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公开(公告)号：CN107988194A
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201711350235.3
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的L-天冬氨酸α-脱羧酶突变体及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第56位谷氨酸突变成丝氨酸。本发明得到的突变体在大肠杆菌中表达，经过对纯酶的酶活测定，突变酶E56S的酶活相对原始酶BsADC提高了55％，并且用水作为溶剂进行的产β丙氨酸实验，可以实现8h产215gβ丙氨酸，且其转化率为94％。本发明表明56位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN107955805A
公开(公告)日：2018-04-24
申请号：CN201711323996.X
申请日：2017-12-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种稳定性提高的NADH氧化酶及其在乙偶姻生产中的应用，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的氨基酸的基础上，将第65位丙氨酸突变成半胱氨酸。本发明得到的突变体酶60度的半衰期(t1/2)较突变期提高了1.9倍。本发明表明65位氨基酸残基突变成半胱氨酸与天然NADH氧化酶的125位半胱氨酸残基形成正确的二硫键从而提高了酶的稳定性，加强了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN106636160A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201611010801.1
申请日：2016-11-17
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N15/70 , C12N9/0073 , C12N2800/101 , C12P33/02 , C12Y114/13054
Abstract: 一种利用重组Escherichia coli全细胞转化AD生成ADD的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明首先获得新金色分枝杆菌中3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶(KSDD)的基因扩增，然后利用pET28a质粒，实现了该基因在模式菌株大肠杆菌BL21中的过量表达。本发明构建以4‑AD为底物全细胞转化为方法的高产ADD的大肠杆菌工程菌株，对该菌株的酶活力及发酵性能进行研究发现3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的活力较出发菌株有了明显提高，以0.1％(w/v)4‑AD为底物，全细胞转化10h，底物摩尔转化率达到76.5％，是出发菌株相对转化率的25倍。本发明为微生物一步发酵法生产ADD的工业化提供了有益的指导。
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公开(公告)号：CN106520649A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201610979535.7
申请日：2016-11-08
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0006 , C12P7/18 , C12Y101/01027 , C12Y101/01028
Abstract: 本发明公开了一种利用钝齿棒杆菌全细胞转化葡萄糖合成2,3-丁二醇的方法，属于基因工程领域。本发明将来源于枯草芽孢杆菌alsSD基因转化到钝齿棒杆菌Corynebacterium crenatum SDNN403中，同时敲除其乳酸脱氢酶基因(ldh)，构建C.crenatumΔldh/pXMJ19-alsSD。基于获得的基因工程菌，全细胞转化100g/L葡萄糖合成2,3-丁二醇，产量达到28±1.1g/L，摩尔转化率达到理论值的57％。该菌在利用廉价葡萄糖一步法转化生产2,3-丁二醇方面有一定的工业化潜力。
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公开(公告)号：CN106282080A
公开(公告)日：2017-01-04
申请号：CN201610654331.6
申请日：2016-08-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种新金色分枝杆菌来源的甾酮C27-单加氧酶及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过基因敲除及加强表达的方法，在新金色分枝杆菌中筛选到甾醇边链降解过程中关键酶SMO的三个同工酶。将其分别在高产雄甾二烯二酮(ADD)的新金色分枝杆菌中加强表达，ADD产量得到明显提高，其中SMO2的效果最明显。通过过量表达SMO2，ADD最终产量从5.2g/L提高到7.3g/L。本发明为微生物发酵法提高ADD产量的工业化提供了有益的指导。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106191190A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610576782.2
申请日：2016-07-20
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P33/02 , C12N9/0065 , C12Y111/01006
Abstract: 一种消除过氧化氢提高雄甾二烯二酮产量的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明首先获得短小芽孢杆菌中过氧化氢酶(CAT)的基因扩增，然后利用pMA5-ksdd质粒，实现了CAT与KSDD在模式菌株枯草芽孢杆菌168中的共表达。本发明构建以4-AD为底物全细胞转化为方法的高产ADD的枯草芽孢杆菌工程菌株，对该菌株的酶活力及发酵性能进行研究发现3-甾酮-△1-脱氢酶的活力较出发菌株有了明显提高，以0.3％(w/v)4-AD为底物，全细胞转化10h，最终底物摩尔转化率几乎能达到100％，ADD的产量最终达到2.86g/L，比原始菌提高了约4.4倍。本发明为微生物一步发酵法生产ADD的工业化提供了有益的指导。
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公开(公告)号：CN105331650A
公开(公告)日：2016-02-17
申请号：CN201510817621.3
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明是一种串联甘油脱氢酶及L-氨基酸脱氢酶重组大肠杆菌用于联产α-氨基丁酸和二羟基丙酮的方法。本发明在于：将甘油脱氢酶基因与L-氨基酸脱氢酶基因构建重组共表达载体并将其转化至基因工程菌大肠杆菌内。同时构建好表达L-苏氨酸脱氨酶的重组大肠杆菌。高效共表达甘油脱氢酶及L-氨基酸脱氢酶于大肠杆菌中可以促进辅因子在菌体胞内的循环，不需要添加任何外源辅因子，利用该辅因子循环再生系统可以利用廉价底物L-苏氨酸及甘油联产高附加值的α-氨基丁酸和二羟基丙酮，该转化过程简单快捷，成本低廉。在5L发酵罐中该方法所得的α-氨基丁酸和二羟基丙酮产量分别可达41.2g/L及38.2g/L，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
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公开(公告)号：CN104894078A
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201510252442.X
申请日：2015-05-18
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0059 , C12Y110/03001
Abstract: 本发明涉及通过基因工程改造获得的链霉菌酪氨酸酶。本发明所述的一种定点突变改造的基因工程酪氨酸酶，其特征在于所述定点突变的基因工程链霉菌酪氨酸酶氨基酸序列相对于天然的链霉菌酪氨酸酶氨基酸序列的第7位谷氨酰胺突变为赖氨酸，第234位甘氨酸突变为脯氨酸。本发明所述的基因工程链霉菌酪氨酸酶最适温度相对于天然的链霉菌酪氨酸酶提高了10℃，在60℃下的半衰期提高了3倍，为其高效合成黑色素奠定了基础。
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公开(公告)号：CN104789538A
公开(公告)日：2015-07-22
申请号：CN201510146329.3
申请日：2015-03-30
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/1044 , C12P13/04 , C12Y203/02013
Abstract: 一种利用分批添加双底物的方法对重组pMA5-ggt/Bacillus.subtilis分泌的γ-谷氨酰转肽酶催化L-谷氨酰胺和乙胺生成L-茶氨酸的工艺进一步优化，属于发酵工程和酶工程领域。本发明采用前期工作构建的分泌γ-谷氨酰转肽酶的枯草芽孢杆菌，对菌株进行发酵罐培养。浓缩上清粗酶液，应用于茶氨酸的转化。在此基础上，通过分批添加底物实现对转化过程的进一步调控，在含60U/mL酶液的反应体系中，每隔2个小时向其中添加底物谷氨酰胺和乙胺，谷氨酰胺的添加量固定在20mM，供体受体比例控制在1：12时，pH调整为10，18小时后可得到茶氨酸164.2mM，谷氨酰胺转化率达到91.2％。该方法具有操作简单，成本低，茶氨酸产量高，底物转化率高等优点，有利于工业放大生产。
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公开(公告)号：CN102816787B
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201210210440.0
申请日：2012-06-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板，扩增得到编码α-乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)的基因saald，将其克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a上，在E.coli BL21中用IPTG诱导表达，利用表达载体pET-28a上的6·His-Tag标签，选用Ni柱亲和层析纯化表达具有活性的α-乙酰乳酸脱羧酶。粗酶液的比酶活为56U/mg，纯化后比酶活达到469.85U/mg，纯化倍数达8.36倍，回收率为87.65％。
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