公开(公告)号：CN102899345A

公开(公告)日：2013-01-30

申请号：CN201210345246.3

申请日：2012-09-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  刘义 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  周月涵

IPC: C12N15/64

Abstract: 本发明公开了一种快速高效构建两点突变重组质粒的方法，是采用是把两个突变点分别设计在两个特异性引物片段上，通过一步PCR获得含两点突变的重组质粒的方法，属于基因克隆技术领域。本发明方法操作简单，具有非常高的效率和成功率。

公开(公告)号：CN102830189A

公开(公告)日：2012-12-19

申请号：CN201210347439.2

申请日：2012-09-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  石增秀 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  荣瑶

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/34

Abstract: 本发明公开了一种L-天冬氨酸α-脱羧酶活性的HPLC测定方法，生物工程技术领域。该方法简单有效，建立的苯基异硫氰酸酯(PITC)衍生氨基酸的高效液相色谱分析的方法，在紫外254nm处检测，分析速度快，灵敏度高。

公开(公告)号：CN102676438A

公开(公告)日：2012-09-19

申请号：CN201210189014.3

申请日：2012-06-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 王正祥 ,  田康明 ,  周丽 ,  沈微

IPC: C12N1/20 ,  C12P7/50 ,  C12R1/19

Abstract: 一株产α-酮戊二酸的菌株及用其发酵生产α-酮戊二酸的方法，属于微生物基因工程技术领域。本重组菌命名为大肠杆菌（Escherichiacoli）B0013-090A，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO：M2012173，该菌株由大肠杆菌（Escherichiacoli）B0013-070B（保藏编号CCTCCNO：M2012071）经基因工程改造获得。用其动态调控发酵生产α-酮戊二酸，发酵36~48h产α-酮戊二酸水平达到9%，且所产α-酮戊二酸化学纯度达到95%以上。该工艺以葡萄糖或淀粉、糖蜜或生物柴油副产甘油为原料，工业化生产α-酮戊二酸，其使用价值非常巨大。本发明发酵培养基简单清洁，既有利于降低生产成本，也有利于简化后提取步骤获得高品质产品。操作工艺简单易行，有利于在工业化规模生产中推广使用。

公开(公告)号：CN102618478A

公开(公告)日：2012-08-01

申请号：CN201210102731.8

申请日：2012-04-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 王正祥 ,  周丽 ,  田康明 ,  沈微

IPC: C12N1/21 ,  C12P7/56 ,  C12R1/19

Abstract: 一株产D-乳酸动态调控重组菌及用其制备D-乳酸的方法，属于微生物基因工程技术领域。本重组菌命名为大肠杆菌（Escherichiacoli）B0013-070B，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO：M2012071。该菌株其基因组中乳酸脱氢酶基因启动子ldhAp被替换为培养环境/营养因素控制型启动子。利用该重组菌，在25~50℃条件下分阶段发酵28~40h，产D-乳酸水平达12.5%；光学纯度达99.9%，化学纯度达98.4%。本发明对D-乳酸高产菌B0013-070染色体上的D-乳酸脱氢酶编码基因的表达进行动态调控，使得D-乳酸的生产过程仅需改变发酵温度即可控制，达到以葡萄糖为原料高效合成D-乳酸的目的。本发明经简单修改后，可用于其它工业上重要的微生物代谢产物的生产。

公开(公告)号：CN119799529A

公开(公告)日：2025-04-11

申请号：CN202411949177.6

申请日：2024-12-27

Applicant: 江南大学

Inventor： 杨海泉 ,  陈献忠 ,  陈玲玲 ,  纪堂冰 ,  沈微 ,  夏媛媛 ,  曹钰 ,  周丽

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/53 ,  C12N15/81 ,  C12N15/90 ,  C12P7/02 ,  C12R1/74

Abstract: 本发明公开了高产(‑)‑α‑红没药醇的热带假丝酵母工程菌及其构建方法，属于微生物技术领域。本发明构建了底盘细胞热带假丝酵母DC04‑WG04‑2，并在此基础上表达了酿酒酵母来源的过氧化氢酶的基因Cat2和3‑羟基‑3‑甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶的基因ERG10，并用PEX15基序锚定在过氧化物酶体表面进行共表达；进一步敲除基因ADH1、GPD1基因与GPD2基因，减少乙醇的积累，减少甘油的产生。本发明还通过优化发酵条件，使重组热带假丝酵母的(‑)‑α‑红没药醇产量达到了461.7mg/L。本发明的制备方法具有成本低、效率高、操作简易、前景广等特点。

公开(公告)号：CN119662500A

公开(公告)日：2025-03-21

申请号：CN202411808578.X

申请日：2024-12-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈献忠 ,  是徐蕾 ,  夏媛媛 ,  李彩美 ,  华月婷 ,  沈微 ,  杨海泉 ,  周丽

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12P7/22 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种从头合成羟基酪醇的菌株及其应用，属于生物技术领域。本发明提供的重组大肠杆菌E.coli HTΔ‑glk能够实现将葡萄糖和甘油转化为羟基酪醇，生产羟基酪醇的产量可高达4.27g/L，是采用YMGRH1D1发酵生产羟基酪醇的产量的3.62倍，并且在发酵过程中无需添加诱导剂；因此本发明的原材料廉价易得，无危害人体健康的添加剂、重金属和抗生素，为后期的产物提纯奠定良好的基础，更能够达到商业应用的要求。

公开(公告)号：CN118547021A

公开(公告)日：2024-08-27

申请号：CN202410621841.8

申请日：2024-05-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 周丽 ,  陈献忠 ,  李金阳

IPC: C12P13/06 ,  C12N1/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了重组大肠杆菌利用不同碳源发酵合成L‑丙氨酸的方法，属于生物工程领域。本发明首先提供了以葡萄糖为唯一碳源，通过在特定菌浓在诱导合成L‑丙氨酸的方法，可使L‑丙氨酸产量达到167.7g/L。本发明还提供了利用低成本碳源进行L‑丙氨酸合成的发酵方法。利用甘油为唯一碳源，L‑丙氨酸产量达到73.2g/L。利用蔗糖为唯一碳源，L‑丙氨酸产量达到152.6g/L，转化率为0.88g/g蔗糖。利用玉米淀粉为唯一碳源，L‑丙氨酸产量为121.3g/L，转化率为0.83g/g淀粉。本发明提供的方法有利于提高L‑丙氨酸产量、降低发酵合成成本，对工业应用具有借鉴意义。

公开(公告)号：CN114250217B

公开(公告)日：2023-11-28

申请号：CN202111478385.9

申请日：2021-12-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  韩来闯 ,  刘欣悦 ,  崔文璟 ,  程中一 ,  刘中美 ,  周丽 ,  郭军玲

IPC: C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/12 ,  C12P7/40 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种理性设计提升腈水解酶活性的方法及应用，属于酶工程领域。本发明通过腈水解酶的晶体结构进行分析，通过底物对接确定了催化口袋附近与催化活性相关的位点，对每个点做饱和突变后，通过两种计算方法Rosetta‑Cartesian和FEP对获得的突变体进行稳定性和结合自由能分析，对满足要求的突变体做酶活测定。将单点突变酶活高于野生型的位点进行组合突变再进行计算，最终获得符合要求的突变体进行酶活测定。通过这种方法我们最后获得了两个单点突变体，比酶活为野生型的2、1.5倍，组合突变体F64YW170G比酶活为野生型的4.56倍。

公开(公告)号：CN114277022B

公开(公告)日：2023-08-08

申请号：CN202111465494.7

申请日：2021-12-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  程中一 ,  印猛 ,  张苇苗 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯 ,  郭军玲

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高活性和高热稳定性的腈水合酶突变体，属于生物工程技术领域。本发明对腈水合酶氨基酸基序中β亚基上的第50位谷氨酸突变为亮氨酸得到突变体E50L，本发明提供的突变体E50L催化烟腈的比酶活提高到353.53±22.34U/mg，比野生型提高了5.83倍。在提高酶活的同时，突变体保持了Pt NHase热稳定性良好的优势且耐受性有一定的提高。兼具较高酶活、良好热稳定性以及底物耐受性的突变体的成功构建，增强了研究者对于理性设计方法改造蛋白提高酶活的信心，进一步推动后续Pt NHase的工业化生产应用。

公开(公告)号：CN115322981B

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202210399507.3

申请日：2020-11-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  郭军玲 ,  程中一 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种腈水合酶突变体及其在制备酰胺类化合物中的应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明提供的腈水合酶突变体Str.t NHase‑βL48D在65℃的半衰期大约是43分钟，相比其他NHase酶热稳定性有显著提高。采用本发明的技术方案，对于以烟腈、丙烯腈、苯甲腈、2‑氰基吡嗪腈、异丁腈、正戊腈、肉桂腈等腈类化合物为底物的反应，其底物耐受性得到了明显的提高。