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公开(公告)号：CN109679989A
公开(公告)日：2019-04-26
申请号：CN201811634032.1
申请日：2018-12-29
申请人： 北京市农林科学院
CPC分类号： C12N15/8213
摘要： 本发明公开了一种提高碱基编辑系统编辑效率的方法。该方法包括如下步骤：使受体表达sgRNA、抗潮霉素蛋白、Cas9蛋白、胞嘧啶脱氨酶和尿嘧啶DNA糖化酶抑制剂，从而对所述受体基因组中的靶基因进行碱基编辑；受体为植物愈伤组织；导入植物愈伤组织的过程中，使用潮霉素作为筛选剂筛选抗性愈伤组织；潮霉素的浓度为35-80mg/L。实验证明，提高筛选剂潮霉素的浓度，可以提高SpCas9n(D10A)&PmCDA1&UGI碱基编辑系统和rAPOBEC1&SpCas9n&UGI碱基编辑系统的C→T碱基替换效率，进而获得高效获得突变体。本发明具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN109652440A
公开(公告)日：2019-04-19
申请号：CN201811619487.6
申请日：2018-12-28
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了VQRn-Cas9&PmCDA1&UGI碱基编辑系统在植物基因编辑中的应用。本发明公开的VQRn-Cas9&PmCDA1&UGI碱基编辑系统由VQRn-Cas9、PmCDA1、UGI和如式I所示的sgRNA组成；靶点序列转录的RNA-sgRNA骨架(式I)，sgRNA骨架为将序列1的第571-646位或序列7中的T替换为U得到的RNA。本发明的VQRn-Cas9&PmCDA1&UGI碱基编辑系统，在植物中实现了靶点序列的编辑，尤其是靶点序列中由C到T的替换，具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN110551752B
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN201910812765.8
申请日：2019-08-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了xCas9n‑epBE碱基编辑系统及其在基因组碱基替换中的应用。本发明公开的xCas9n‑epBE碱基编辑系统包括xCas9n、PmCDA1、UGI和tRNA‑esgRNA组成；所述tRNA‑esgRNA靶向靶点序列；所述tRNA‑esgRNA如式I所示：tRNA‑所述靶点序列转录的RNA‑esgRNA骨架(式I)。通过实验证明：本发明的xCas9n‑epBE碱基编辑系统可在植物基因组中实现靶点序列的编辑，尤其是在PAM序列为GAC或GAG时实现靶点序列中碱基C到碱基T的碱基替换。本发明的xCas9n‑epBE碱基编辑系统在植物或动物基因组碱基替换中具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN114317596A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202011060349.6
申请日：2020-09-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了一种将植物基因组靶点序列中的A突变为G的方法。该方法包括如下步骤：将SpRYn、腺嘌呤脱氨酶和esgRNA导入植物体内，实现将植物基因组靶点序列中的A突变为G；所述esgRNA靶向靶点序列；所述esgRNA如式I所示：所述靶点序列转录的RNA‑esgRNA骨架(式I)。通过实验证明：本发明方法可对位于植物基因组上的PAM序列为NGC或NGA或NGG的靶点序列中的碱基A进行编辑，实现碱基A到碱基G的替换，在拓展可编辑的A的范围的同时，还提高了碱基替换效率。
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公开(公告)号：CN110982818B
公开(公告)日：2022-03-08
申请号：CN201911323608.7
申请日：2019-12-20
申请人： 北京市农林科学院
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/61 , C12N9/90 , C12N9/22 , C12N9/78 , C12N15/55 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/46
摘要： 本发明公开了核定位信号F4NLS在高效创制水稻除草剂抗性材料中的应用。所述核定位信号F4NLS由核定位信号甲和核定位信号乙组成，所述核定位信号甲包括3*Flag2标签蛋白和NLS2蛋白；所述核定位信号乙包括所述NLS2蛋白。本发明还公开了一种ACCase抑制除草剂抗性水稻的制备方法。所述方法包括使受体水稻中表达esgRNA、腺嘌呤脱氨酶、Cas9核酸酶、核定位信号甲和核定位信号乙的步骤；所述腺嘌呤脱氨酶、所述Cas9核酸酶、所述核定位信号甲和所述核定位信号乙在所述esgRNA的向导下，可将受体水稻基因组中OsACC1基因靶点序列的第7位由A突变为G，从而获得ACCase抑制除草剂抗性水稻。
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公开(公告)号：CN110669775B
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN201910938672.X
申请日：2019-09-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了差异代理技术在A·G碱基替换细胞富集中的应用。本发明的差异代理技术载体包括靶向目标基因靶点序列的esgRNA、靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA、A·G碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因；A·G碱基替换系统在靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA的向导下，可通过对所述功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列进行A·G碱基替换使所述功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复。本发明实现了细胞水平上A·G碱基替换细胞富集，大大提高A·G碱基替换效率。
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公开(公告)号：CN110951742A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911405281.8
申请日：2019-12-31
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明提供了一种不产生DNA双链断裂的实现基因替换的方法。所述方法包括如下步骤：将sgRNA、Cas9切刻酶、供体DNA导入目的植物中；sgRNA靶向DNA片段甲靶点序列；供体DNA依次包括DNA片段甲靶点序列、DNA片段乙和DNA片段甲靶点序列；DNA片段乙为将DNA片段甲经过一个或几个碱基突变后得到的DNA分子；在sgRNA引导下，Cas9切刻酶在目的植物基因组中的DNA片段甲靶点序列处和所述供体DNA中的DNA片段甲靶点序列处均产生单链DNA切刻，并通过目的植物体内的修复机制将目的植物基因组中的DNA片段甲替换为DNA片段乙，实现植物基因替换。
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公开(公告)号：CN110577965A
公开(公告)日：2019-12-17
申请号：CN201910812816.7
申请日：2019-08-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了xCas9n-epBE碱基编辑系统在基因编辑中的应用。本发明公开的xCas9n-epBE碱基编辑系统包括xCas9n、PmCDA1、UGI和tRNA-esgRNA；所述tRNA-esgRNA靶向靶点序列；所述tRNA-esgRNA如式I所示：tRNA-所述靶点序列转录的RNA-esgRNA骨架(式I)。通过实验证明：本发明的xCas9n-epBE碱基编辑系统在植物基因组中实现了靶点序列的编辑，尤其是在PAM序列为NGT、NGA、NGG、GAA或GAT时实现了靶点序列中由碱基C到碱基T的替换。本发明的xCas9n-epBE碱基编辑系统在植物或动物基因编辑中具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN110551752A
公开(公告)日：2019-12-10
申请号：CN201910812765.8
申请日：2019-08-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了xCas9n-epBE碱基编辑系统及其在基因组碱基替换中的应用。本发明公开的xCas9n-epBE碱基编辑系统包括xCas9n、PmCDA1、UGI和tRNA-esgRNA组成；所述tRNA-esgRNA靶向靶点序列；所述tRNA-esgRNA如式I所示：tRNA-所述靶点序列转录的RNA-esgRNA骨架(式I)。通过实验证明：本发明的xCas9n-epBE碱基编辑系统可在植物基因组中实现靶点序列的编辑，尤其是在PAM序列为GAC或GAG时实现靶点序列中碱基C到碱基T的碱基替换。本发明的xCas9n-epBE碱基编辑系统在植物或动物基因组碱基替换中具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN116478987A
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202310298314.3
申请日：2023-03-24
申请人： 北京市农林科学院 , 北京农科院种业科技有限公司
摘要： 本发明公开了PE‑Nt4引导编辑系统及其在基因组碱基编辑中的应用。所述PE‑Nt4引导编辑系统包括nesgRNA、pegRNA、融合蛋白和紫色筛选标记蛋白PAP1，其中，融合蛋白依次包括M‑MLV RT、Cas9n(H840A)、P2A和潮霉素磷酸转移酶。通过实验证明：与PE‑Nt2和PE‑Nt3相比，PE‑Nt4引导编辑系统对烟草靶点的编辑效率显著提高。同时，PAP1基因表达会导致花青素的合成，形成肉眼可辨的紫色，不仅可用于阳性T0苗的直接筛选，还可用于直接剔除含有转基因标签的T1苗。更为重要的是，本发明利用PE‑Nt4系统在双子叶植物中实现了目标碱基突变的稳定遗传。
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