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公开(公告)号：CN115418331B
公开(公告)日：2024-09-10
申请号：CN202211039610.3
申请日：2022-08-29
申请人： 新发药业有限公司
摘要： 本发明涉及一种产青霉素G酰基转移酶自诱导培养基及其应用。配方为：蛋白胨5～20g/L、酵母粉5～20g/L、硫酸铵2～8g/L、磷酸氢二钠5～15g/L、磷酸二氢钾2～6g/L、硫酸镁0.5～2.5g/L、甘油6～20g/L、葡萄糖2～5g/L、乳糖0～10g/L。本发明还提供了利用该自诱导培养基发酵生产青霉素G酰基转移酶的方法。使用本发明提供的产青霉素G酰基转移酶自诱导培养基诱导培养含有T7启动子和青霉素G酰基转移酶表达基因的大肠杆菌时，乳糖的诱导能力相对较弱，能够避免前体蛋白在细胞质中的过度积累，给翻译后修饰过程以充足的时间，从而减少包涵体的形成，能够明显提高青霉素G酰基转移酶发酵酶活，达到52U/mL。
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公开(公告)号：CN118516440A
公开(公告)日：2024-08-20
申请号：CN202410652307.3
申请日：2024-05-24
申请人： 珠海联邦制药股份有限公司 , 联邦生物科技(珠海横琴)有限公司
IPC分类号： C12P35/04 , C12N11/089 , C12N9/84
摘要： 本发明公开了一种固定化青霉素G酰化酶及其催化合成头孢克洛的方法。本发明经过多种载体的筛选，选到合适的载体，经固定化后得到固定化青霉素G酰化酶，其不仅具有高酶活，且可多次循环使用，还能保持较好的酶活；同时采用的载体粒径大小合适，使得固定化青霉素G酰化酶作为催化剂使用时，便于从反应液中分离，进而可循环使用。同时，采用特定载体制备的固定化青霉素G酰化酶制备头孢克洛，不仅工艺简单，固定化青霉素G酰化酶便于分离，而且反应过程中无需添加晶种，即可获得高收率、高纯度的头孢克洛。
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公开(公告)号：CN118185912A
公开(公告)日：2024-06-14
申请号：CN202410290555.8
申请日：2024-03-14
申请人： 河北科技大学
摘要： 本发明公开了一种源自于副球菌Paracoccussp.KDSPL‑02的酰胺酶及其突变体，属于生物化学与酶催化技术领域，所述野生型酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述酰胺酶突变体Pm‑F274A的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述酰胺酶突变体Pm‑F274A/W404G的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明还提供了所述的酰胺酶及其突变体的催化性能，该酶能够高效催化青霉素G等常见抗生素水解和半合成抗生素的合成。
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公开(公告)号：CN118028274A
公开(公告)日：2024-05-14
申请号：CN202410168421.9
申请日：2024-02-06
申请人： 浙江乐普药业股份有限公司 , 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种酰化酶突变体及其应用，本发明对对来自于巨大普里斯特氏菌(Priestia megaterium)的酰化酶的氨基酸序列的第224位、第339位、第467位、第474位、第494位、第518位进行单突变或多点联合突变获得了用于催化合成(S)‑氯吡格雷中间体(S)‑邻氯苯甘氨酸的高活性酰化酶突变体，其酶活力较野生型酰化酶提高了1.5‑12.2倍，解决了现有技术中因酰化酶酶活较差而导致(S)‑邻氯苯甘氨酸合成产量不理想的问题，满足生物酶法拆分制备(S)‑邻氯苯甘氨酸的大规模工业化生产需求，具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN111549022B
公开(公告)日：2023-05-30
申请号：CN202010454547.4
申请日：2020-05-26
申请人： 兰州理工大学
摘要： 本发明一种固定化青霉素G酰化酶及其制备方法，属于固定化酶技术领域。所述固定化青霉素G酰化酶为具有纳米囊性结构的Fe3O4@PTA‑PGA/PDA，是由Fe3O4 NPs固定化PGA和包覆在所述Fe3O4 NPs固定化PGA表面的PDA涂层制成，所述Fe3O4 NPs的表面负载有PTA。制备方法为：用TA对Fe3O4 NPs进行表面修饰，制备得Fe3O4@PTA NPs；将所述Fe3O4@PTA NPs作为载体对PGA进行固定化，制备得Fe3O4@PTA‑PGA NPs；用DA对所述Fe3O4@PTA‑PGA NPs进行表面包覆，即得。本发明的固定化青霉素G酰化酶具有良好的pH稳定性和温度耐受性，且操作稳定性和重复利用率较好，具有很高的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN110106161B
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN201910385295.1
申请日：2019-05-09
申请人： 福建医科大学附属口腔医院
发明人： 黄晓宇
摘要： 本发明公开了青霉素酰化酶基因及其编码蛋白，所述青霉素酰化酶基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，该青霉素酰化酶基因的编码蛋白具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本发明的青霉素酰化酶在工业实际应用中具有良好的稳定性和活性。
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公开(公告)号：CN111500564B
公开(公告)日：2022-01-18
申请号：CN202010488868.6
申请日：2020-06-02
申请人： 南京工业大学
摘要： 本发明涉及青霉素G酰化酶突变体及其在酶法合成头孢孟多中的应用。通过半理性设计的酶工程改造技术对木糖氧化无色杆菌(Achromobacter xylosoxidans)PX02来源的青霉素G酰化酶进行突变，获得了一种反应活性更高，反应速率更快，转化率更好的PGA突变体。该PGA突变体对产物的水解活性大大降低，在产率达到最大值后，几乎不水解产物，具有广阔的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN113913416A
公开(公告)日：2022-01-11
申请号：CN202111199681.5
申请日：2021-10-14
申请人： 巢湖学院
摘要： 本发明公开一种粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的制备工艺，包括如下步骤：S1、取活化复壮后的粪产碱杆菌接种至盛装种子培养液的培养基中，培养得到种子液；S2、取种子液加入发酵培养液中，发酵得到发酵液；S3、将发酵液先在离心得到湿重菌体，再取湿重菌体悬浮于磷酸缓冲液中，再加入乙酸丁酯得到粗提取溶液，再将粗提取溶液分离提取得到初步酶液；S4、将初步酶液经冰浴、冰浴、超声破碎、离心得到粗酶液；S5、采用阴离子交换层析法，将S4中得到的粗酶液进一步提纯，得到纯酶。本发明通过在发酵液中添加微量元素溶液与基础盐溶液可提高AfPGA产率，同时在发酵液中添加苯乙酰苯基丁氨酸溶液与NIPAB溶液，刺激粪产碱杆菌合成AfPGA，提高AfPGA的活力与酶量。
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公开(公告)号：CN105087533B
公开(公告)日：2018-03-27
申请号：CN201510638013.6
申请日：2015-09-30
申请人： 湖南福来格生物技术有限公司
摘要： 本发明提供了一种青霉素G酰化酶的突变体及其制备方法和应用。通过非理性及半理性设计的酶工程改造技术对大肠埃希氏菌ATCC 11105来源的青霉素G酰化酶进行突变，获得了一种反应活性更高，反应速率更快，转化率更好，青霉素G浓度耐受性更强，底物残留更少，苯乙酸浓度耐受性更高的PGA突变体，同时对该突变体进行了重组表达、菌种构建、发酵培养以及固定化和应用制备6‑APA。本发明获得的PGA‑6突变体活力提高了102倍，底物青霉素G耐受浓度提高到30％，苯乙酸耐受浓度提高到20mmol/L。同时，固定化突变体PGA‑6应用于pH8.0，25℃条件下裂解25％浓度的青霉素G制备6‑APA的反应时间缩短到55分钟，底物转化率在98％以上，且连续使用600批次以上，活力无明显的损失，具有很好的操作稳定性。
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公开(公告)号：CN104845926B
公开(公告)日：2017-12-22
申请号：CN201510289464.3
申请日：2015-05-29
申请人： 南京工业大学
摘要： 本发明提供一种有利于重组蛋白胞外分泌的基因敲除大肠杆菌及其应用，涉及改造大肠杆菌遗传组基因领域。本发明有利于重组蛋白胞外分泌的基因敲除大肠杆菌，是通过敲除大肠杆菌中脂多糖合成的相关基因后获得。本发明还提供所述基因敲除大肠杆菌的构建方法及所述基因敲除大肠杆菌在制备胞外可溶性蛋白方面的应用。本发明基因敲除大肠杆菌的制备方法简单，效率高，成本低，敲除脂多糖合成的相关基因后增加了细胞外膜的通透性，从而显著增强重组蛋白的胞外分泌。
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