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公开(公告)号：CN114015634B
公开(公告)日：2022-12-02
申请号：CN202111299764.1
申请日：2021-11-04
申请人： 江南大学 , 淮北创新生物新材料有限责任公司
摘要： 本发明涉及一种生物工程技术领域，尤其涉及一种高产琥珀酸的重组大肠杆菌及其构建方法和应用。其中，高产琥珀酸的重组大肠杆菌是将编码大肠杆菌中甲酸脱氢酶的基因fdhF替换为来自假丝酵母的甲酸脱氢酶基因fdh1，并上调耐酸胁迫和耐渗透压胁迫的外膜蛋白调节器OmpR。本发明采用CRISPR‑cas9基因编辑技术将宿主菌FMME‑N‑5中编码甲酸脱氢酶基因fdhF替换为假丝酵母的甲酸脱氢酶基因fdh1，并运用RBS序列和启动子策略上调耐酸胁迫和耐渗透压胁迫的关键外膜蛋白调节器OmpR，所得到的重组大肠杆菌没有抗性，耐渗透压并可高效生产琥珀酸。
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公开(公告)号：CN114015634A
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN202111299764.1
申请日：2021-11-04
申请人： 江南大学 , 淮北创新生物新材料有限责任公司
摘要： 本发明涉及一种生物工程技术领域，尤其涉及一种高产琥珀酸的重组大肠杆菌及其构建方法和应用。其中，高产琥珀酸的重组大肠杆菌是将编码大肠杆菌中甲酸脱氢酶的基因fdhF替换为来自假丝酵母的甲酸脱氢酶基因fdh1，并上调耐酸胁迫和耐渗透压胁迫的外膜蛋白调节器OmpR。本发明采用CRISPR‑cas9基因编辑技术将宿主菌FMME‑N‑5中编码甲酸脱氢酶基因fdhF替换为假丝酵母的甲酸脱氢酶基因fdh1，并运用RBS序列和启动子策略上调耐酸胁迫和耐渗透压胁迫的关键外膜蛋白调节器OmpR，所得到的重组大肠杆菌没有抗性，耐渗透压并可高效生产琥珀酸。
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公开(公告)号：CN117776899A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311556933.4
申请日：2023-11-21
申请人： 淮北创新生物新材料有限责任公司 , 江南大学
IPC分类号： C07C51/02 , C07C51/42 , C07C51/43 , C07C51/47 , C07C51/487 , C07C55/10 , C12P7/46 , C12N1/00 , C12R1/19
摘要： 本发明涉及一种从含有琥珀酸镁的发酵液中纯化琥珀酸的方法，包括以下步骤：对含琥珀酸的发酵液进行菌体自聚集去除菌体，对去除菌体的发酵液进行微滤处理，对得到的发酵液进行超滤处理；对超滤得到的发酵液进行脱色处理，并过滤；将过滤得到的发酵液通过填充有H+形式的阳离子交换树脂；结晶琥珀酸以形成中间晶体，并将中间晶体与发酵液分离，将分离后的发酵液再循环至超滤步骤；回收中间晶体，进行复溶脱色，结晶并离心，将分离后的处理液再循环至结晶步骤，并回收纯化后的琥珀酸。
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公开(公告)号：CN117683759B
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202311752427.2
申请日：2023-12-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体及产原儿茶酸的重组大肠杆菌，突变体ApAroZR363A的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，通过出发序列的第363位精氨酸突变为丙氨酸得到；本发明还基于该突变体构建了一株重组大肠杆菌，具体地：通过阻断碳流从3‑脱氢莽草酸流向下游莽草酸，敲除了大肠杆菌中3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE成功构建了一株高产3‑脱氢莽草酸的底盘菌株，并引入具有抵抗产物抑制的高活性3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体ApAroZR363A在底盘菌株中构建原儿茶酸生物合成路径，最终建立了一个高效生物合成原儿茶酸的大肠杆菌重组菌株。
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公开(公告)号：CN117802080A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202311735618.8
申请日：2023-12-15
摘要： 本发明公开了C3‑差向异构酶突变体及在生产D‑阿洛酮糖中的应用，属于生物工程领域。本发明利用结晶的方法得到了C3‑差向异构酶KeDt3e的晶体并解析了其三维结构，并通过对关键区域的氨基酸突变，获得了具有高底物选择性、热稳定性及催化效率的酶突变体。以表达KeDt3e M5的重组菌株作为生物催化剂进行全细胞转化，在2.5L发酵罐下，转化2h，D‑阿洛酮糖产量可达167.7g/L。该生产过程简单、原料易得、杂质少，具有较好的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN117683759A
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202311752427.2
申请日：2023-12-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体及产原儿茶酸的重组大肠杆菌，突变体ApAroZR363A的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，通过出发序列的第363位精氨酸突变为丙氨酸得到；本发明还基于该突变体构建了一株重组大肠杆菌，具体地：通过阻断碳流从3‑脱氢莽草酸流向下游莽草酸，敲除了大肠杆菌中3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE成功构建了一株高产3‑脱氢莽草酸的底盘菌株，并引入具有抵抗产物抑制的高活性3‑脱氢莽草酸脱水酶突变体ApAroZR363A在底盘菌株中构建原儿茶酸生物合成路径，最终建立了一个高效生物合成原儿茶酸的大肠杆菌重组菌株。
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公开(公告)号：CN114214293B
公开(公告)日：2023-11-14
申请号：CN202111599580.7
申请日：2021-12-24
申请人： 无锡阿科力科技股份有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明公开了一种恶臭假单胞菌细胞色素P450环氧酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过对来源于恶臭假单胞菌的细胞色素P450环氧酶进行改造，克服了之前野生型的酶因为过氧化氢逸散和酸醇对质子转化率低而导致的催化效率低的局限，最终得到最佳突变体Q6(PpCytPA250V/T255E/S296V/A297P/P298N)，以此突变体为催化剂，以降冰片烯为底物，转化后10mL规模摇瓶产量为72.05g/L，摩尔产率为61.59％，单位菌体生产环氧降冰片烷的能力为3.6g/g，几乎不产生羟基化副产物。因此大大降低了之前的高菌体量以及繁复的后期分离纯化过程，为环氧降冰片烷的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113929787B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202111255656.4
申请日：2021-10-27
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种调控生物被膜改善莽草酸生产性能的策略，属于生物工程技术领域。本发明通过分子生物学手段，利用生物被膜自组装系统，将异源目的蛋白固定在细胞生物被膜上来改善接触面积，提高目的蛋白的表达，有效提高底物淀粉的利用效率，使得发酵体系中莽草酸浓度提高。该方法设计简单，系统元件少，菌株生长负荷低，对菌株的生长情况和存活率没有显著影响。利用本发明构建的莽草酸生产菌株为发酵菌株，以淀粉为底物进行发酵生产，莽草酸产量和生产强度分别提高到47.5g/L和0.66g/L/h，具有较好的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN113025533B
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202110424879.2
申请日：2021-04-20
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一株产丁酸的芽孢杆菌菌株筛选及其应用，属于生物工程技术领域。本发明的巨大芽孢杆菌FMME ZK001具有较好的传代稳定性；在摇瓶水平上发酵生产丁酸产量达10.4g/L，本发明的发酵生产丁酸的方法工艺操作简单易行、培养基成本低廉，适用于工业化生产。丁酸作为一种重要的短链脂肪酸，由于具有替代抗生素，增强动物机体免疫力，维护胃肠道内有益微生物菌群，促进动物消化能力等特点，对饲料发酵具有重要影响。该菌株可以用于饲料发酵产生丁酸，具有较强的产丁酸能力。
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公开(公告)号：CN112280725B
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202011185169.0
申请日：2020-10-29
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种高效生产琥珀酸的重组大肠杆菌及其构建方法。本发明敲除E.coli FMME‑N‑2产琥珀酸菌株的副产物编码基因得到菌株E.coli FMME‑N‑5（ΔfocA‑pflB‑ΔldhA‑Δpta‑ackA）；过表达来自产琥珀酸放线杆菌磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶pck和施式芽孢杆菌亚磷酸酯脱氢酶ptxD，筛选获得高效生产琥珀酸的工程菌；此工程菌株在7.5L发酵罐上采用两阶段发酵策略，发酵96 h，琥珀酸产量达到了137 g/L,琥珀酸得率达到1 g/g葡萄糖、生产强度为1.43 g/L/h，副产物乳酸、甲酸不积累，乙酸1‑2 g/L，具有一定的工业化生产潜力。
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