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公开(公告)号：CN117487778A
公开(公告)日：2024-02-02
申请号：CN202311435035.3
申请日：2023-10-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种全新的基于CRISPR‑Cas12b的碱基编辑器的构建及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对BhCas12b进行失活突变，获得了失活版本的dBhCas12b。本发明基于dBhCas12b，在微生物中构建了具有拓展编辑窗口的碱基编辑器，编辑窗口在大肠杆菌中最高可达63nt，是目前微生物细胞中编辑窗口最宽的CBE系统。最终，本发明将该系统用于基因表达的多样化以及蛋白质的原位进化中，并且获得了一系列梯度表达的构建体以及高版本底盘细胞。本发明提供了一种超宽编辑窗口的新型BE系统，该系统能够在代谢工程、蛋白质工程以及基因工程的各个方面体现出巨大的应用价值。
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公开(公告)号：CN113817659B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202111076165.3
申请日：2021-09-14
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/64 , C12N15/60 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/31 , C12P13/06 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种代谢工程改造大肠杆菌发酵制备β‑丙氨酸的方法，属于生物工程领域。本发明构建了一种工程菌株，通过游离型表达质粒分别过表达panD基因、aspA基因、大肠杆菌来源的ppc基因、gldA基因和dhaKLM基因，敲除了染色体上的lacI基因、乙醛羧酸循环抑制子iclR和富马酸消耗途径的fumA和fumC基因获得高效生产β‑丙氨酸的重组菌。该重组菌株能够以廉价的甘油为底物，发酵生成附加值更高的β‑丙氨酸，发酵50h，β‑丙氨酸产量可达37.9g/L，为工业绿色、高效生产β‑丙氨酸提供了技术支持。
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公开(公告)号：CN112481278B
公开(公告)日：2023-02-21
申请号：CN202011449689.8
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于AIP诱导的生物传感器及其应用，属于基因工程技术领域。本发明将agr群体感应系统感受AIP的关键组分异源构建至枯草芽孢杆菌168中，使其能够在AIP的诱导下表达绿色荧光蛋白sfGFP。利用该系统，可以通过sfGFP的表达荧光反应AIP的浓度。同时将AIP合成相关基因异源构建至大肠杆菌中，使得大肠杆菌能够合成分泌AIP，获得AIP产生菌。在AIP产生菌中建立AIP的突变体库，在AIP感应菌种筛选突变的AIP，实现AIP高通量突变和筛选。该系统能够方便地研究AIP不同位点突变对其功能的影响，并且获得具有不同特性的突变体AIP。
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公开(公告)号：CN114350645A
公开(公告)日：2022-04-15
申请号：CN202111457993.1
申请日：2021-12-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种新基因型腈水合酶及其重组表达，属于生物工程技术领域。所述腈水合酶来源于RoseomonasStagni，基因全长1014bp，编码336个氨基酸，并将其成功构建于大肠杆菌重组表达体系中。得到的目的蛋白以3‑氰基嘧啶为催化底物，可证明其是一种新型的腈水合酶，对烟腈有催化活力。并且将所述腈水合酶第250位精氨酸突变为丙氨酸后酶活提高了3.61倍，更加适于酰胺类物质在工业领域的生产。
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公开(公告)号：CN114250217A
公开(公告)日：2022-03-29
申请号：CN202111478385.9
申请日：2021-12-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种理性设计提升腈水解酶活性的方法及应用，属于酶工程领域。本发明通过腈水解酶的晶体结构进行分析，通过底物对接确定了催化口袋附近与催化活性相关的位点，对每个点做饱和突变后，通过两种计算方法Rosetta‑Cartesian和FEP对获得的突变体进行稳定性和结合自由能分析，对满足要求的突变体做酶活测定。将单点突变酶活高于野生型的位点进行组合突变再进行计算，最终获得符合要求的突变体进行酶活测定。通过这种方法我们最后获得了两个单点突变体，比酶活为野生型的2、1.5倍，组合突变体F64YW170G比酶活为野生型的4.56倍。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114107269A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111395709.2
申请日：2021-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种腈水合酶氨基酸基序的改造及其应用，属于生物工程技术领域。所述基序在α亚基上酶活中心的108、111和113位点均是高度保守的，它们分别与钴离子形成配位键。通过序列与结构比对，其他来源的腈水合酶在这些对应的氨基酸残基位点也是高度保守的。本发明通过将所述将腈水合酶β亚基上的第129号位的丙氨酸进行突变，得到突变体A129R的比酶活较野生型显著提升，且底物谱较野生型拓宽，对于异丁腈、正戊腈、烟腈、2‑氰基吡嗪、苯甲腈、肉桂腈、1‑萘甲腈和噻虫啉等具有较好的催化活性。
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公开(公告)号：CN111607623B
公开(公告)日：2022-02-11
申请号：CN202010479232.5
申请日：2020-05-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种代谢工程改造大肠杆菌制备α‑酮异戊酸的方法，属于生物工程领域。本发明构建了一种偶联表达乙酰乳酸合成酶、乙酰乳酸异构还原酶和二羟基酸脱水酶的重组菌株，并对该宿主菌株进行改造优化，获得能够发酵法高效生产α‑酮异戊酸的重组菌。该重组菌株能够以廉价的葡萄糖为底物，发酵生成附加值更高的α‑酮异戊酸，发酵36h，α‑酮异戊酸产量可达22.91g/L，葡萄糖转化率达80％。
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公开(公告)号：CN113061538A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110308872.4
申请日：2021-03-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种构巢曲霉自诱导型表达系统及其应用，属于基因工程领域。本发明所述的表达系统时基于硝酸盐还原酶启动子受硝酸盐诱导铵盐抑制的特性。在此基础上表征了其自诱导的特征。各实验结果充分说明基于硝酸盐还原酶启动子的自诱导构巢曲霉表达系统能够进行自诱导表达，丰富了构巢曲霉的表达系统形式，培养方式操作简单，在构建蛋白表达系统方面有巨大的应用空间。
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公开(公告)号：CN111269926A
公开(公告)日：2020-06-12
申请号：CN201911414867.0
申请日：2019-12-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种钴离子诱导型蛋白表达系统及应用，属于生物工程技术领域。本发明通过将响应钴离子的阻遏蛋白RcnR及其操纵序列rcnO与来源于枯草芽孢杆菌的强启动子Pveg构建在一起，得到了钴离子诱导型高效基因表达系统。当利用该系统表达腈水合酶时，以500μM钴离子作为诱导剂，酶活最高达到106.2±4.6U/mL，接近使用IPTG诱导系统的水平(121.4±4.0U/mL)。在利用该钴离子诱导型系统表达腈水合酶过程中，钴离子同时作为腈水合酶的诱导剂和金属配体，不需要额外添加化学诱导剂，降低了生产成本，简化了生产工艺。
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公开(公告)号：CN106544336A
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201611108474.3
申请日：2016-12-06
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/88 , C12P13/001 , C12Y402/01084
Abstract: 本发明公开了一种对脂肪族二腈区域选择性提高的腈水合酶，属于微生物基因工程领域。本发明将恶臭假单胞菌来源的腈水合酶的第37位的亮氨酸分别突变为苯丙氨酸、色氨酸或者酪氨酸之后，相比野生型，腈水合酶催化己二腈转化得到的产物以己二酰二胺为主，产物中，己二酰二胺的含量在90％以上。本发明提供的腈水合酶突变体将在针对性合成己二酰二胺的过程中，更好地发挥作用，减少分离纯化目标产物的成本。
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