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公开(公告)号：CN103060924A
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN201110316066.8
申请日：2011-10-18
申请人： 深圳华大基因科技有限公司 , 深圳华大基因研究院
CPC分类号： C12Q1/6874 , C12N15/1093 , C12Q1/6853 , C12Q1/686 , C12Q1/6869 , C12Q2523/125 , C12Q2525/179 , C12Q2525/191 , C12Q2531/113 , C12Q2537/159
摘要： 本发明涉及微量核酸样本的文库制备方法及其应用，所述方法包括：用DOP(Degenerate Oligonucleotide Primed)引物对样本中的DNA进行第一次扩增，DOP引物序列具有至少5′端非简并核苷酸区和3′端简并核苷酸区；用DOP-Amp引物对第一PCR产物进行第二次扩增，获得第二PCR扩增产物；对第二PCR扩增产物进行接头连接PCR(adaptor-ligation PCR)，获得第三PCR产物，两端带有测序接头的第三PCR产物即为核酸文库。所述文库可以进行片段大小选择和高通量测序，得到样本中疾病相关的基因信息。本发明还提供一种试剂盒及其在所述微量核酸样本文库制备的用途。
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公开(公告)号：CN103014137A
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201110283718.2
申请日：2011-09-22
申请人： 深圳华大基因科技有限公司 , 深圳华大基因研究院
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6809 , C12Q2525/191 , C12Q2535/122
摘要： 本发明公开了一种分析基因表达定量的方法，所述方法包括：从总RNA中纯化mRNA，制备片段化mRNA；将所述片段化mRNA逆转录制备得到cDNA，将所述cDNA纯化后制备为平末端DNA，纯化所述平末端DNA；将所述平末端DNA片段制备得到末端加“A”碱基的DNA片段；在所述末端加“A”碱基的DNA片段两端加接头序列，得到两端加接头序列的DNA片段并进行纯化，对所述两端加接头序列的DNA片段进行PCR反应，纯化PCR反应产物；对所述PCR反应产物测序；将所述测序得到的数据过滤不合格序列得到干净序列，利用短序列映射程序将所述干净序列与参考序列比对，对所述比对结果进行分析。本发明有效的实现了定量准、可重复性高、费用低、检测阈值宽、信号噪音小等优点。
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公开(公告)号：CN102560688A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201010588936.2
申请日：2010-12-15
申请人： 深圳华大基因科技有限公司 , 深圳华大基因研究院
CPC分类号： C12Q1/6806 , C12Q2521/501 , C12Q2525/191 , C12Q2527/125 , C12Q2535/122
摘要： 本发明提供了一种新的基于illumina测序平台的文库构建方法，特别是小片段DNA文库构建方法，针对现有illumina测序平台的小片段DNA建库的上述缺陷，能够减少纯化步骤，降低文库的损失和浪费，减低成本，提高劳动效率。
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公开(公告)号：CN101532014A
公开(公告)日：2009-09-16
申请号：CN200810218333.6
申请日：2008-12-12
申请人： 深圳华大基因研究院 , 深圳华大基因科技有限公司
摘要： 本发明提供了一种对目标基因组区域边扩增边连接的公用接头，该公用接头具有两对，其中，每对接头都由一对反向互补的寡居核苷酸以5’→3’方向和以3’→5’方向碱基相互配对组合而成，所述寡核苷酸序列的结构特征为：1)每对接头其中一条寡核苷酸序列的3'端多一个碱基“T”；2)在多核苷酸扩增和连接退火温度下不与目标基因组结合；3)序列长度至少为18个碱基。本发明还涉及对目标基因组区域边扩增边连接的连接方法，以及对目标基因组区域建立重测序随机DNA文库的方法。本发明的方法提高了边扩增边连接的效率，降低了实验成本，且具有高的实验通量。
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