公开(公告)号：US5656456A

公开(公告)日：1997-08-12

申请号：US457166

申请日：1995-06-01

申请人： Jay Stout ,  Fred W. Wagner ,  Thomas R. Coolidge ,  Bart Holmquist

发明人： Jay Stout ,  Fred W. Wagner ,  Thomas R. Coolidge ,  Bart Holmquist

IPC分类号： C07K1/00 ,  C07K1/107 ,  C07K1/12 ,  C07K5/11 ,  C07K7/18 ,  C07K14/47 ,  C07K14/475 ,  C12N15/62 ,  C12P21/00

CPC分类号： C12N15/62 ,  C07K1/003 ,  C07K1/006 ,  C07K1/1072 ,  C07K1/1075 ,  C07K1/12 ,  C07K14/4716 ,  C07K14/475 ,  C07K5/1019 ,  C07K7/18 ,  C07K2319/00 ,  C07K2319/50 ,  C07K2319/75 ,  Y02P20/55

摘要： The invention provides for a chemical method for preparing a recombinant single copy polypeptide or a portion thereof with a modified terminal amino acid .alpha.-carbon reactive group selected from the group consisting of N-terminal .alpha.-amine, C-terminal .alpha.-carboxyl, and a combination thereof. The steps of the method involve forming the recombinant single copy polypeptide or a portion thereof so that the single copy polypeptide is protected with one or more biologically added protecting groups at the N-terminal .alpha.-amine, C-terminal .alpha.-carboxyl. The recombinant single copy polypeptide can then be reacted with up to three chemical protecting agents to selectively protect reactive side chain groups and thereby prevent side chain groups from being modified. The recombinant single copy polypeptide can be cleaved with at least one cleavage reagent specific for the biological protecting group to form an unprotected terminal amino acid .alpha.-carbon reactive group. The unprotected terminal amino acid .alpha.-carbon reactive group is modified with at least one chemical modifying agent. The side chain protected terminally modified single copy polypeptide is then deprotected at the side chain groups to form a terminally modified recombinant single copy polypeptide. The number and sequence of steps in the method can be varied to achieve selective modification at the N- and/or C-terminal amino acid of a recombinantly produced polypeptide.

摘要翻译： 本发明提供了一种用于制备重组单拷贝多肽或其部分的化学方法，其具有修饰的末端氨基酸α-碳反应性基团，其选自N-末端α-胺，C-末端α-羧基和 其组合。 该方法的步骤包括形成重组单拷贝多肽或其部分，使得单拷贝多肽在N-末端α-胺C-末端α-羧基上用一个或多个生物学添加的保护基进行保护。 然后可将重组单拷贝多肽与多达三种化学保护剂反应，以选择性保护反应性侧链基团，从而防止侧链基团被修饰。 重组单拷贝多肽可以用至少一种对生物保护基特异性的切割试剂进行切割以形成未保护的末端氨基酸α-碳反应性基团。 未保护的末端氨基酸α-碳反应性基团用至少一种化学改性剂进行改性。 然后将侧链保护的末端修饰的单拷贝多肽在侧链基团脱保护以形成末端修饰的重组单拷贝多肽。 可以改变方法中的步骤数目和顺序，以实现重组产生的多肽的N-和/或C-末端氨基酸的选择性修饰。

公开(公告)号：US5635371A

公开(公告)日：1997-06-03

申请号：US294434

申请日：1994-08-23

申请人： Jay Stout ,  Fred W. Wagner ,  Thomas R. Coolidge ,  Bart Holmquist

发明人： Jay Stout ,  Fred W. Wagner ,  Thomas R. Coolidge ,  Bart Holmquist

IPC分类号： C12N15/09 ,  C07K1/00 ,  C07K1/06 ,  C07K1/107 ,  C07K1/113 ,  C07K1/12 ,  C07K5/11 ,  C07K7/18 ,  C07K14/47 ,  C07K14/475 ,  C07K14/60 ,  C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12P21/02 ,  C12P21/00

CPC分类号： C07K14/60 ,  C07K1/003 ,  C07K1/006 ,  C07K1/1072 ,  C07K1/1075 ,  C07K1/12 ,  C07K14/4716 ,  C07K14/475 ,  C07K5/1019 ,  C07K7/18 ,  C12N15/62 ,  C07K2319/00 ,  C07K2319/50 ,  C07K2319/75 ,  Y02P20/55

摘要： The invention provides for a chemical method for preparing a recombinant single copy polypeptide or a portion thereof with a modified terminal amino acid .alpha.-carbon reactive group selected from the group consisting of N-terminal .alpha.-amine, C-terminal .alpha.-carboxyl, and a combination thereof. The steps of the method involve forming the recombinant single copy polypeptide or a portion thereof so that the single copy polypeptide is protected with one or more biologically added protecting groups at the N-terminal .alpha.-amine, C-terminal .alpha.-carboxyl. The recombinant single copy polypeptide can then be reacted with up to three chemical protecting agents to selectively protect reactive side chain groups and thereby prevent side chain groups from being modified. The recombinant single copy polypeptide can be cleaved with at least one cleavage reagent specific for the biological protecting group to form an unprotected terminal amino acid .alpha.-carbon reactive group. The unprotected terminal amino acid .alpha.-carbon reactive group is modified with at least one chemical modifying agent. The side chain protected terminally modified single copy polypeptide is then deprotected at the side chain groups to form a terminally modified recombinant single copy polypeptide. The number and sequence of steps in the method can be varied to achieve selective modification at the N- and/or C-terminal amino acid of a recombinantly produced polypeptide.

摘要翻译： 本发明提供了一种用于制备重组单拷贝多肽或其部分的化学方法，其具有修饰的末端氨基酸α-碳反应性基团，其选自N-末端α-胺，C-末端α-羧基和 其组合。 该方法的步骤包括形成重组单拷贝多肽或其部分，使得单拷贝多肽在N-末端α-胺C-末端α-羧基上用一个或多个生物学添加的保护基进行保护。 然后可将重组单拷贝多肽与多达三种化学保护剂反应，以选择性保护反应性侧链基团，从而防止侧链基团被修饰。 重组单拷贝多肽可以用至少一种对生物保护基特异性的切割试剂进行切割以形成未保护的末端氨基酸α-碳反应性基团。 未保护的末端氨基酸α-碳反应性基团用至少一种化学改性剂进行改性。 然后将侧链保护的末端修饰的单拷贝多肽在侧链基团脱保护以形成末端修饰的重组单拷贝多肽。 可以改变方法中的步骤数目和顺序，以实现重组产生的多肽的N-和/或C-末端氨基酸的选择性修饰。

公开(公告)号：US5464759A

公开(公告)日：1995-11-07

申请号：US18100

申请日：1993-02-17

申请人： Thomas R. Coolidge ,  William Lewis ,  Sheldon M. Schuster ,  Jay Stout ,  Gino van Heeke ,  Dwane Wylie ,  Fred W. Wagner

发明人： Thomas R. Coolidge ,  William Lewis ,  Sheldon M. Schuster ,  Jay Stout ,  Gino van Heeke ,  Dwane Wylie ,  Fred W. Wagner

IPC分类号： A61K39/395 ,  A61K48/00 ,  C07H21/04 ,  C07K1/00 ,  C07K1/02 ,  C07K1/04 ,  C07K1/06 ,  C07K1/113 ,  C07K1/22 ,  C07K14/42 ,  C07K14/575 ,  C07K14/655 ,  C07K16/00 ,  C12N15/20 ,  C12P19/34 ,  C12Q1/68

CPC分类号： C07K1/006 ,  C07K1/04 ,  C07K1/22 ,  Y10S435/803 ,  Y10S435/81 ,  Y10S436/824

摘要： The invention is directed to a method of purifying sequentially synthesized peptides and oligonucleotides by affinity techniques. Selected products are capped with and N-terminus capping agent for peptides or a 5'-terminus capping agents for oligonucleotides, and then bound with affinity agents that are selective for the corresponding capping agents.

摘要翻译： 本发明涉及通过亲和技术纯化顺序合成的肽和寡核苷酸的方法。 所选择的产物与肽封端的N-末端封端剂或寡核苷酸的5'-末端封端剂，然后与对相应的封端剂有选择性的亲和试剂结合。

公开(公告)号：US5279954A

公开(公告)日：1994-01-18

申请号：US375138

申请日：1989-06-30

申请人： Fred W. Wagner ,  Thomas R. Coolidge ,  Dwane E. Wylie ,  Sheldon M. Schuster ,  William Lewis ,  Jay Stout

发明人： Fred W. Wagner ,  Thomas R. Coolidge ,  Dwane E. Wylie ,  Sheldon M. Schuster ,  William Lewis ,  Jay Stout

IPC分类号： C07K17/06 ,  C07K1/107 ,  C07K14/575 ,  C07K16/00 ,  C07K16/40 ,  C07K17/00 ,  C07K19/00 ,  C12N11/00 ,  C12N11/02 ,  C12N11/06 ,  G01N33/532 ,  G01N33/543 ,  G01N33/58 ,  C12N11/14 ,  G01N33/544 ,  G01N33/551

CPC分类号： C07K1/1077 ,  C07K16/40 ,  C07K17/00 ,  C12N11/00 ,  G01N33/532 ,  G01N33/543 ,  G01N33/58 ,  Y10S530/811 ,  Y10S530/812 ,  Y10S530/815 ,  Y10S530/816

摘要： The invention provides a means for attaching a label, support or bioactive agent to a protein with an exopeptidase at a site that is remote from the active site of the protein. More specifically the invention is directed to a method for the attachment of an amino acid, amine and alcohol nucleophile to the carboxyl terminus of a protein. In one embodiment, a labeled nucleophile is attached to a protein such as an antibody. In other embodiments, the invention is directed to a method for the attachment of a protein to an immobilization support and to a method for the attachment of a bioactive agent to a protein.

摘要翻译： 本发明提供了一种在远离蛋白质活性位点的位点附着标记物，载体或生物活性剂到蛋白质的方法。 更具体地，本发明涉及将氨基酸，氨基酸衍生物，胺和醇亲核试剂连接到蛋白质的羧基末端的方法。 在一个实施方案中，使用外肽酶将标记的亲核试剂连接到蛋白质例如抗体。 在其它实施方案中，本发明涉及将蛋白质与固定化载体连接的方法以及将生物活性剂与蛋白质连接的方法。

公开(公告)号：US5741686A

公开(公告)日：1998-04-21

申请号：US316810

申请日：1994-10-03

申请人： Fred W. Wagner ,  Thomas R. Coolidge ,  Dwane E. Wylie ,  Sheldon M. Schuster ,  William Lewis ,  Jay Stout

发明人： Fred W. Wagner ,  Thomas R. Coolidge ,  Dwane E. Wylie ,  Sheldon M. Schuster ,  William Lewis ,  Jay Stout

IPC分类号： C07K17/06 ,  C07K1/107 ,  C07K14/575 ,  C07K16/00 ,  C07K16/40 ,  C07K17/00 ,  C07K19/00 ,  C12N11/00 ,  C12N11/02 ,  C12N11/06 ,  G01N33/532 ,  G01N33/543 ,  G01N33/58 ,  C12N9/96 ,  C07K1/13 ,  C08H1/00

CPC分类号： C07K1/1077 ,  C07K16/40 ,  C07K17/00 ,  C12N11/00 ,  G01N33/532 ,  G01N33/543 ,  G01N33/58 ,  Y10S530/811 ,  Y10S530/812 ,  Y10S530/815 ,  Y10S530/816

摘要： A method is provided for preparing a labeled protein, immobilized protein or protein-bioactive agent composition by attaching a label, support or bioactive agent to a protein by exopeptidase catalysis at a site that is remote from the active site of the protein. More specifically, an amine or alcohol group of an amino acid, amine or alcohol nucleophile is reacted by exopeptidase catalysis with a C-terminus carboxylic acid group of a protein such as an antibody, enzyme or hormone to couple the nucleophile to the protein to form an adduct, and the adduct is bound to an auxiliary substance such as a support, label or bioactive agent or its combination with a linker arm by reacting a reactive substituent of the nucleophile with a reactive group of the auxiliary substance. Alternatively, the nucleophile is bound to the auxiliary substance or its combination with a linker arm to form an intermediate, and the intermediate is coupled by exopeptidase catalysis to the protein. The exopeptidase may be a serine or cysteine exocarboxypeptidase.

摘要翻译： 提供了一种用于通过在远离蛋白质活性位点的位点处通过外肽酶催化将标记物，载体或生物活性剂附着到蛋白质来制备标记的蛋白质，固定的蛋白质或蛋白质 - 生物活性剂组合物的方法。 更具体地，氨基酸，胺或醇亲核试剂的胺或醇基团通过外肽酶催化与诸如抗体，酶或激素的蛋白质的C末端羧酸基团反应，以将亲核体偶联到蛋白质上形成 加合物，并且加合物通过将亲核试剂的反应性取代基与辅助物质的反应性基团反应而与辅助物质例如载体，标记或生物活性剂或其与连接臂的组合结合。 或者，亲核试剂与辅助物质或其与连接臂的组合结合以形成中间体，并且中间体通过外肽酶催化与蛋白质偶联。 外肽酶可以是丝氨酸或半胱氨酸外切羧肽酶。

公开(公告)号：US5234820A

公开(公告)日：1993-08-10

申请号：US545915

申请日：1990-06-28

申请人： Fred W. Wagner ,  Thomas R. Coolidge ,  Sheldon M. Schuster ,  Jay Stout ,  Dwane E. Wylie ,  Klaus Breddam ,  William Lewis

发明人： Fred W. Wagner ,  Thomas R. Coolidge ,  Sheldon M. Schuster ,  Jay Stout ,  Dwane E. Wylie ,  Klaus Breddam ,  William Lewis

IPC分类号： C07K1/107 ,  C07K16/40 ,  C07K17/00 ,  C12N11/00 ,  G01N33/532 ,  G01N33/543 ,  G01N33/58

CPC分类号： C12N11/00 ,  C07K1/1077 ,  C07K16/40 ,  C07K17/00 ,  G01N33/532 ,  G01N33/543 ,  G01N33/58 ,  Y10S530/816

摘要： An auxiliary substance such as a label, support, or bioactive agent is attached to a protein at a site that is remote from the active site of the protein by the use of exopeptidase and a nucleophile which is an amino acid, amino acid derivative, amine or alcohol. In one embodiment, the nucleophile is attached to the carboxy terminus of a protein by catalysis with exopeptidase to form an adduct and then the adduct or its combination with a linker arm is bound to the auxiliary substance. In another embodiment, the auxiliary substance or its combination with a linker arm is bound to the nucleophile to form an intermediate substance which is then coupled by catalysis with exopeptidase to the carboxy terminus of a protein.

摘要翻译： 辅助物质如标记物，载体或生物活性剂通过使用外肽酶和亲核试剂（氨基酸，氨基酸衍生物，胺）与远离蛋白质活性位点的位点连接到蛋白质上 或酒精。 在一个实施方案中，亲核试剂通过使用外肽酶的催化与蛋白质的羧基末端连接以形成加合物，然后加合物或其与连接臂的组合与辅助物质结合。 在另一个实施方案中，辅助物质或其与连接臂的组合与亲核试剂结合以形成中间体物质，然后通过与外肽酶的催化偶联至蛋白质的羧基末端。

公开(公告)号：US5221736A

公开(公告)日：1993-06-22

申请号：US454372

申请日：1989-12-21

申请人： Thomas R. Coolidge ,  William Lewis ,  Sheldon M. Schuster ,  Dwane Wylie ,  Fred W. Wagner ,  Jay Stout ,  Gino van Heeke

发明人： Thomas R. Coolidge ,  William Lewis ,  Sheldon M. Schuster ,  Dwane Wylie ,  Fred W. Wagner ,  Jay Stout ,  Gino van Heeke

IPC分类号： A61K39/395 ,  A61K48/00 ,  C07H21/04 ,  C07K1/00 ,  C07K1/02 ,  C07K1/04 ,  C07K1/06 ,  C07K1/113 ,  C07K1/22 ,  C07K14/42 ,  C07K14/575 ,  C07K14/655 ,  C07K16/00 ,  C12N15/20

CPC分类号： C07K1/006 ,  C07K1/04 ,  C07K1/22 ,  Y10S435/803 ,  Y10S435/81 ,  Y10S436/824

摘要： The invention is directed to a method of purifying sequentially synthesized peptides and oligonucleotides by affinity techniques. Selected products are capped with and N-terminus capping agent for peptides or a 5'-terminus capping agents for oligonucleotides, and then bound with affinity agents that are selective for the corresponding capping agents.

摘要翻译： 本发明涉及通过亲和技术纯化顺序合成的肽和寡核苷酸的方法。 所选择的产物与肽封端的N-末端封端剂或寡核苷酸的5'-末端封端剂，然后与对相应的封端剂有选择性的亲和试剂结合。

公开(公告)号：US5700775A

公开(公告)日：1997-12-23

申请号：US410353

申请日：1995-03-24

申请人： Mark K. Gutniak ,  Thomas R. Coolidge ,  Robert R. Recker ,  Fred W. Wagner

发明人： Mark K. Gutniak ,  Thomas R. Coolidge ,  Robert R. Recker ,  Fred W. Wagner

IPC分类号： A61K38/25 ,  A61K38/27 ,  A61K37/00

CPC分类号： A61K38/25

摘要： A method of decreasing patient time in a catabolic state after a traumatic injury. The patient is administered systemically human growth hormone releasing factor or a biologically active analog of human growth hormone releasing factor. Administration in the case of voluntary traumatic injury such as surgery occurs just prior to commencing the surgery and thereafter continuing until recovery. In this way the time in a catabolic state is significantly decreased, and the patient moves more quickly to desired anabolic state necessary for recovery.

摘要翻译： 创伤性损伤后分解代谢状态下患者时间缩短的方法。 患者被系统地施用人生长激素释放因子或人生长激素释放因子的生物活性类似物。 在自愿创伤性损伤（例如外科手术）的情况下，在开始手术之前进行管理，此后继续进行恢复。 以这种方式，分解代谢状态的时间显着降低，并且患者更快地移动到恢复所需的期望的合成代谢状态。

公开(公告)号：US5595887A

公开(公告)日：1997-01-21

申请号：US552810

申请日：1990-07-16

申请人： Thomas R. Coolidge ,  Fred Wagner ,  Gino van Heeke ,  Sheldon M. Schuster ,  Jay Stout ,  Dwane E. Wylie

发明人： Thomas R. Coolidge ,  Fred Wagner ,  Gino van Heeke ,  Sheldon M. Schuster ,  Jay Stout ,  Dwane E. Wylie

IPC分类号： C07K14/575 ,  C07K1/22 ,  C07K7/14 ,  C07K14/00 ,  C07K14/245 ,  C07K14/47 ,  C07K14/585 ,  C07K14/595 ,  C07K19/00 ,  C12N1/21 ,  C12N9/14 ,  C12N9/88 ,  C12N15/09 ,  C12N15/62 ,  C12P21/00 ,  C12R1/19 ,  C12P21/04 ,  C12P21/06

CPC分类号： C12N9/14 ,  C07K14/245 ,  C07K14/47 ,  C07K14/585 ,  C07K14/595 ,  C07K7/14 ,  C12N15/62 ,  C12N9/88 ,  C07K2319/00 ,  C07K2319/50 ,  C07K2319/75

摘要： Methods are presented for producing and purifying a variable fusion polypeptide which can be purified by affinity chromatography with the binding protein partner. The variable fusion polypeptide construct has tandem coupled segments containing one or more copies of a desired peptide linked to carbonic anhydrase as the purification binding protein. In the methods, the fusion protein is expressed in a recombinant host using a recombinant vector containing a gene encoding the fusion polypeptide. Then the expressed fusion polypeptide is purified by immobilized reversible inhibitor affinity chromatography. Finally, the purified fusion polypeptide is cleaved from the desired peptides by chemical or enzymatic means and the desired peptides purified with affinity chromatography.

摘要翻译： 提供了用于产生和纯化可通过用结合蛋白配偶体进行亲和层析纯化的可变融合多肽的方法。 可变融合多肽构建体具有串联耦合区段，其含有与碳酸酐酶连接的期望肽的一个或多个拷贝作为纯化结合蛋白。 在该方法中，使用含有编码融合多肽的基因的重组载体，在重组宿主中表达融合蛋白。 然后通过固定的可逆抑制剂亲和层析纯化表达的融合多肽。 最后，通过化学或酶法将纯化的融合多肽从期望的肽切割，并用亲和层析纯化所需的肽。

公开(公告)号：US6127150A

公开(公告)日：2000-10-03

申请号：US927128

申请日：1997-09-05

申请人： Thomas R. Coolidge ,  Fred Wagner ,  Gino van Heeke ,  Sheldon M. Schuster ,  Jay Stout ,  Dwane E. Wylie

发明人： Thomas R. Coolidge ,  Fred Wagner ,  Gino van Heeke ,  Sheldon M. Schuster ,  Jay Stout ,  Dwane E. Wylie

IPC分类号： C07K14/575 ,  C07K1/22 ,  C07K7/14 ,  C07K14/00 ,  C07K14/245 ,  C07K14/47 ,  C07K14/585 ,  C07K14/595 ,  C07K19/00 ,  C12N1/21 ,  C12N9/14 ,  C12N9/88 ,  C12N15/09 ,  C12N15/62 ,  C12P21/00 ,  C12R1/19 ,  C12P21/06 ,  A61K38/24 ,  C07K1/00 ,  C12P21/04

CPC分类号： C12N9/14 ,  C07K14/245 ,  C07K14/47 ,  C07K14/585 ,  C07K14/595 ,  C07K7/14 ,  C12N15/62 ,  C12N9/88 ,  C07K2319/00 ,  C07K2319/50 ,  C07K2319/75

摘要： The present invention is directed to a protein purification construct having three tandem, coupled segments composed of a binding protein, an interconnecting linker and a variable fused polypeptide which incorporates the one or more copies of a product peptide. The binding protein is a mammalian or human carbonic anhydrase, or a modified version of the carbonic anhydrase. The protein purification construct may be employed in methods for expression of the product peptide in microbial and higher organism and for ligand immobilized affinity purification of the product peptide.

摘要翻译： 本发明涉及具有由结合蛋白，互连接头和可变融合多肽组成的三个串联耦合区段的蛋白质纯化构建体，其结合产物肽的一个或多个拷贝。 结合蛋白是哺乳动物或人类碳酸酐酶，或碳酸酐酶的修饰形式。 蛋白质纯化构建体可以用于在微生物和更高级生物体中表达产物肽的方法和用于产物肽的固定化亲和纯化的配体。