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    Intein-mediated protein ligation of expressed proteins
    2.
    发明授权
    Intein-mediated protein ligation of expressed proteins 失效
    表达蛋白质的蛋白质介导的蛋白质连接

    公开(公告)号：US06849428B1

    公开(公告)日：2005-02-01

    申请号：US09249543

    申请日：1999-02-12

    申请人： Thomas C. Evans ,  Ming-Qun Xu ,  Shaorong Chong

    发明人： Thomas C. Evans ,  Ming-Qun Xu ,  Shaorong Chong

    IPC分类号： C12N9/00 ,  C12N15/62 ,  C07K19/00 ,  C12N15/74 ,  C12N15/79

    CPC分类号： C12N9/93 ,  C07K2319/20 ,  C07K2319/21 ,  C07K2319/24 ,  C07K2319/55 ,  C07K2319/92 ,  C12N15/62

    摘要： A method for the ligation of expressed proteins which utilizes inteins, for example the RIR1 intein from Methanobacterium thermotrophicum, is provided. Constructs of the Mth RIR1 intein in which either the C-terminal asparagine or N-terminal cysteine of the intein are replaced with alanine enable the facile isolation of a protein with a specified N-terminal, for example, cysteine for use in the fusion of two or more expressed proteins. The method involves the steps of generating a C-terminal thioester-tagged target protein and a second target protein having a specified N-terminal via inteins, such as the modified Mth RIR1 intein, and ligating these proteins. A similar method for producing a cyclic or polymerized protein is provided. Modified inteins engineered to cleave at their C-terminus or N-terminus, respectively, and DNA and plasmids encoding these modified inteins are also provided.

    摘要翻译： 提供了利用内含肽表达的蛋白质的连接方法，例如来自热嗜热杆菌的RIR1内含肽。 第三RIR1内含肽的构建体，其中内含肽的C末端天门冬酰胺或N-末端半胱氨酸被丙氨酸取代，能够容易地分离具有指定N-末端的蛋白质，例如半胱氨酸用于融合 两种或更多表达的蛋白质。 该方法包括产生C-末端硫酯标记的靶蛋白和通过内含肽（例如经修饰的第M RIR1内含肽）具有特定N-末端的第二靶蛋白并连接这些蛋白质的步骤。 提供了用于生产环状或聚合蛋白质的类似方法。 还提供了修饰的内含肽，分别设计用于在其C末端或N末端切割，以及编码这些修饰的内含肽的DNA和质粒。

    Intein mediated peptide ligation
    5.
    发明授权
    Intein mediated peptide ligation 失效
    蛋白介导的肽连接

    公开(公告)号：US07001745B1

    公开(公告)日：2006-02-21

    申请号：US09786009

    申请日：1999-09-30

    申请人： Ming-Qun Xu ,  Thomas C. Evans

    发明人： Ming-Qun Xu ,  Thomas C. Evans

    IPC分类号： C12P21/04 ,  C12P21/06 ,  C12N15/63 ,  C12N15/74 ,  C12N15/79

    CPC分类号： C12P21/02 ,  C07K14/32 ,  C07K2319/92

    摘要： The present invention provides methods that utilize compositions containing colostrinin, an constituent peptide thereof, an active analog thereof, and combinations thereof, as an oxidative stress regulator.

    摘要翻译： 提供了一种用于产生半合成融合蛋白的体外方法，其中与内蛋白 - 蛋白质剪接元件融合的靶蛋白在图1所示的第一步中用硫醇试剂选择性地切割，形成羧基末端硫酯 的靶蛋白，并从内含肽释放靶蛋白。 在如图1所示的随后步骤中，将具有氨基末端半胱氨酸的所需的合成的蛋白质或肽连接到靶蛋白质上。 在第一步中可以使用标准硫醇试剂如DTT或为连接而优化的硫醇试剂，例如无味的MESNA。 该方法允许期望的肽直接连接已连接目标蛋白质与内含肽的硫酯键。 该方法的体内变异将允许产生细胞毒性蛋白质：在体内引入与内含肽融合的截短的，无活性的形式的蛋白质，然后选择性地切割该融合产物，随后连接合成的蛋白质或肽 在靶蛋白的羧基末端硫酯上，以恢复cxtotoxic蛋白的天然活性。

    Repair of nucleic acids for improved amplification
    6.
    发明授权
    Repair of nucleic acids for improved amplification 有权
    修复核酸以改善扩增

    公开(公告)号：US08158388B2

    公开(公告)日：2012-04-17

    申请号：US11401826

    申请日：2006-04-11

    申请人： Thomas C. Evans ,  Lixin Chen ,  Chudi Guan ,  Rebecca Kucera ,  Barton Slatko ,  Romualdas Vaisvila

    发明人： Thomas C. Evans ,  Lixin Chen ,  Chudi Guan ,  Rebecca Kucera ,  Barton Slatko ,  Romualdas Vaisvila

    IPC分类号： C12P19/34

    CPC分类号： C12Q1/6844 ,  C12P19/34 ,  C12Q1/6848 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2521/101 ,  C12Q2521/501 ,  C12Q2521/331 ,  C12Q2521/301 ,  C12Q2521/514

    摘要： Methods and compositions are provided for repairing a polynucleotide so that it can be copied with improved fidelity and/or yield in, for example, an amplification reaction. This involves the use of a reaction mixture that includes a ligase and a cofactor selected from NAD+ or ATP and incubating the polynucleotide with the reaction mixture in the absence of Endonuclease VI.The reaction mixture may further contain an AP endonuclease and a polymerase. If used, these enzymes may be selected according to their ability to withstand high temperatures. For example, the reaction mixture may be used prior to a polynucleotide synthesis reaction in which case enzymes that are not thermophilic may be used. The repair reaction is not time sensitive with respect to seconds, minutes or hours of incubation in the enzyme mixture in as much as the repair is effected rapidly and prolonged incubation is not generally adverse.

    摘要翻译： 提供了用于修复多核苷酸的方法和组合物，使得其可以在例如扩增反应中以改进的保真度和/或产率复制。 这包括使用包含连接酶和选自NAD +或ATP的辅因子并在不存在核酸内切酶VI的情况下将多核苷酸与反应混合物一起温育的反应混合物。 反应混合物还可以含有AP内切核酸酶和聚合酶。 如果使用，这些酶可以根据其耐受高温的能力来选择。 例如，反应混合物可以在多核苷酸合成反应之前使用，在这种情况下可以使用不是嗜热的酶。 维修反应对于酶混合物中的几秒钟，几分钟或几小时的孵育时间并不敏感，只要修复迅速进行并且延长的孵育通常不是不利的。

    Repair of nucleic acids for improved amplification
    7.
    发明授权
    Repair of nucleic acids for improved amplification 有权
    修复核酸以改善扩增

    公开(公告)号：US07700283B2

    公开(公告)日：2010-04-20

    申请号：US11255290

    申请日：2005-10-20

    申请人： Thomas C. Evans ,  Barton Slatko ,  Lixin Chen ,  Romaldas Vaisvila ,  Chudi Guan

    发明人： Thomas C. Evans ,  Barton Slatko ,  Lixin Chen ,  Romaldas Vaisvila ,  Chudi Guan

    IPC分类号： C12Q1/68

    CPC分类号： C12Q1/686 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/6848 ,  C12Q2521/501 ,  C12Q2521/301 ,  C12Q2521/514 ,  C12Q2521/101 ,  C12Q2521/331

    摘要： Methods and compositions are provided for repairing a polynucleotide so that it can be synthesized efficiently with improved fidelity and yield in, for example, an amplification reaction. This involves the use of a reaction mixture that includes a ligase and a cofactor selected from NAD+ or ATP and incubating the polynucleotide with the reaction mixture in the absence of Endonuclease VI.The reaction mixture may further contain an AP endonuclease and a polymerase. These enzymes are optionally selected according to their ability to withstand high temperatures so they can be included in an amplification mixture. The reaction mixture may be used prior to a polynucleotide synthesis reaction in which case enzymes that are not thermophilic may be used. The repair reaction is not time sensitive with respect to seconds, minutes or hours of incubation in the enzyme mixture.

    摘要翻译： 提供了用于修复多核苷酸的方法和组合物，使得其可以在例如扩增反应中以提高的保真度和产率被有效地合成。 这包括使用包含连接酶和选自NAD +或ATP的辅因子并在不存在核酸内切酶VI的情况下将多核苷酸与反应混合物一起温育的反应混合物。 反应混合物还可以含有AP内切核酸酶和聚合酶。 这些酶根据其耐受高温的能力任选地进行选择，因此它们可以被包括在扩增混合物中。 反应混合物可以在多核苷酸合成反应之前使用，在这种情况下可以使用不是嗜热的酶。 相对于在酶混合物中孵育的秒，分钟或数小时，修复反应不是时间敏感的。

    Compositions and Methods Relating to Variant DNA Polymerases and Synthetic DNA Polymerases
    8.
    发明申请
    Compositions and Methods Relating to Variant DNA Polymerases and Synthetic DNA Polymerases 审中-公开
    关于变体DNA聚合酶和合成DNA聚合酶的组合物和方法

    公开(公告)号：US20130260422A1

    公开(公告)日：2013-10-03

    申请号：US13823811

    申请日：2012-08-31

    申请人： Jennifer Ong ,  Thomas C. Evans ,  Nathan Tanner

    发明人： Jennifer Ong ,  Thomas C. Evans ,  Nathan Tanner

    IPC分类号： C12N9/12

    CPC分类号： C12N9/1276 ,  C12N9/1252 ,  C12P19/34

    摘要： Compositions of novel polymerase variants and methods of identifying, making and using these novel polymerases are described. The variants have been shown to have advantageous properties such as increased thermostability, deoxyuridine nucleoside triphosphate tolerance, salt tolerance, reaction speed and/or increased reverse transcriptase properties. Uses for these improved enzymes have been demonstrated in isothermal amplification such as LAMP. Enhanced performance resulting from the use of these variants in amplification has been demonstrated both in reaction vessels and in dedicated automated amplification platforms.

    摘要翻译： 描述了新型聚合酶变体的组成和鉴定，制备和使用这些新型聚合酶的方法。 已经显示出这些变体具有有利的性质，例如增加的热稳定性，脱氧尿苷核苷三磷酸耐受性，耐盐性，反应速度和/或增加的逆转录酶性质。 已经在诸如LAMP的等温扩增中证明了这些改进的酶的用途。 在扩增中使用这些变体导致的增强的性能已经在反应容器和专用自动化扩增平台中得到证实。

    SYSTEMS AND METHODS FOR PROVISIONING AND ALLOCATING A COMMODITIZED SPECTRUM OBJECT
    9.
    发明申请
    SYSTEMS AND METHODS FOR PROVISIONING AND ALLOCATING A COMMODITIZED SPECTRUM OBJECT 有权
    提供和分配商品光谱对象的系统和方法

    公开(公告)号：US20130035124A1

    公开(公告)日：2013-02-07

    申请号：US13549761

    申请日：2012-07-16

    申请人： Jeffrey C. Schmidt ,  Thomas C. Evans ,  Hrishikesh Gossain ,  Manish Shukla

    发明人： Jeffrey C. Schmidt ,  Thomas C. Evans ,  Hrishikesh Gossain ,  Manish Shukla

    IPC分类号： H04B15/00 ,  H04W52/24 ,  H04W72/04

    CPC分类号： H04W28/16

    摘要： A provisioning engine provisions spectrum into an allocable spectrum object. The provisioning engine includes an interface configured to receive inputs of available spectrum information and a plurality of provisioning parameters. The plurality of provisioning parameters include at least one signal strength limit, and may include at least first and second signal strength limits that may be boundary strength limit and an allocation strength limit. A controller is configured to execute a spectrum provisioning application that is stored in a memory and, by execution of the spectrum provisioning application, the provisioning engine is configured to generate an allocable spectrum object in accordance with the provisioning parameters. Spectrum encompassed within the spectrum object is allocable by an allocation engine to spectrum users in accordance with the provisioning parameters. An allocation engine in turn allocates spectrum encompassed within the provisioned spectrum object in accordance with the provisioning parameters.

    摘要翻译： 配置引擎将频谱设置为可分配的频谱对象。 配置引擎包括被配置为接收可用频谱信息的输入和多个供应参数的接口。 多个供应参数包括至少一个信号强度限制，并且可以包括至少第一和第二信号强度限制，其可以是边界强度极限和分配强度极限。 控制器被配置为执行存储在存储器中的频谱配置应用，并且通过执行频谱配置应用，配置引擎被配置为根据供应参数生成可分配频谱对象。 包含在频谱对象内的频谱可以由分配引擎根据供应参数分配给频谱用户。 分配引擎依次根据供应参数来分配包含在所提供的频谱对象内的频谱。

    Locking spring for tubular IC carriers
    10.
    发明授权
    Locking spring for tubular IC carriers 失效
    管状IC载体的锁紧弹簧

    公开(公告)号：US4899876A

    公开(公告)日：1990-02-13

    申请号：US341692

    申请日：1989-04-21

    申请人： Robert H. Murphy ,  Thomas C. Evans ,  Demetrios E. Kapnias

    发明人： Robert H. Murphy ,  Thomas C. Evans ,  Demetrios E. Kapnias

    IPC分类号： H05K13/00

    CPC分类号： H05K13/0084

    摘要： A spring for each end of a tubular carrier to secure them against sliding and slipping within the tube. The spring having a tongue carrying on its tip an upwardly jutting pin which is upwardly resilient. The pin latches into through apertures in the top wall of the carrier and may have a camming means forward of the pin comprising a pair of ramps extending forward and down from the pin and symmetrical about a longitudinal axis.The tongue has a base and in one embodiment extends rearward of the base. In a preferred embodiment the tongue has a base and extends forward of the base. The tongue may have a surround, and in the preferred embodiment the tongue may extend forward of a lower ledge at the rear of the surround.In use, as the spring enters the carrier against a chip, the pin is cammed down. When the spring is compressed against the chip sufficiently, the pin enters an aperture in the top wall of the carrier, and latches the spring. Thus the spring holds the chip firmly in place relative to the carrier and prevents accidental chipping or damage to the chip.

    摘要翻译： 用于管状载体的每个端部的弹簧，以使其抵抗在管内的滑动和滑动。 弹簧具有舌头，在其尖端上具有向上弹性的向上突出的销。 销钉插入到载体的顶壁中的通孔中，并且可以具有在销的前方的凸轮装置，该销包括从销的前后方向延伸的一对斜面，并且围绕纵向轴线对称。 舌头具有基部，并且在一个实施例中延伸到基部的后方。 在优选实施例中，舌部具有基部并且延伸到基部的前方。 舌头可以具有环绕，并且在优选实施例中，舌头可以在环绕的后部从下部突出部的前方延伸。 在使用中，当弹簧以芯片进入托架时，销被向下弯曲。 当弹簧被充分地压靠在芯片上时，销钉进入托架的顶壁中的孔，并锁住弹簧。 因此，弹簧将芯片相对于载体牢固地保持在适当位置，并且防止意外的碎裂或损坏芯片。