xCas9基因编辑系统在基因组编辑中的应用

    公开(公告)号:CN112538477A

    公开(公告)日:2021-03-23

    申请号:CN202011398790.5

    申请日:2020-12-02

    摘要: 本发明公开了xCas9基因编辑系统在基因组编辑中的应用。所述xCas9基因编辑系统包括xCas9和sgRNA。所述基因组编辑的方法包括如下步骤:将xCas9和sgRNA导入生物体或生物细胞内,实现基因组靶点序列的编辑;所述编辑为使所述靶点序列或其邻近序列发生碱基插入和/或缺失;所述sgRNA靶向靶点序列;所述靶点序列的PAM序列为GAD或NGN;D为G、T或A;N为A、T、C或G。通过实验证明:本发明的xCas9基因编辑系统可对位于生物基因组上的PAM序列为GAD或NGN的靶点序列或其邻近序列进行编辑,大大拓展了可编辑靶点的范围。

    FNLS-sABE系统在创制水稻除草剂抗性材料中的应用

    公开(公告)号:CN110951773A

    公开(公告)日:2020-04-03

    申请号:CN201911323194.8

    申请日:2019-12-20

    摘要: 本发明公开了FNLS-sABE系统在创制水稻除草剂抗性材料中的应用。所述FNLS-sABE系统包括核定位信号甲和核定位信号乙,所述核定位信号甲包括3*Flag1标签蛋白和NLS1蛋白;所述核定位信号乙包括所述NLS1蛋白。本发明还公开了一种ACCase抑制除草剂抗性水稻的制备方法。所述方法包括使受体水稻中表达esgRNA、腺嘌呤脱氨酶、Cas9核酸酶、核定位信号甲和核定位信号乙的步骤;所述腺嘌呤脱氨酶、所述Cas9核酸酶、所述核定位信号甲和所述核定位信号乙在所述esgRNA的向导下,可将受体水稻基因组中OsACC1基因靶点序列的第7位由A突变为G,从而获得ACCase抑制除草剂抗性水稻。

    一种不产生DNA双链断裂的实现植物基因替换的方法

    公开(公告)号:CN110951742A

    公开(公告)日:2020-04-03

    申请号:CN201911405281.8

    申请日:2019-12-31

    摘要: 本发明提供了一种不产生DNA双链断裂的实现基因替换的方法。所述方法包括如下步骤:将sgRNA、Cas9切刻酶、供体DNA导入目的植物中;sgRNA靶向DNA片段甲靶点序列;供体DNA依次包括DNA片段甲靶点序列、DNA片段乙和DNA片段甲靶点序列;DNA片段乙为将DNA片段甲经过一个或几个碱基突变后得到的DNA分子;在sgRNA引导下,Cas9切刻酶在目的植物基因组中的DNA片段甲靶点序列处和所述供体DNA中的DNA片段甲靶点序列处均产生单链DNA切刻,并通过目的植物体内的修复机制将目的植物基因组中的DNA片段甲替换为DNA片段乙,实现植物基因替换。

    xCas9n-epBE碱基编辑系统在基因编辑中的应用

    公开(公告)号:CN110577965A

    公开(公告)日:2019-12-17

    申请号:CN201910812816.7

    申请日:2019-08-30

    摘要: 本发明公开了xCas9n-epBE碱基编辑系统在基因编辑中的应用。本发明公开的xCas9n-epBE碱基编辑系统包括xCas9n、PmCDA1、UGI和tRNA-esgRNA;所述tRNA-esgRNA靶向靶点序列;所述tRNA-esgRNA如式I所示:tRNA-所述靶点序列转录的RNA-esgRNA骨架(式I)。通过实验证明:本发明的xCas9n-epBE碱基编辑系统在植物基因组中实现了靶点序列的编辑,尤其是在PAM序列为NGT、NGA、NGG、GAA或GAT时实现了靶点序列中由碱基C到碱基T的替换。本发明的xCas9n-epBE碱基编辑系统在植物或动物基因编辑中具有广泛的应用前景。

    xCas9n-epBE碱基编辑系统及其在基因组碱基替换中的应用

    公开(公告)号:CN110551752A

    公开(公告)日:2019-12-10

    申请号:CN201910812765.8

    申请日:2019-08-30

    摘要: 本发明公开了xCas9n-epBE碱基编辑系统及其在基因组碱基替换中的应用。本发明公开的xCas9n-epBE碱基编辑系统包括xCas9n、PmCDA1、UGI和tRNA-esgRNA组成;所述tRNA-esgRNA靶向靶点序列;所述tRNA-esgRNA如式I所示:tRNA-所述靶点序列转录的RNA-esgRNA骨架(式I)。通过实验证明:本发明的xCas9n-epBE碱基编辑系统可在植物基因组中实现靶点序列的编辑,尤其是在PAM序列为GAC或GAG时实现靶点序列中碱基C到碱基T的碱基替换。本发明的xCas9n-epBE碱基编辑系统在植物或动物基因组碱基替换中具有广泛的应用前景。

    一种基因编辑效率提高的引导碱基编辑系统及其应用

    公开(公告)号:CN114763556B

    公开(公告)日:2024-04-26

    申请号:CN202011621689.1

    申请日:2020-12-31

    摘要: 本发明公开了一种基因编辑效率提高的引导碱基编辑系统及其应用。所述引导碱基编辑系统包括融合蛋白或与所述融合蛋白相关的生物材料、pegRNA或与所述pegRNA相关的生物材料;所述融合蛋白包括反转录酶、Cas9切刻酶、自切割寡肽和筛选标记蛋白;所述pegRNA包括esgRNA、逆转录模板序列和引物结合位点序列;所述逆转录模板序列中引入的突变碱基包括在目标突变位点引入的突变碱基和在目标突变位点以外的其它位点引入的额外的突变碱基。通过实验证明:该引导碱基编辑系统可显著提高PE‑P2或PE‑P3引导编辑系统的编辑效率。

    一种将植物基因组靶点序列中的A突变为G的方法

    公开(公告)号:CN114317596B

    公开(公告)日:2024-01-16

    申请号:CN202011060349.6

    申请日:2020-09-30

    IPC分类号: C12N15/84 A01H5/00 A01H6/46

    摘要: 本发明公开了一种将植物基因组靶点序列中的A突变为G的方法。该方法包括如下步骤:将SpRYn、腺嘌呤脱氨酶和esgRNA导入植物体内,实现将植物基因组靶点序列中的A突变为G;所述esgRNA靶向靶点序列;所述esgRNA如式I所示:所述靶点序列转录的RNA‑esgRNA骨架(式I)。通过实验证明:本发明方法可对位于植物基因组上的PAM序列为NGC或NGA或NGG的靶点序列中的碱基A进行编辑,实现碱基A到碱基G的替换,在拓展可编辑的A的范围的同时,还提高了碱基替换效率。