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公开(公告)号：CN108103120A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201711374147.7
申请日：2017-12-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种双酶偶联全细胞催化马来酸合成L‑天冬氨酸的方法，属于生物工程领域。本发明构建了一种偶联表达马来酸顺反异构酶和L‑天冬氨酸裂解酶的重组菌株，并对该重组菌株进行改造优化，获得能够全细胞高转化率催化马来酸生成L‑天冬氨酸的重组菌。该重组菌株能够利用价格相对便宜的马来酸生成L‑天冬氨酸，反应40～120min，马来酸反应完全，而且几乎没有中间产物富马酸的积累，转化率到达98％以上。
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公开(公告)号：CN106479948A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201611166229.8
申请日：2016-12-16
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/75 , C12C11/00 , C12N9/44 , C12P7/06 , C12P19/16 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12R1/125
CPC分类号： Y02E50/17 , C12N9/2457 , C12C11/00 , C12C2200/05 , C12P7/06 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12P19/16 , C12Y302/01041
摘要： 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌普鲁兰酶分泌的方法，属于发酵工程领域。本发明通过构建重组表达普鲁兰酶的枯草芽孢杆菌，并在以此重组菌发酵生产普鲁兰酶的过程中，添加终浓度为0.4％的甜菜碱或0.2％的吐温-80或0.4％的司盘80，普鲁兰酶的分泌效率可以达到76.13％、68.72％和72.84％，胞外pulA酶活分别达到22.95IU/ml、19.13IU/ml、20.11IU/ml。
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公开(公告)号：CN117660421A
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202311564155.3
申请日：2023-11-21
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了共进化位点改造提高热稳定性和活性的纳豆激酶突变体，属于蛋白质工程技术领域。本发明筛选得到4个活性或稳定性提升的双点突变体，且这四个突变位于2个共进化残基对上。对双点突变进行组合，获得稳定性和活性进一步提升的三个四点组合突变。其中，M5的比酶活为17.9U/mg；其热稳定性大幅提高，55℃下半衰期是野生型的3.5倍，达到718分钟。将M5与之前获得的高性能突变体M4进一步组合，获得突变体M6，其活性和热稳定性得到进一步提升，以为底物时，比酶活达到33.8U/mg，Tm达到73.4±0.5℃，55℃下半衰期达到6348min。
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公开(公告)号：CN117448303A
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202311326116.X
申请日：2023-10-13
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种嗜热II型普鲁兰酶的分子改造及其在淀粉制糖中的应用，属于基因工程技术及制糖工业领域。本发明对超嗜热古菌(Pyrococcusyayanosii)CH1来源的II型普鲁兰酶进行突变得到突变体W30L/H400I/S552A。该突变体的比活和催化效率与野生型相比，分别提高了3.2倍和5倍。利用该酶突变体生产低聚麦芽糖的反应显示，酶突变体低聚麦芽糖的转化率达到96.1％，比野生型提高了5.4％。此外，将酶突变体用于葡萄糖生产时，该酶突变体的葡萄糖产量分别比野生型和传统方法提高25.4％和43.5％。表明了该酶的突变体在淀粉糖工业中应用中存在巨大潜力。
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公开(公告)号：CN114277045B
公开(公告)日：2023-09-08
申请号：CN202111466694.4
申请日：2021-12-03
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种酰胺化合物生物传感器的构建及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一段AmiC‑AmiR突变体的氨基酸基序在检测酰胺类化合物中的应用。本发明通过对RBS进行优化、并将AmiC第83位取代为组氨酸，从而实现了此传感器对于酰胺类物质的响应，并且能检测到摩尔级别的含量，响应范围在0～10mM之间。从而具备良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113583925B
公开(公告)日：2023-09-08
申请号：CN202110441638.9
申请日：2021-04-23
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种代谢工程大肠杆菌发酵制备广藿香醇的方法，属于生物工程领域。本发明改造广藿香醇合酶及宿主菌株，获得能够高效发酵生产广藿香醇的重组菌及其发酵方法。该重组菌株能够以廉价的葡萄糖为底物，发酵生成高附加值的广藿香醇，摇瓶发酵96h广藿香醇产量达到338.6mg/L，得率为48.6mg/g干2细胞重量，体积生产强度为84.6mg/L/d。在5L发酵罐中，广藿香醇产量可达到970.1mg/L，体积生产强度为199mg/L/d。
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公开(公告)号：CN114317502B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202111478383.X
申请日：2021-12-06
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种高活性和高热稳定性的纳豆激酶突变体，属于蛋白质工程领域。本发明筛选得到三种纳豆激酶突变体，分别是突变体M2(S62AN181DY217KN218SN259P)，突变体M3(P57CA92C)以及突变体M4(S62AP57CA92CN181DY217KN218SN259P)。其中突变体M4在55℃与65℃下半衰期分别较野生型提升了20.7倍与12.9倍，这是目前已有的报道中关于纳豆激酶热稳定性最优的突变体，同时比酶活也较野生型提升了2.1倍。本发明实现了在提升纳豆激酶热稳定性的同时保持其催化活性，以突破“稳定性活性的权衡”，为纳豆激酶工业化应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114107270B
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202111485153.6
申请日：2021-12-07
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体E88R的比酶活相对野生型提高了2.1倍，比酶活达481±3.7U/mg。突变体E88R在50℃处理30分钟仍有59％残留酶活性，在pH 7.0和pH 8.0条件下，残余酶活分别为88％和82％。相比野生型酶，该突变体酶E88R的热稳定性与pH稳定性都有很大的提高，有利于以后的工业生产。在pH 7.5条件下，突变体E88R比酶活达到199±2.1U/mg，比野生型高1.9倍。以2.5M马来酸作为底物，全细胞催化制备L‑丙氨酸，生产速率达35.66g/(L·h)，比野生型提高1.68倍。
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公开(公告)号：CN114317510B
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202210006581.4
申请日：2022-01-05
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种马来酸顺反异构酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的马来酸顺反异构酶的突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，该突变酶的温度稳定性相比野生酶有了较大的提高，同时该突变体具有更好的pH稳定性。将构建得到的马来酸顺反异构酶突变体与天冬氨酸酶AspA在大肠杆菌中偶联表达，并以马来酸为底物生产L‑天冬氨酸，转化率可达94％以上，具有广阔的工业生产应用前景。
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公开(公告)号：CN112553236B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202011449745.8
申请日：2020-12-09
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种基于异源群体感应的高效表达系统，属于基因工程技术领域。本发明通过将金黄色葡萄球菌的agr群体感应系统中的agrA、agrB、agrC和agrD基因异源构建至枯草芽孢杆菌168基因组，将P3启动子克隆至穿梭载体，进而构建相配套的宿主和表达质粒。使用绿色荧光蛋白sfGFP作为报告基因，证明该系统可以高效表达外源蛋白，且不需要额外添加诱导剂。分别对P3启动子在RepA、RepB和RepF复制类型质粒上的蛋白表达水平进行检测，表明其与强组成型启动子P43和PylbP相比，在RepA和RepF复制类型质粒上具有超高的活性。
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