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公开(公告)号：CN102654505A
公开(公告)日：2012-09-05
申请号：CN201210151531.1
申请日：2012-05-16
申请人： 江苏省原子医学研究所 , 江南大学
IPC分类号： G01N33/68
摘要： 一种检测白细胞介素-2-人血清白蛋白融合蛋白的时间分辨荧光免疫分析法及其试剂盒，属于时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术领域。本发明配制的试剂盒，采用TRFIA检测IL-2-HSA，测定的基础是标记免疫反应。微孔板包被有抗IL-2的单克隆抗体，加入IL-2-HSA标准或样品，加入兔抗HSA抗体。反应后洗涤，没有连接的IL-2-HSA及抗体被洗涤除去，再加入Eu3+-羊抗兔抗体，标记免疫反应后再次洗涤，没有连接的Eu3+-羊抗兔抗体被洗涤除去。加增强液后，用时间分辨荧光仪测定其荧光强度cps，荧光强度与样品中的IL-2-HSA浓度成正比，对照标准曲线即可确定被测样品中IL-2-HSA的含量。本发明提供的检测IL-2-HSA试剂盒结构简单，使用方便、特异性强、测量范围宽、灵敏度高。
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公开(公告)号：CN101691595A
公开(公告)日：2010-04-07
申请号：CN200910184691.4
申请日：2009-08-28
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种新的重组毕赤酵母的发酵方法。在甘油生长重组毕赤酵母的基础上，采用脉冲式甲醇补料诱导重组蛋白的表达。该方法在甲醇流加控制时不需使用甲醇传感器，同时克服DO stat补料诱导过程中的甲醇浓度过低，也克服了恒速间歇式恒速流加诱导过程中由于补料速度过快而带来的甲醇蓄积和补料速度过低导致的甲醇浓度过低等缺点。采用脉冲式甲醇补料后，重组长效融合干扰素的表达量得到了很大程度的提高。
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公开(公告)号：CN101037477A
公开(公告)日：2007-09-19
申请号：CN200710020034.7
申请日：2007-02-08
申请人： 江南大学
摘要： 人血清白蛋白与人粒细胞集落刺激因子的融合蛋白的制备方法及产品，属于长效融合蛋白药物技术领域。本发明利用重叠PCR技术，将HSA基因cDNA和G－CSF cDNA进行拼接，中间不加入任何连接肽，得到的HSA－GCSF cDNA融合基因在宿主系统中进行表达，融合基因被整合到宿主的染色体中；本发明的融合蛋白包括与人血清白蛋白至少85％序列同源的第一区和与人粒细胞集落刺激因子至少85％序列同源的第二区，该融合蛋白可以在不改变融合蛋白特性的前提下，进行个别氨基酸残基的取代、缺失或加入；宿主系统可以是细菌、酵母、昆虫细胞、动物细胞、植物细胞等。本发明的融合蛋白在保持了人粒细胞集落刺激因子的生理特性的基础上延长其在体内的半衰期，在药学领域有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN102120979A
公开(公告)日：2011-07-13
申请号：CN201010580240.5
申请日：2010-12-09
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种新的提高重组蛋白的表达的方法。在正常重组毕赤酵母的工艺流程的基础上，加入微量的退黑激素可以大大提高重组蛋白的表达。该方法使得重组酵母菌高密度发酵时由于供氧不均衡等胁迫带来的酵母内部自由基积累得到降低，改善了高密度发酵过程中因自由基带来的对酵母本身的损伤，从而改善了酵母本身的生理状况。使用退黑激素后，重组蛋白的表达量得到了很大程度的提高。
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公开(公告)号：CN101063123B
公开(公告)日：2011-06-15
申请号：CN200710020890.2
申请日：2007-04-17
申请人： 江南大学
摘要： 人C-型利尿钠肽(CNP)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白的制备方法及产品，属于长效重组融合蛋白药物技术领域。本发明利用重叠PCR技术，将HSA cDNA和CNP cDNA进行拼接，中间不加入任何连接肽，得到的HSA-CNP cDNA融合基因被整合到宿主的染色体中，在宿主系统中进行表达。本发明的融合蛋白包括与人血清白蛋白至少85％序列同源的第一区和与人C-型利尿钠肽至少85％序列同源的第二区，该融合蛋白可以在不改变融合蛋白特性的前提下，进行个别氨基酸残基的取代、缺失或加入。本发明的融合蛋白在保持了人C-型利尿钠肽的生理特性的基础上延长其在体内的半衰期，改善其溶解度，在药学领域有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN102120966A
公开(公告)日：2011-07-13
申请号：CN201010580120.5
申请日：2010-12-09
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一株乳清酸核苷-5’-磷酸脱羧酶(ura3)缺陷型毕赤酵母(P.pastoris)X-33菌株的构建及利用，属于生物工程技术领域。该下程菌株P.pastoris X-33(Δura3)是通过采用同源重组敲除目的基因的方法而获得。该菌株可以利用URA3基因作为选择标记，构建各种工程菌株。而且，工程菌株构建时不要求载体携带的ura3基因来源于相同微生物种属。同时提供了一个对X33后续的工程化改造如糖基化改造提供了更好的平台菌株，具有非常大的潜在应用前景。
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公开(公告)号：CN101979576A
公开(公告)日：2011-02-23
申请号：CN201010503402.5
申请日：2010-10-12
申请人： 江南大学 , 中国人民解放军第四军医大学
IPC分类号： C12N15/16 , C12N15/70 , C07K14/575
摘要： 本发明公开了一种血管钠肽(VNP)的制备方法，为克服传统VNP化学合成法价格昂贵，生物活性低等缺陷，本发明在制备VNP过程中，用PCR技术扩增目的基因，以pGEX-4T-1为载体质粒酶切后定向插入VNP目的基因后形成重组质粒，以大肠杆菌BL21(DE3)作为表达菌株，以GST亲和柱分离目的蛋白，这种方法既能获得较高表达量的蛋白，又能通过亲和性得到较纯的蛋白。运用本发明技术获得的VNP比起化学合成法具有更好的生物学活性，且成本较化学合成法要低，为VNP进一步通过生物法生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN1831124A
公开(公告)日：2006-09-13
申请号：CN200610038791.2
申请日：2006-03-10
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N15/09 , C12N15/62 , C12N15/21 , C12N15/14 , C07K19/00 , C07K14/56 , C07K14/765 , C12N1/19
摘要： 人α2干扰素与人血清白蛋白的融合蛋白的制备方法及产品，属于长效融合蛋白药物技术领域。本发明利用重叠PCR技术，连接IFNα2 cDNA和HSA cDNA，中间不加入任何连接肽，得到的HSA－IFNα2 cDNA融合基因被整合到宿主的染色体中进行表达；本发明的融合蛋白包括与人α2干扰素至少85％序列同源的第一区和与人血清白蛋白至少85％序列同源的第二区，两区直接连接，中间不加入任何连接肽，该融合蛋白可以在不改变融合蛋白特性的前提下，进行个别氨基酸残基的取代、缺失或加入；宿主表达系统可以是细菌、酵母、昆虫细胞、动物细胞、植物细胞等。本发明的融合蛋白在保持了人α2干扰素的生理特性的基础上延长其在体内的半衰期，在药学领域有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN102775492A
公开(公告)日：2012-11-14
申请号：CN201210001319.7
申请日：2012-01-05
申请人： 江南大学
IPC分类号： C07K14/635 , C12Q1/68 , C12Q1/02 , A61K38/29 , A61P19/10
摘要： 本发明“一种高活性人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白及其活性检测方法”属于蛋白质药物领域。本发明通过对天然人甲状旁腺激素(1-34)的第25、26、27位氨基酸进行置换，发现了一种高活性的人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白。本发明还建立了一种快速的稳定的活性检测方法，可以在3-10天内对一种或多种蛋白质或多肽类药物进行活性检测，并与人甲状旁腺激素标准品进行比较。活性检测结果显示上述人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白的活性优于标准品，因此有望成为疗效更强，副作用更小的骨质疏松治疗药物。
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公开(公告)号：CN102120967A
公开(公告)日：2011-07-13
申请号：CN201010580258.5
申请日：2010-12-09
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一株α-1，6甘露糖转移酶基因(och1)缺陷型毕赤酵母(P.pastoris)X-33菌株的构建及利用，属于生物工程技术领域。该工程菌株P.pastoris X-33(Δoch1)是通过采用双交换同源重组敲除目的基因的方法，用URA3基因作为选择标记，敲除P.pastoris X-33(Δura3)的α-1，6甘露糖转移酶基因(och1)，获得OCH1基因敲除的P.pastoris X-33(Δoch1)菌株。该菌株提供了一个对蛋白低N-糖基化修饰的毕赤酵母表达系统，也为进一步的糖基化改造提供了良好的基础。具有非常大的潜在应用前景。
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