一种催化效率提高的内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶突变体

    公开(公告)号:CN110499301B

    公开(公告)日:2021-10-29

    申请号:CN201910807954.6

    申请日:2019-08-29

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的内消旋‑二氨基庚二酸脱氢酶突变体,属于基因工程技术领域。本发明通过对SEQ ID NO.2的内消旋—二氨基庚二酸脱氢酶进行单点/双位点突变,并在大肠杆菌中成功表达并纯化出突变体酶D94A、W123K、D94A/W123K、W148K,通过酶活测定,发现所述三种内消旋—二氨基庚二酸脱氢酶突变体具有相对于野生型较高的催化活性,如突变体酶DAPDH‑D94A、DAPDH‑W123K、DAPDH‑D94A/W123K催化苯丙酮酸的效率分别提高了3.5、1.5、1.3倍,成功提高了关键酶的酶活。

    一种生产菜油甾醇的酿酒酵母工程菌及构建方法

    公开(公告)号:CN112812983A

    公开(公告)日:2021-05-18

    申请号:CN202110176165.4

    申请日:2021-02-06

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种生产菜油甾醇的酿酒酵母工程菌及构建方法,属于基因工程和生物工程领域。本发明通过将7‑脱氢胆固醇还原酶的表达盒元件导入到酵母细胞体内,利用CRISPR/Cas9基因操作系统整合至酵母基因组中,还敲除了C‑22甾醇去饱和酶,解除麦角固醇分支途径的竞争,实现了从葡萄糖到菜油甾醇的酵母合成。本发明的方法工艺简单,绿色环保,可用于发酵生产菜油甾醇。采用本发明提供酿酒酵母工程菌株BY4742‑Δerg5‑TEF1p‑dhcr7‑ADH1t制备得到的菜油甾醇的产量,在摇瓶阶段可达253.35mg/L,发酵罐水平产量可达916.88mg/L,比菌株在摇瓶阶段菜油甾醇的产量提升了2.6倍。

    一种利用全细胞转化生产4-羟基异亮氨酸的方法

    公开(公告)号:CN109628476B

    公开(公告)日:2021-01-29

    申请号:CN201910120166.X

    申请日:2019-02-18

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用全细胞转化生产4‑羟基异亮氨酸的方法,属于基因工程技术领域。本发明提供了一段可用于编码L‑异亮氨酸羟化酶的基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示),将此基因在枯草芽孢杆菌中进行表达,可使枯草芽孢杆菌能够高效合成比酶活高且4‑羟基异亮氨酸转化率高的L‑异亮氨酸羟化酶;将本发明的枯草芽孢杆菌工程菌培养12~24h,即可使粗酶液中的L‑异亮氨酸羟化酶的酶活高达171.67U/mL;利用本发明的的枯草芽孢杆菌工程菌生产得到的L‑异亮氨酸羟化酶比酶活和4‑羟基异亮氨酸转化率均较高,其中,比酶活可达437.6U/mg,4‑羟基异亮氨酸转化率可达99.87%。

    一种γ-谷氨酰胺转肽酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN112111468A

    公开(公告)日:2020-12-22

    申请号:CN202011006299.3

    申请日:2020-09-23

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种γ‑谷氨酰胺转肽酶突变体及其应用,属于基因工程领域;本发明在天然γ‑谷氨酰胺转肽酶的基础上,通过定点突变生物技术改造γ‑谷氨酰胺转肽酶分子结构,本发明所提供的突变体T401P、T422S,其转肽酶活较原始菌株分别提高了32.3%、41.8%;比酶活分别提高了近4.5倍、5.1倍,本发明表明401位点及422位点残基对于GGT催化苦味氨基酸具有重要影响,可用于改善含苦味氨基酸产品的口感与品质,这对于γ‑谷氨酰胺转肽酶在医药和食品行业的应用具有重要意义。

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