一种高效高纯度制备成熟DC细胞的方法

    公开(公告)号:CN107299083A

    公开(公告)日:2017-10-27

    申请号:CN201710756239.5

    申请日:2017-08-29

    发明人: 李新峰 周雁冰

    IPC分类号: C12N5/0784

    摘要: 本发明公开了一种高效高纯度制备成熟DC细胞的方法,包括以下步骤:步骤1:从外周血中分离出外周血单个核细胞和自体血清;步骤2:采用免疫磁珠负向分选法从外周血单个核细胞中分离出单核细胞;步骤3:将分离出的单核细胞分化成未成熟的DC细胞:向单核细胞的无血清基础培养基内加入自体血清、GM-CSF和IL-4后进行培养,得到未成熟的DC细胞;步骤4:促使未成熟的DC细胞成熟:向未成熟的DC细胞的无血清基础培养基内加入GM-CSF、IL-4、IL-1β、TNF-α、IL-6、前列腺素E2和R848后继续培养,得到成熟的DC细胞。本发明所制得免疫细胞中DC细胞的比例在99%以上,成熟DC细胞的比例在98%以上。

    一种联合Tlr4和Tlr7激动剂共刺激扩增人NK细胞的方法

    公开(公告)号:CN106434553A

    公开(公告)日:2017-02-22

    申请号:CN201610552689.8

    申请日:2016-07-13

    IPC分类号: C12N5/0783

    摘要: 本发明提供一种联合Tlr4和Tlr7激动剂共刺激扩增人NK细胞的方法,本发明技术中NK细胞是从外周血分离获得的高活性淋巴细胞群、体外培养体系加入一系列细胞因子、Tlr4a(MPLA)和Tlr7a(GD),通过这种鸡尾酒式培养,NK细胞CD3-CD56+)得到活化和大量扩增,达到应用于临床治疗肿瘤的水平。通过本发明所制备的NK细胞与普通NK细胞比较,所获得NK细胞对肿瘤靶细胞杀伤效果明显高于常规。本方法可在体外培养条件下获得大量、安全及杀伤活性强的NK细胞,同时具有制备成本低廉、工序简单、条件易控、对设备的要求较低、易于规模化生产等优势。本发明还提供了NK细胞体外制备的诱导培养体系。通过本发明所制备的NK细胞(Tlr4a-Tlr7a-NK),可用于癌症病人的治疗或者癌症高危人群的预防及抗病毒的治疗等。