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公开(公告)号：CN113151240A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110559008.1
申请日：2021-05-21
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一种葡萄糖异构酶及其突变体，以及其编码基因，以及其在微生物催化D‑葡萄糖异构化制备高果糖浆F‑55中的应用。本发明提供的高效表达耐高温葡萄糖异构酶的重组大肠杆菌，解决了一般的耐高温葡萄糖异构酶生产高果糖浆F‑55反应温度过高的问题；应用该菌种生产葡萄糖异构酶具有产量高、工艺简单、周期短、便于工业化应用等优点，该菌株可直接用于高果糖浆F‑55的生产，而不需要细胞破碎；发酵培养结束后在80℃条件下对D‑葡萄糖的总酶活达到606.8U/g，D‑葡萄糖的转化率达到67.3％，80℃下保温24h残余酶活为75％，反应平衡时间为2.5h，这为高果糖浆F‑55的工业化大规模生产提供了良好的技术支持。
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公开(公告)号：CN113122526A
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN202110397915.0
申请日：2021-04-14
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种本发明涉及一种腈水合酶突变体，具体涉及一种腈水合酶赖氨酸突变体HBA‑K1及其编码基因，含有该突变体编码基因的质粒及重组菌，以及该腈水合酶赖氨酸突变体HBA‑K1在催化有机腈化合物制备酰胺化合物中的应用。所述突变体HBA‑K1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其最适pH为9.0，最适温度为35℃。与野生酶HBA相比，突变腈水合酶HBA‑K1的翻译后自修饰效率和比活力得到了改良，可应用于生物催化生产丙烯酰胺、烟酰胺及其它高附加值的酰胺类化合物，化工纤维表面改性和碱性污水处理等生物技术领域。
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公开(公告)号：CN110452899B
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN201910594155.5
申请日：2019-07-03
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一种耐高温葡萄糖异构酶、突变体及其在制备D‑果糖中的应用。所述葡萄糖异构酶氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述突变体由序列如SEQ ID NO：3所示的氨基酸经定点突变而来。本发明提供了一种未被鉴定的全新耐高温葡萄糖异构酶及其突变体，该突变体具有超级最适反应温度120℃，比原始酶GtAI提高了60℃，属于文献报道的最高水平，解决了现有酶无法在高温生产高果糖浆的技术难题。使用本突变酶生产高果糖浆转化率最高可达75.7％，高于原始酶和其他突变酶的转化效果，同时也是文献报道的最高水平，具有较好应用前景。
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公开(公告)号：CN104962546B
公开(公告)日：2021-02-26
申请号：CN201510349443.6
申请日：2015-06-19
申请人： 浙江工业大学
IPC分类号： C12N11/14 , C12N11/089 , C12N9/92 , C12R1/19
摘要： 本发明公开了一种含葡萄糖异构酶细胞的固定化方法，所述方法是将含葡萄糖异构酶基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体加入缓冲液中，制成菌悬液；向菌悬液中添加载体，搅拌混匀，再加入聚乙烯亚胺，然后加入戊二醛进行交联，0～30℃搅拌交联1～2h后，过滤，滤饼用蒸馏水洗涤后用轴向挤压机挤压成长条状，室温风干后，粉碎成粒，得含葡萄糖异构酶的固定化葡萄糖异构酶细胞；本发明所提供的固定化方法具有固定化材料成本低，操作简单，机械强度高，在高温条件下较稳定，制备的固定化产葡萄糖异构酶重组大肠杆菌全细胞用于高温条件下催化D‑葡萄糖生产D‑果糖，在85℃的条件下，转化率高达54％，重复使用10批次后，仍具有90％以上的酶活，具有良好的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN112126592A
公开(公告)日：2020-12-25
申请号：CN202010783486.6
申请日：2020-08-06
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种中国被毛孢诱变株及其在生产核苷中的应用，该中国被毛孢诱变株命名为中国被毛孢(Hirsutella sinensis)ZJB19050，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020117，保藏日期为2020年5月11日，保藏地址为中国武汉，武汉大学；邮编为430072。本发明利用原生质体技术对原始中国被毛孢菌株ZJB18002进行物理、化学等诱变方式，得到了诱变株；该诱变株的代谢产物尿苷产量提高约1.13倍，鸟苷产量提高0.67倍，腺苷产量提高1.60倍，使虫草的生产成本降低，有利于中国被毛孢的广泛推广和应用。
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公开(公告)号：CN110317766B
公开(公告)日：2020-08-28
申请号：CN201910435397.X
申请日：2019-05-23
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一种高产L‑半胱氨酸的基因工程菌及其构建方法，以及该基因工程菌在微生物发酵制备L‑半胱氨酸中的应用。本发明构建了高产L‑半胱氨酸的基因工程菌，经过改造后的大肠杆菌相比于野生型能够更好的利用葡萄糖等碳源物质进行L‑半胱氨酸生产，并且其产量从无提高到3.0±0.1g/L。本发明进一步改造的L‑半胱氨酸转运系统可以减轻产物L‑半胱氨酸对cysE的反馈抑制作用以及其毒害性，达到高产L‑半胱氨酸。
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公开(公告)号：CN109609478B
公开(公告)日：2020-06-16
申请号：CN201910033474.9
申请日：2019-01-14
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种新型转氨酶及其高活力突变体在制备L‑草铵膦中的应用，转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID:5所示，其突变体是将SEQ ID:5所示的氨基酸序列的第124、144、237、250、和328位中的一个或者多个进行单位点突变或多位点突变获得的。本发明实现高转化率转氨酶活力突变体基因的高效表达，酶活最高为840U/mg。本发明中所述转氨酶突变体的最适反应温度最高达到67℃，在该温度下催化800mM草铵膦前体酮利用无机胺正丁胺不对称合成L‑草铵膦中，转化率高达100％。该AcTA突变体解决了当前转氨酶制备L‑草铵膦工艺中，酶源少、酶活低、底物耐受性和氨基供体昂贵等技术难题，具有较好应用前景。
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公开(公告)号：CN111139271A
公开(公告)日：2020-05-12
申请号：CN202010174352.4
申请日：2020-03-13
申请人： 浙江工业大学
IPC分类号： C12P13/04
摘要： 本发明公开了一种单一转氨酶催化级联反应不对称合成L-草铵膦的方法，该方法包括：以4-(甲基羟基磷酰基)-2-羰基-丁酸或其盐为底物，在氨基供体存在的反应体系中，利用离体的转氨酶或体外表达转氨酶的细胞催化底物，发生转氨反应，得到L-草铵膦；所述氨基供体为L-谷氨酸和L-天冬氨酸；反应体系中仅添加一种转氨酶，且该转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明方法采用的转氨酶ATA117-rd11催化级联反应生产L-草铵膦工艺既解决了现在使用单一转氨酶工艺中氨基供体用量过高的问题，又解决了现有两种转氨酶工艺中生物催化剂成本偏高、发酵工序繁琐以及反应时间偏长的技术难题。
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公开(公告)号：CN109609477A
公开(公告)日：2019-04-12
申请号：CN201910032171.5
申请日：2019-01-14
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及一种α-转氨酶突变体及其在不对称合成L-草铵膦中的应用。所述突变体是将SEQ ID:1所示的氨基酸序列的第52、71、81、153、168、324、341和361位中的一个或者多个进行单位点突变或多位点突变获得的。本发明实现高转化率α-转氨酶突变体基因的高效表达，酶活最高为808.1U/mg。本发明中所述α-转氨酶突变体的最适反应温度最高达到67℃，在该温度下催化600mM草铵膦前体酮不对称合成L-草铵膦中，转化率高达100％，是文献报道的最高水平。该CkTA突变体解决了现有α-TA酶活低、底物耐受性差、转化率低的技术难题，具有较好应用前景。
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公开(公告)号：CN109364984A
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201811488621.3
申请日：2018-12-06
申请人： 浙江工业大学
IPC分类号： B01J29/44 , B01J37/34 , B01J37/02 , B01J37/16 , C07C29/141 , C07C31/26 , C07H1/00 , C07H15/04
摘要： 本发明涉及一种ZSM-5分子筛负载钌催化剂，及其制备方法和其在糖催化加氢制备糖醇中的应用。本发明通过简单的浸渍还原法将金属钌(Ru)负载到高比表面积的ZSM-5分子筛上，制备出高分散度、高活性的Ru/ZSM-5催化剂。该催化剂应用于木糖醇、阿拉伯醇、山梨醇、甘露糖、麦芽醇等系列糖醇的制备，产物选择性好、产率高，且催化剂活性高、稳定性好，可多批次重复利用，综合成本低。总之，本发明的催化剂制备工艺简单、催化效率高、稳定性好，适用于多种糖醇的制备过程，通用性好，利于推广。
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