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公开(公告)号：CN116410941A
公开(公告)日：2023-07-11
申请号：CN202211738640.3
申请日：2022-12-31
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一种3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体及其编码基因，以及含有该编码基因的重组载体和基因工程菌，以及所述3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体在微生物催化甾体C1,2脱氢制备甾体类药物中的应用。所述突变体由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶经定点饱和突变获得，所述突变的位点为下列之一或其中两种以上的组合：第161位、第170位、第545位、第161位、第545位。本发明通过多序列比对选点并进行定点定向突变改变蛋白质氨基酸残基，将酶活性催化中心氨基酸突变，提高3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶催化效率；将催化活性有显著提高的突变基因进行扩增，利用穿梭质粒将KsdD基因过表达于简单节杆菌中，进行转化，构建的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的重组大肠杆菌可将3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶酶活较出发菌株提高1.1～1.6倍更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
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公开(公告)号：CN111705030B
公开(公告)日：2023-03-31
申请号：CN202010647597.4
申请日：2020-07-07
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一种产L‑高丝氨酸的大肠杆基因工程菌、构建方法及菌株。本发明大肠杆菌ZJUT H‑2/AS（Escherichia coli ZJUT H‑2/AS），保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M 2020233，保藏地址为中国武汉，武汉大学，邮编430072。本发明的有益效果主要体现在：（1）本发明针对ppc基因，pyc基因，iclR基因的改造可以减少发酵过程中乙酸等副产物的积累；（2）本发明中蔗糖代谢基因scrA，scrB和scrK可以通过合适的载体导入到其他工程菌株中使其获得高效代谢蔗糖的能力；（3）本发明诱变育种获得的L‑高丝氨酸的大肠杆基因工程菌相对原始菌株H‑0，L‑高丝氨酸产量提高了347%，能够作为基因工程菌的原始菌株。
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公开(公告)号：CN115806925A
公开(公告)日：2023-03-17
申请号：CN202211335564.1
申请日：2022-10-28
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一种高产L‑半胱氨酸的基因工程菌、构建方法，及其在微生物发酵制备L‑半胱氨酸中的应用。本发明通过将Esa群体感应系统和乳糖操纵子系统进行整合，构建了一个多功能的QSI动态调控系统，实现了靶基因表达与细胞生长的偶联，并应用到L‑半胱氨酸的生物合成当中，获得了一株高产L‑半胱氨酸的大肠杆菌基因工程菌株。此外，本发明所构建QSI动态控制系统，利用群体感应系统动态地控制乳糖操纵子系统，替代了传统诱导剂IPTG的添加，有效的节约了工业生产的成本和降低了诱导剂IPTG对细胞的毒性影响，具有较好的生产应用价值。
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公开(公告)号：CN112126592B
公开(公告)日：2022-06-14
申请号：CN202010783486.6
申请日：2020-08-06
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种中国被毛孢诱变株及其在生产核苷中的应用，该中国被毛孢诱变株命名为中国被毛孢(Hirsutella sinensis)ZJB19050，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020117，保藏日期为2020年5月11日，保藏地址为中国武汉，武汉大学；邮编为430072。本发明利用原生质体技术对原始中国被毛孢菌株ZJB18002进行物理、化学等诱变方式，得到了诱变株；该诱变株的代谢产物尿苷产量提高约1.13倍，鸟苷产量提高0.67倍，腺苷产量提高1.60倍，使虫草的生产成本降低，有利于中国被毛孢的广泛推广和应用。
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公开(公告)号：CN114606253A
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN202210244457.1
申请日：2022-03-14
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种无外源氨基酸作用下高产L‑甲硫氨酸的重组大肠杆菌及其应用，所述重组大肠杆菌以赖氨酸途径敲除的L‑甲硫氨酸高产菌株E.coliW3110M2/pAm为出发菌株，在基因组上对lysA基因进行原位回补，并将lysA基因的启动子替换为PfliA启动子，再在pAm的质粒上过表达gltA基因和malY基因获得的；本发明菌株在发酵过程中无需外源添加必需氨基酸也可以生长良好，降低了发酵成本，解决了发酵过程中必需氨基酸添加时机的不确定性，降低了发酵调控的操作难度，使摇瓶中L‑甲硫氨酸产量从添加赖氨酸获得的2.44g/L提高至无外源氨基酸添加时的2.96g/L。
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公开(公告)号：CN111019877B
公开(公告)日：2022-04-19
申请号：CN201911409238.9
申请日：2019-12-31
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明一种L‑半胱氨酸的基因工程菌及构建方法，以及该基因工程菌在微生物发酵制备L‑半胱氨酸中的应用。本发明通过(1)强化大肠杆菌L‑半胱氨酸合成途径的丝氨酸模块，增强大肠杆菌对丝氨酸的利用能力，(2)减弱丝氨酸的转运，减弱副产物对L‑半胱氨酸合成的影响，(3)增加硫模块合成基因的表达(4)质粒上异源表达Corynebacterium glutamicum的serC基因，得到L‑半胱氨酸高产的大肠杆菌基因工程菌株，L‑半胱氨酸产量从2.7g/L提高到3.83g/L。
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公开(公告)号：CN113980873A
公开(公告)日：2022-01-28
申请号：CN202111495505.6
申请日：2021-12-09
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一株筑波链霉菌及其在发酵生产他克莫司中的应用。属于微生物发酵技术领域。一株筑波链霉菌（Streptomyces tsuknbaenis）SCLX0001，保藏编号：CCTCC NO:M 20211303。本发明的筑波链霉菌SCLX0001，合成他克莫司能力强，诱变出发菌株摇瓶发酵产量为50mg/L，出发菌经过多轮诱变后，最终获得他克莫司高产筑波链霉菌SCLX0001，摇瓶发酵产量为127.3mg/L，产量提高154%。在5L的发酵罐上进行优化过后，产量达到174.8mg/L，相比摇瓶发酵提高了37.3%，能够缓解目前工业生产他克莫司产量低的问题。
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公开(公告)号：CN113652383A
公开(公告)日：2021-11-16
申请号：CN202110727576.8
申请日：2021-10-19
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种产D‑泛酸的基因工程菌及应用，所述基因工程菌通过以下步骤构建获得：(1)以保藏号为CCTCC NO：M2018914的大肠杆菌为出发菌株，敲除aceF和mdh两个基因，获得菌株DPA02；(2)将来源于谷氨酸棒状杆菌的panB与panC基因，以及ppnk基因在菌株DPA02中过表达获得产D‑泛酸的基因工程菌。本发明产D‑泛酸的基因工程菌的D‑泛酸的产量在摇瓶发酵中提高至6.89g/L，提高了80％；同时，利用20％溶氧反馈补料结合甜菜碱添加的分批补料发酵策略使5L发酵罐中D‑泛酸积累量提高至68.3g/L，糖酸转化率达到0.36g/L。
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公开(公告)号：CN112852635A
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN202110063583.2
申请日：2021-01-18
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一株通过UV‑ARTP诱变方法筛选到的生长周期明显缩短的筑波链霉菌及其应用。所述菌株为筑波链霉菌ZJBN2001(Streptomyces tsukubensisZJBN2001)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2020年12月10日，保藏编号CCTCC NO：M 2020883，保藏地址为中国武汉，武汉大学，邮编430072。本发明的有益效果主要体现在：(1)本发明通过UV‑ARTP诱变的方法得到了一株生长周期明显缩短的菌株；(2)采用本发明方法诱变育种获得的筑波链霉菌ZJBN2001，相对原始菌株S1，他克莫司产量提高了100％，能够作为基因工程菌的原始菌株。(3)通过本发明方法可以得到发酵周期显著缩短的菌株，对于工业生产有着巨大的意义。
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公开(公告)号：CN110467645A
公开(公告)日：2019-11-19
申请号：CN201910593800.1
申请日：2019-07-03
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一种分离提取高纯度两性霉素B的方法。将烘干含有两性霉素B的菌丝体投入萃取罐并加入甲醇和盐酸水溶液调至PH＝3.0溶解两性霉素B，抽滤得到两性霉素B的提取液并过膜除去热源和大分子物质，然后在两性霉素B提取液中加入水和碱液调至PH＝6.0使其结晶沉淀，过滤得沉淀并干燥后获得高纯度两性霉素B固体。本发明采用固液分离去除发酵液中的杂质，提高了产品质量。通过超滤膜过滤热源和大分子物质和杂蛋白后进一步去除杂质，提高净化液质量。最后通过洗涤再次去除杂质，从而获得高纯度产品。所得产品颜色为浅黄色，纯度高，两性霉素B产品纯度为93％以上。
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