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    Customized proteases
    13.
    发明授权
    Customized proteases 失效
    定制蛋白酶

    公开(公告)号：US5945329A

    公开(公告)日：1999-08-31

    申请号：US899324

    申请日：1997-07-23

    申请人： Klaus Breddam ,  Morten C. Kielland-Brandt ,  Uffe Hasbo Mortensen ,  Kjeld Ove Olesen ,  Henning Ralf Stennicke ,  Fred W. Wagner

    发明人： Klaus Breddam ,  Morten C. Kielland-Brandt ,  Uffe Hasbo Mortensen ,  Kjeld Ove Olesen ,  Henning Ralf Stennicke ,  Fred W. Wagner

    IPC分类号： C12N15/09 ,  C07K14/60 ,  C12N9/48 ,  C12N9/50 ,  C12N15/10 ,  C12N15/57 ,  C12P21/02 ,  C12R1/865 ,  C12N9/60 ,  C12N15/11 ,  C12P21/00

    CPC分类号： C12N15/102 ,  C07K14/60 ,  C12N15/10 ,  C12N9/48 ,  C12P21/02

    摘要： The invention provides customized proteases (i.e., mutant enzymes), methods of making customized proteases, as well as methods of using customized proteases. The customized proteases of the invention are derived from the known proteases. Altered transacylation reactions include the capability to perform transacylation reactions not substantially catalyzed by the known protease or the capability to perform transacylation reactions with improved yields, or both. The methods of the invention provide for customized proteases through site specific or random mutagenesis of the active site amino acids of the known proteases. The invention also provides for methods of using the customized proteases to prepare a preselected transacylation products. The preselected transacylation products produced can be modified by substitution at the N- or C-terminal with nucleophiles such as L-amino acids, D-amino acids, amino acid amides, and radioactive amino acids.

    摘要翻译： 本发明提供定制的蛋白酶（即突变酶），制备定制蛋白酶的方法以及使用定制的蛋白酶的方法。 本发明的定制的蛋白酶来自已知的蛋白酶。 改变的转酰基反应包括执行基本上不被已知蛋白酶催化的转酰基化反应的能力或者以提高的产量进行转酰化反应的能力，或两者都有。 本发明的方法通过已知蛋白酶的活性位点氨基酸的位点特异性或随机诱变提供定制的蛋白酶。 本发明还提供使用定制的蛋白酶制备预选的转酰胺产物的方法。 产生的预选择的转酰胺产物可以通过用亲核试剂例如L-氨基酸，D-氨基酸，氨基酸酰胺和放射性氨基酸在N-或C-末端取代来修饰。

    Modified carboxypeptidase
    14.
    发明授权
    Modified carboxypeptidase 失效
    改性羧肽酶

    公开(公告)号：US5985627A

    公开(公告)日：1999-11-16

    申请号：US807263

    申请日：1997-02-28

    申请人： Uffe Mortensen ,  Kjeld Olesen ,  Henning Stennicke ,  Steen B. S.o slashed.rensen ,  Klaus Breddam

    发明人： Uffe Mortensen ,  Kjeld Olesen ,  Henning Stennicke ,  Steen B. S.o slashed.rensen ,  Klaus Breddam

    IPC分类号： C12N9/48 ,  C12P13/02 ,  C12N9/14

    CPC分类号： C12N9/48

    摘要： A method for transamidating a peptide substrate having a P.sub.1 amino acid residue with a positively charged side chain. According to the invention, carboxypeptidase Y is modified to substitute at least one amino acid having a negatively charged side chain in an S.sub.1 subsite. Additionally, the modified carboxypeptidase Y can include substituted amino acid residues in an S.sub.1 ', S.sub.2 and/or S.sub.3 subsite to accommodate a specific peptide substrate.

    摘要翻译： 一种具有带正电侧链的具有P1氨基酸残基的肽底物的酰胺化方法。 根据本发明，羧肽酶Y被修饰以在S1子位点中替代具有带负电荷侧链的至少一个氨基酸。 此外，修饰的羧肽酶Y可以包括S1'，S2和/或S3子位点中的取代的氨基酸残基以适应特定的肽底物。

    Process for the preparation of C-terminally amidated peptides
    15.
    发明授权
    Process for the preparation of C-terminally amidated peptides 失效
    制备C-末端酰胺化肽的方法

    公开(公告)号：US5580751A

    公开(公告)日：1996-12-03

    申请号：US431539

    申请日：1995-04-21

    申请人： Ole Buchardt ,  Klaus Breddam ,  Dennis Henriksen

    发明人： Ole Buchardt ,  Klaus Breddam ,  Dennis Henriksen

    IPC分类号： C07K1/00 ,  C12N9/48 ,  C12P21/02 ,  C12P21/06 ,  C12N9/76

    CPC分类号： C12N9/48 ,  C07K1/003 ,  C12P21/02

    摘要： A process for preparing C-terminally amidated peptides, Peptide-NH.sub.2, is presented. In a first step, a substrate component is reacted with a nucleophile component in the presence of trypsin or a carboxypeptidase using as nucleophile a compound NH.sub.2 -R to form a first reaction product Peptide-NH-R. In a second step, the first reaction product is non-enzymatically chemically cleaved to form the C-terminally amidated product, Peptide-NH.sub.2. The substrate component is selected from a) peptide derivatives Peptide-X-Y, where X is an amino acid or peptide residue and Y is OH, OMe or C-terminal modification and c) C-terminally esterified peptides, Peptide-OR', where R' is alkyl, aryl, heteroaryl, or aralkyl. The nucleophile component is selected from ##STR1## wherein A-F and A'-E' are carbon atoms or up to two hetero atoms, Y is H, alkyl, aryl, aralkyl, oxo or carboxy, X.sup.1 -X.sup.5 are H or various substituents. The cleavage may be induced by photolysis, solvolysis, reduction, rearrangement elimination, or oxidation. The process may be adapted to enzymatic synthesis and lends itself to C-terminal amidation of many types of peptides.

    摘要翻译： 提出了一种制备C末端酰胺化肽肽肽-NH2的方法。 在第一步中，在胰蛋白酶或羧肽酶存在下，使底物成分与亲核成分反应，使用化合物NH2-R作为亲核试剂，形成第一反应产物肽-NH-R。 在第二步中，第一反应产物是非酶学化学裂解以形成C末端酰胺化产物肽-NH 2。 底物组分选自a）肽衍生物P-XY，其中X是氨基酸或肽残基，Y是OH，OMe或C末端修饰，和c）C末端酯化肽，肽-OR'，其中R '是烷基，芳基，杂芳基或芳烷基。 亲核成分选自其中A-F和A'-E'是碳原子或至多两个杂原子，Y是H，烷基，芳基，芳烷基，氧代或羧基，X 1 -X 5是H或各种取代基。 裂解可以通过光解，溶剂分解，还原，重排排除或氧化来诱导。 该方法可适用于酶合成，并适用于许多类型肽的C-末端酰胺化。

    Oxidation stable detergent enzymes
    16.
    发明授权
    Oxidation stable detergent enzymes 失效
    氧化稳定的消毒酶

    公开(公告)号：US5208158A

    公开(公告)日：1993-05-04

    申请号：US553934

    申请日：1990-07-17

    申请人： Lene M. Bech ,  Sven Branner ,  Klaus Breddam ,  Hanne Groen

    发明人： Lene M. Bech ,  Sven Branner ,  Klaus Breddam ,  Hanne Groen

    IPC分类号： C07K1/113 ,  C11D3/386 ,  C11D7/42 ,  C12N9/54 ,  C12N9/56 ,  C12N15/57

    CPC分类号： C07K1/1133 ,  C11D3/386 ,  C11D3/38627 ,  C11D3/38645 ,  C12N9/54

    摘要： Novel chemically modified detergent enzymes are provided, wherein one or more methionines have been mutated into cysteines, said cysteines subsequently being chemically modified in order to confer the enzyme improved stability towards oxidative agents. A novel process for stabilizing detergent enzymes against oxidation is also provided. Furthermore, there are provided detergent compositions comprising these novel oxidation stable detergent enzymes.

    摘要翻译： 提供了新的化学修饰的洗涤剂酶，其中一个或多个甲硫氨酸已经突变成半胱氨酸，所述半胱氨酸随后被化学修饰，以赋予酶提高对氧化剂的稳定性。 还提供了一种用于稳定洗涤剂酶以抗氧化的新方法。 此外，提供了包含这些新型氧化稳定的洗涤剂酶的洗涤剂组合物。

    Process for enzymatic replacement of the B-30 amino acid in insulins
    17.
    发明授权
    Process for enzymatic replacement of the B-30 amino acid in insulins 失效
    在胰岛素中酶代替B-30氨基酸的方法

    公开(公告)号：US4645740A

    公开(公告)日：1987-02-24

    申请号：US364856

    申请日：1982-03-23

    申请人： Klaus Breddam ,  Jack T. Johansen ,  Fred Widmer

    发明人： Klaus Breddam ,  Jack T. Johansen ,  Fred Widmer

    IPC分类号： C12P21/02 ,  A61K38/28 ,  C07K1/36 ,  C07K14/62 ,  C12P20060101 ,  C12P21/04 ,  C12P21/06

    CPC分类号： C07K14/62

    摘要： The B-30 amino acid in insulins is replaced enzymatically byreacting as substrate component the selected insulin Ins-X, wherein X represents the B-30 amino acidwith an amine component selected from the group consisting of(a) amino acids of the formulaH--B--OHwherein B is an amino acid residue,(b) optionally N-substituted amino acid amides of the formulaH--B--NR.sup.1 R.sup.2wherein B is an amino acid residue and R.sup.1 and R.sup.2 are independently selected from the group consisting of hydrogen, amino, hydroxy, alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl and aralkyl or R.sup.1 and R.sup.2 together with the nitrogen atom form a heterocyclic group which may contain a further hetero atom, and(c) amino acid esters of the formulaH--B--OR.sup.3, H--B--SR.sup.3 or H--B--SeR.sup.3wherein B is am amino acid residue and R.sup.3 represents alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl or aralkylin the presence of an L-specific serine or thiol carboxypeptidase enzyme, preferably carboxypeptidase-Y, in an aqueous solution or dispersion having a pH from about 7 to 10.5, thereby to form an insulin derivativeIns--B--OH, Ins--B--NR.sup.1 R.sup.2, Ins--B--B--NR.sup.1 R.sup.2,Ins--B--OR.sup.3, Ins--B--SR.sup.3 or Ins--B--SeR.sup.3and subsequently cleaving a group --NR.sup.1 R.sup.2, --B--NR.sup.1 R.sup.2, --OR.sup.3, --SR.sup.3 or SeR.sup.3, if desired, preferably by using a carboxypeptidase enzyme. The cleaving may also be performed on derivatives obtained by other methods.By using porcine insulin as substrate component and threonine as the amino acid forming part of the amine component human insulin is obtained.

    摘要翻译： PCT No.PCT / DK81 / 00074 Sec。 371日期1982年3月23日 102（e）1982年3月23日PCT PCT 1981年7月23日PCT公布。 公开号WO82 / 00301 1982年2月4日。胰岛素中的B-30氨基酸通过以选择的胰岛素Ins-X作为底物组分反应来代替酶，其中X代表B-30氨基酸与选自（ a）式HB-OH的氨基酸，其中B是氨基酸残基，（b）式HB-NR1R2的任选N-取代的氨基酸酰胺，其中B是氨基酸残基，R 1和R 2独立地选自 由氢，氨基，羟基，烷基，环烷基，芳基，杂芳基和芳烷基或R1和R2与氮原子一起组成的基团可以含有另外的杂原子的杂环基，和（c）式HB的氨基酸酯 -OR3，HB​​-SR3或HB-SeR3，其中B是氨基酸残基，R3表示烷基，环烷基，芳基，杂芳基或芳烷基，在L-特异性丝氨酸或硫羟羧肽酶，优选羧肽酶-Y存在下， 水溶液或分散体具有a pH为约7至10.5，从而形成胰岛素衍生物Ins-B-OH，Ins-B-NR1R2，Ins-BB-NR1R2，Ins-B-OR3，Ins-B-SR3或Ins-B-SeR3，随后 如果需要，优选通过使用羧肽酶来切割基团-NR1R2，-B-NR1R2，-OR3，-SR3或SeR3。 裂解也可以通过其它方法获得的衍生物进行。 通过使用猪胰岛素作为底物组分和苏氨酸作为形成胺组分的一部分的氨基酸，得到人胰岛素。