092.1

申请日：2018-04-13

申请人： 河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  王爱萍 ,  陈玉梅 ,  蒋敏 ,  刘东民 ,  刘运超 ,  周景明 ,  刘燕凯

IPC分类号： C07K16/08 ,  C12N15/06 ,  G01N33/577

摘要： 本发明公开了一种抗PCV2单克隆抗体的制备方法及其应用。公开该抗PCV2单克隆抗体及其重链可变区和轻链可变区的DNA序列和氨基酸序列。设计了所述的抗PCV2单克隆抗体的制备方法。将所述单克隆抗体在抗原/抗体检测试剂盒、抗原/抗体免疫层析试纸以及IFA、IPMA中和PCV2或PCV2 Cap的免疫亲和柱中应用。本发明的单克隆抗体能够同时识别PCV2a和PCV2b这两种主要的流行亚型，与PCV2全病毒以及PCV2 Cap蛋白都具有良好的反应原性，而与PCV1、PCV3亚型和猪源病毒均无交叉反应；为进行PCV2病原学和致病机理的研究及PCV2病原的临床检测研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN109161575A

公开(公告)日：2019-01-08

申请号：CN201811083057.7

申请日：2018-09-17

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  刘运超 ,  邓瑞广 ,  邢广旭 ,  陈玉梅 ,  刘东民 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  周景明 ,  刘艳凯 ,  赵孟孟

IPC分类号： C12P21/02 ,  C07K14/08 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺，旨在解决工程菌禽法氏囊病毒VP2蛋白表达量低的技术问题。该发酵工艺包括以下步骤：（1）菌种活化；（2）种子培养；（3）补料分批发酵：I.细胞快速繁殖阶段：制备基础培养基置于发酵罐中，将二级种子液按4～6%的接种量接入发酵罐中发酵，待溶氧量急剧上升开始补料；II.蛋白表达阶段：加入终浓度为0.5mmol/L诱导剂；加入补料培养基之二，继续发酵至结束即成。本发明的工艺方法蛋白表达量高，能够缩短生产周期、减少设备投资，降低生产成本，提高生产效率，能够极大地提高产品在商场上的竞争力，为IBDV基因工程亚单位疫苗的研制和生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN108823218A

公开(公告)日：2018-11-16

申请号：CN201810797851.1

申请日：2018-07-19

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  刘运超 ,  蒋大伟 ,  陈玉梅 ,  刘东民 ,  赵建国 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  周景明 ,  刘燕凯 ,  邓瑞广

IPC分类号： C12N15/40 ,  C12N15/11 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K14/08 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因、其表达产物、其亚单位疫苗及应用。本发明提供了一种鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的核酸序列、克隆该核酸序列的引物、含该核酸序列的表达载体、由表达载体转化而得的工程菌、由核酸序列编码、表达载体表达或所工程菌分离的鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白，及鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白自组装而成的鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒。还提供了由鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白制得的亚单位疫苗，由鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒制得的亚单位疫苗。将亚单位疫苗在预防鸡传染性法氏囊病病毒引起的鸡相关疾病中应用。本发明生产成本低、操作简单、生物安全性好，疫苗可有效预防鸡传染性法氏囊病毒对鸡群的感染。

公开(公告)号：CN112409494B

公开(公告)日：2022-06-07

申请号：CN202011133005.3

申请日：2020-10-21

申请人： 河南中泽生物工程有限公司

发明人： 王爱萍 ,  张改平 ,  丁培阳 ,  陈玉梅 ,  刘红亮 ,  刘东民 ,  梁超 ,  冯景

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A61K39/145 ,  A61P31/16 ,  B82Y5/00 ,  B82Y40/00 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供了一种通用型流感病毒抗原蛋白。本发明将PCV2的Cap蛋白与来源于人、猪和禽的M2e表位蛋白融合表达。所述PCV2的Cap蛋白与来源于人、猪和禽的M2e表位蛋白融合表达，为来源于人、猪和禽的M2e表位按照不同的次序与Cap蛋白的羧基端融合串联表达并自组装形成Cap‑3M2e的抗原蛋白。本发明确定了基于M2e表位的通用型流感疫苗的最佳排列次序，并研制最适用于猪的基于M2e表位的通用型流感疫苗；该疫苗能够诱导高水平的PCV2特异性中和抗体，具有成为二价疫苗的潜力；经过优化的基因更适合在大肠杆菌宿主中高效率表达目标蛋白，而且能够满足工业化生产的要求，产量高，成本低。