公开(公告)号：CN119162264A

公开(公告)日：2024-12-20

申请号：CN202411436744.8

申请日：2024-10-15

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  周俊平 ,  张政 ,  张博 ,  黄良刚 ,  郑裕国

IPC: C12P13/02 ,  C12N1/21 ,  C12N15/52 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及微生物发酵技术领域，公开了一种发酵生产D‑泛醇的方法。本申请通过对改造菌株DFC01菌株进行发酵生产D‑泛醇，并基于DFC01菌株，设计了适合其大规模发酵生产D‑泛醇的多阶段控制发酵工艺，通过发酵中期12～24小时期间，控制发酵液中葡萄糖的浓度处于0.5～2g/L范围，以及，通过发酵后期24小时至发酵结束期间，控制发酵液中溶氧浓度处于28％～40％范围，使得降低发酵过程中副产物积累的同时，提高D‑泛醇产量以及糖酸转化率。

公开(公告)号：CN118956845A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202411367088.0

申请日：2024-09-27

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 薛亚平 ,  胡裕升 ,  李树芳 ,  郑裕国

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种手性医药中间体的酶法合成，包括赖氨酸环化脱氨酶、突变体及生产L‑哌啶‑2‑甲酸的方法。本发明对来源于Streptomyces pristinaespiralis的野生型赖氨酸环化脱氨酶进行定点饱和突变，得到突变体A148M、A148L、A212V和A212R，其酶活分别为野生型赖氨酸环化脱氨酶酶活的188.4％、211.6％、139.6％和165.1％；并以赖氨酸环化脱氨酶或突变体作为生物催化剂，以L‑赖氨酸为主要底物，一步合成L‑哌啶‑2‑甲酸(L‑PA)，此合成方法高产率、高选择性、绿色环保、工艺简单易操作，有利于大规模生产。

公开(公告)号：CN118931871A

公开(公告)日：2024-11-12

申请号：CN202411351917.6

申请日：2024-09-26

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 郑仁朝 ,  李凡 ,  林超平 ,  边一舟 ,  郑裕国

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种高催化活性的多聚磷酸激酶突变体及其在合成谷胱甘肽中的应用。本发明提供了一种高催化活性的多聚磷酸激酶突变体，其特征在于：所述多聚磷酸激酶突变体是将SEQ ID NO:2所示氨基酸序列突变为下列之一：（1）将SEQ ID NO:2所示氨基酸序列第234位进行单突变；（2）将SEQ ID NO:2所示氨基酸序列第234位和第166位进行双突变；其中，编码所述SEQ ID NO:2所示氨基酸序列编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1。本发明提供的单位点突变多聚磷酸激酶突变体chPPK‑N234A以及双位点突变多聚磷酸激酶突变体chPPK‑N234A/K166D具有高活性，相较于野生型多聚磷酸激酶酶活分别提高了4.19倍和6.12倍。

公开(公告)号：CN118773153A

公开(公告)日：2024-10-15

申请号：CN202411062775.1

申请日：2024-08-05

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 薛亚平 ,  相超 ,  杨丹辰 ,  岑宇科 ,  江悦 ,  郑裕国

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/62 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种细胞色素P450单加氧酶突变体及其编码基因与应用。本发明将来源于Streptomyces tubercidicus R‑922的野生型细胞色素P450单加氧酶的氨基酸序列第212位、第324位、第349位、第426位、第427位、第431位进行单突变或多点联合突变，筛选得到细胞色素P450单加氧酶突变体相较野生型均有较大的提高。相较于野生型细胞色素P450单加氧酶，所述的细胞色素P450单加氧酶突变体在催化阿维菌素转化为4"‑羰基阿维菌素过程中具有更高的转化率，可有效加快阿维菌素制备4"‑羰基阿维菌素的进程，对甲维盐的工业化生产具有一定的意义。

公开(公告)号：CN118726431A

公开(公告)日：2024-10-01

申请号：CN202411072477.0

申请日：2024-08-06

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 张博 ,  唐蒙娜 ,  柳志强 ,  肖云颖 ,  吴杰 ,  朱溢 ,  郑裕国

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12N1/21 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种基于丙酮酸前体池累积的D‑泛酸高产工程菌构建方法，构建得到的D‑泛酸高产工程菌及其应用。本发明主要通过(1)利用柠檬酸合酶变体降低其对乙酰辅酶A的亲和力进一步削弱TCA循环碳通量，进一步使碳通量流向D‑泛酸的合成；(2)随后，为减少丙酮酸向乙酰辅酶A的转化，筛选出对丙酮酸低亲和力的丙酮酸脱氢酶突变体，突变体的引入有效促进了D‑泛酸的合成；最后(3)将更多的代谢通量引入泛解酸合成途径，增加主路径关键基因的拷贝数，得到一株无质粒、无抗生素添加用于高产D‑泛酸的工程菌株，使得D‑泛酸摇瓶效价达到6.68g/L。

公开(公告)号：CN118726300A

公开(公告)日：2024-10-01

申请号：CN202411046213.8

申请日：2024-08-01

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 薛亚平 ,  沈旭霞 ,  程峰 ,  熊能 ,  郑裕国

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种转氨酶突变体在制备草胺中间体中的应用。所述ω‑转氨酶突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第65位、第94位、第346位、第419位进行单点或多点联合突变获得。与野生型相比，突变体N346H、R419H、R419K、R419S相对酶活分别比野生型提高8、10、5.5、6.8倍。本发明转氨酶突变体以体前体1‑甲氧基‑2‑丙酮为底物，异丙胺为氨基供体，磷酸吡多醛为辅酶，生物催化制备高光学纯度的精二甲吩草胺中间体，即(S)‑1‑甲氧基‑2‑丙胺，该方法反应条件温和，产品光学纯度高，具有较好工业应用前景。

公开(公告)号：CN118599677A

公开(公告)日：2024-09-06

申请号：CN202410761332.5

申请日：2024-06-13

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 薛亚平 ,  邹树平 ,  陈晓敏 ,  郑裕国

IPC: C12N1/15 ,  C12N15/31 ,  C12N15/53 ,  C12N15/80 ,  C12P7/42 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种球孢白僵菌基因工程菌及其构建方法和应用，运用基因编辑技术，过表达底盘菌中的ProC基因、GluD基因、ALDH基因中的一种或多种，得到基因工程菌。本发明进一步强化球孢白僵菌生物膜发酵高产R‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸发酵过程中辅因子NADH合成相关酶的表达水平，可以提高球孢白僵菌生物膜发酵高产R‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸发酵的产量。本发明相比出发菌株，所有工程菌株中R‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸发酵周期缩短，产量得到了明显提升，避免了昂贵辅因子NADH的外源添加，适合于大规模工业化生产应用，有很大的推广应用的价值。

公开(公告)号：CN118531032A

公开(公告)日：2024-08-23

申请号：CN202410775092.4

申请日：2024-06-17

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  黄良刚 ,  陈媛媛 ,  周俊平 ,  逄爱萍 ,  张博 ,  郑裕国

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/52 ,  C12N15/53 ,  C12N15/60 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种高效生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的重组大肠杆菌、其构建方法及应用，并将其应用于发酵生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸，以克服现有技术中存在的O‑乙酰‑L‑高丝氨酸生产菌株在发酵生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸中的产量较低的问题。通过在菌株Escherichia coli HSC2的基因组中，利用过表达、敲除、回补等手段构建可高效生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的重组大肠杆菌，使经过改造后得到的性能最优的菌株在发酵生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸方面的水平相比于出发菌HSC2有明显提升，菌株摇瓶水平从0g/L提高到12.66g/L。因此，本发明提供的重组大肠杆菌具有重要的工业应用价值。

公开(公告)号：CN115058401B

公开(公告)日：2024-07-12

申请号：CN202210727421.9

申请日：2022-06-24

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  蔡雪 ,  刘思琦 ,  施雪 ,  金利群 ,  张博 ,  郑裕国

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种酮泛解酸羟甲基转移酶突变体、编码基因，含有编码基因的载体、基因工程菌及应用。所述突变体是利用基因工程技术对谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)来源的酮泛解酸羟甲基转移酶KPHMT基因进行定点突变，后导入表达宿主E.coli BL21(DE3)中得到。本发明的有益效果主要体现在：本发明得到了一系列对酮泛解酸羟甲基转移酶酶活有明显改变的酮泛解酸羟甲基转移酶突变体，相较野生型酮泛解酸羟甲基转移酶，本发明构建的酮泛解酸羟甲基转移酶突变体通过与野生型酶比较，酶活有所提高，优于现有报道的酮泛解酸羟甲基转移酶，可有效提高终产物D‑泛酸的产量，降低生产成本。

公开(公告)号：CN118291515A

公开(公告)日：2024-07-05

申请号：CN202410474369.X

申请日：2024-04-19

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 薛亚平 ,  沈其 ,  郑裕国

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/65 ,  C12N15/12 ,  C12N15/55 ,  C12N15/53 ,  C12N1/19 ,  C12P33/06 ,  C12P7/40 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明提供了一种基于光环境切换的诱导表达系统，包括PHpFMD启动子、EL222光响应组件；所述的EL222光响应组件包括EL222分子表达序列、EL222分子结合序列。在光照条件下，EL222分子形成聚合物结合到启动子下游，阻碍转录复合物向3’端移动，从而抑制目的基因转录。而在黑暗情况下，EL222分子成游离状态，不会抑制目的基因转录。通过该设计，实现了基于光环境切换的高效、环保的诱导表达系统，且在多种多肽、酶等的表达上取得了成功。